医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)

实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪Βιβλιοθήκη 样+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
玻片置于消毒缸中 塑料滴管弃去
ELISA
(酶联免疫吸附试验) Enzyme Linked Immunosorbent Assay
免疫标记技术: 将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结
合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原 或抗体。
免疫标记技术
ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
加酶标二抗
+
-
抗原抗体 复合物
游离
洗涤
+
-
加底物
每孔加底物 A and B 各一滴 混匀， 37 ℃ 10 min
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值 酶标板
思考
ELSA实验中，待测标本是否含有乙 肝表面抗体？为什么？
ABO血型鉴定实验中，待测者的血型 属哪一型？为什么？
血型鉴定在临床中有什么应用？
步骤：
1、加入待检标本50ul； 同时设阴性对照和阳性对照 (分别各加1滴)
go 2、加入酶结合物1滴/每孔，混匀，封板，
37℃30min 3、弃去每孔液体, 用洗涤液洗涤每孔，5秒×5
次， 拍干板
4、每孔加显色液A、B各1滴, 混匀, 37 ℃1015min
5、肉眼观察颜色深浅 （+：蓝色； —：无色）
材料: 抗A和抗B血清, 生理盐水, 载玻片, 采血针等.
实验方法
准备生理盐水管：0.5ml / 管
制备红细胞悬液: 碘酒、酒精消毒无名 指端, 采血, 1或2滴血液滴入生理盐水 管中
载玻片两端分别加抗A, 抗B血清各1滴
载玻片两端分别加红细胞悬液各1滴, 混 匀, 10-15分钟内观察结果