医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
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材料: 抗A和抗B血清, 生理盐水, 载玻片, 采血针等.
实验方法
准备生理盐水管：0.5ml / 管
制备红细胞悬液: 碘酒、酒精消毒无名 指端, 采血, 1或2滴血液滴入生理盐水 管中
载玻片两端分别加抗A, 抗B血清各1滴
载玻片两端分别加红细胞悬液各1滴, 混 匀, 10-15分钟内观察结果
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
玻片置于消毒缸中 塑料滴管弃去
ELISA
(酶联免疫吸附试验) Enzyme Linked Immunosorbent Assay
免疫标记技术: 将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结
合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原 或抗体。
免疫标记技术
步骤：
1、加入待检标本50ul； 同时设阴性对照和阳性对照 (分别各加1滴)
go 2、加入酶结合物1滴/每孔，混匀，封板，
37℃30min 3、弃去每孔液体, 用洗涤液洗涤每孔，5秒×5
次， 拍干板
4、每孔加显色液A、B各1滴, 混匀, 37 ℃1015min
5、肉眼观察颜色深浅 （+：蓝色； —：无色）
ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪
加样
+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
加酶标二抗
+
-
抗原抗体 复合物
游离
洗涤
+
-
加底物
每孔加底物 A and B 各一滴 混匀， 37 ℃ 10 min
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值 酶标板
思考
ELSA实验中，待测标本是否含有乙 肝表面抗体？为什么？
ABO血型鉴定实验中，待测者的血型 属哪一型？为什么？
血型鉴定在临床中有什么应用？
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体源自文库心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验方法
准备生理盐水管：0.5ml / 管
制备红细胞悬液: 碘酒、酒精消毒无名 指端, 采血, 1或2滴血液滴入生理盐水 管中
载玻片两端分别加抗A, 抗B血清各1滴
载玻片两端分别加红细胞悬液各1滴, 混 匀, 10-15分钟内观察结果
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
玻片置于消毒缸中 塑料滴管弃去
ELISA
(酶联免疫吸附试验) Enzyme Linked Immunosorbent Assay
免疫标记技术: 将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结
合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原 或抗体。
免疫标记技术
步骤：
1、加入待检标本50ul； 同时设阴性对照和阳性对照 (分别各加1滴)
go 2、加入酶结合物1滴/每孔，混匀，封板，
37℃30min 3、弃去每孔液体, 用洗涤液洗涤每孔，5秒×5
次， 拍干板
4、每孔加显色液A、B各1滴, 混匀, 37 ℃1015min
5、肉眼观察颜色深浅 （+：蓝色； —：无色）
ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)
凝集反应
原理:
颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并 在一定条件下形成肉眼可见的凝集物。
应用：检测未知Ag或Ab
分类：
1.直接凝集反应： 玻片法---ABO血型鉴定、菌种鉴定
试管法---肥达反应
2.间接凝集反应
ABO血型测定
实验目的: 检测待测者ABO血型
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪
加样
+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
加酶标二抗
+
-
抗原抗体 复合物
游离
洗涤
+
-
加底物
每孔加底物 A and B 各一滴 混匀， 37 ℃ 10 min
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值 酶标板
思考
ELSA实验中，待测标本是否含有乙 肝表面抗体？为什么？
ABO血型鉴定实验中，待测者的血型 属哪一型？为什么？
血型鉴定在临床中有什么应用？
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体源自文库心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体