输血相容性检测ppt课件
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• 用于IgM抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以 及血型的鉴定。
• 当特异性的IgG类抗A、抗B的浓度足够大时， 在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集 反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决 定簇位置有关。
4
盐水介质凝集试验
• 方法：玻片法-便于显微镜观察结果 试管法-适用于不同温度、便于洗涤
• 反应温度：4～22℃ • 临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有
6
抗人球蛋白试验原理
• IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型 抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后， 在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称 之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭 桥作用则可出现凝集反应。
• 补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活 以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多 克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与 补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球 蛋白试验。
• 原理： 凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有 多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷， 并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异 性凝集。 当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG 抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作 用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分， 再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与 凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消 失，而真正的凝集不会消失。
输血相容性检测
1
内容提要
一 红细胞抗原抗体检测技术 二 抗体的筛选及鉴定 三 交叉配血 四 抗筛和配血结果分析 五 案例分析
2
红细胞抗原抗体检测技术
盐水介质凝集试验 抗人球蛋白试验 酶介质凝集试验 凝聚胺试验 微柱凝胶免疫试验
3
盐水介质凝集试验
• 盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗 体分子上的抗原结合位点结合，交叉联结形 成肉眼可见的凝集。
胞在胶质介质中的位置肉眼判断。
17
微柱凝胶试验
• 特异性胶：抗A、 抗B、抗D
• 中性胶：对照孔、 反定型
• 抗人球蛋白胶： 抗筛、交叉配血
18
几种方法的比较
方法
盐水法
抗球蛋 白法 酶法
凝聚胺 法
优点
操作方便,费用低廉
检测不完全抗体最灵敏 的方法 增强Rh 、Kidd系统
方便、应用最广
缺点
只能检出不相配合完全抗体,不能检 出不相配合的不完全抗体
21
结果的判读与解释
• 溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反 应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无 凝集。
• 记录结果，并与以前结果对照。 • 抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义
的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应 的抗体，可能被漏检。
22
抗体鉴定
• 通过筛选，抗体一经检出，应进一步作抗体鉴 定试验，以确定其特异性。
• 主侧：受血者血清+供者红细胞 检测对供者红细胞起反应的抗体
• 次侧：受血者红细胞+供者血清 检测对受者红细胞起反应的抗体
• 自身对照：受血者红细胞+受血者血清 排除自身抗体、直接抗球蛋白试 验阳性及红细胞缗钱状凝集
7
直接抗人球蛋白试验
• DAT是检测体内致敏红细胞的一种方法，用于 检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，尤其 是IgG和C3d包被的红细胞。
应用： • HDN和自身免疫性溶血性贫血的诊断 • 红细胞被药物抗体致敏的检查 • 急性和迟发性溶血性输血反应的检查
8
9
间接抗人球蛋白试验
• IAT是检测血清中不完全抗体的一种，用于测 定在体外能引起红细胞致敏的抗体。
胶法 复性好、特异性好、检
Fra Baidu bibliotek
测结果可较长时间保存
19
抗体的筛选及鉴定
• 有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、 引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞 存活期减少的在37℃有反应的同种异型抗体
• 不规则抗体：抗A，抗B以外的抗体 • 包括：同种抗体和自身抗体
20
抗体筛选方法
• 盐水介质凝集法 • 抗人球蛋白法 • 凝聚胺法 • 微柱凝胶法
活性的抗体有意义。室温有活性，37℃无活性 者临床意义不大。 • 优点：简便、快捷、直观。 缺点：不能发现不完全抗体。
5
抗人球蛋白试验
• 抗人球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立 的，又称Coombs试验。抗人球蛋白试验的 建立在血型血清学上有着非常重要的意义。
• 分为直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗 人球蛋白试验（IAT）。
• ①自身细胞检查 - 排除非特异性 ②谱红细胞检查
23
抗体鉴定
• 谱红细胞： 一般是由8-16人份的已知血型表现型O型红细 胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱 红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。
• 方法： 在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、 酶技术及抗人球蛋白实验。
24
交叉配血
• 常用的酶（0.5%）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、 无花果酶
12
酶介质凝集试验
• 优点： 酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性， Rh和Kidd系统最明显
• 缺点： ①酶法处理RBC，蛋白酶会使RBC的抗原结构破 坏和变性（M、N、Fya、Fyb） ②操作繁复，少数人对酶液过敏
13
凝聚胺试验
操作复杂、不利于急诊检查和血库的 大批量工作
破坏M、N、S、s、Fy(a) 、Fy(b)抗原 结构,易失活,寿命短,反应时间长
Kell系统部分抗体如抗K 、抗 kp(a) 、 抗kp(b)检测不出,需要抗球蛋白试验. 且肝素对其有影响,易引起假阴性.
国际安全输血检查的推
微柱凝 荐方法，灵敏度高、重 费用高
应用： • 血型的鉴定，如Rh血型 • 抗体的检出和鉴定 • 交叉配血
10
11
酶介质凝集试验
• 原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电 荷，是红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能 消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电 荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之 间的间距，使IgG抗体分子能与有相应抗原的 红细胞产生凝集
14
15
微柱凝胶试验
• 原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做 成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。 抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用， 红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝 胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙， 沉积到底部。
16
微柱凝胶免疫反应的本质：凝集反应 • 红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细
• 当特异性的IgG类抗A、抗B的浓度足够大时， 在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集 反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决 定簇位置有关。
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盐水介质凝集试验
• 方法：玻片法-便于显微镜观察结果 试管法-适用于不同温度、便于洗涤
• 反应温度：4～22℃ • 临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有
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抗人球蛋白试验原理
• IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型 抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后， 在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称 之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭 桥作用则可出现凝集反应。
• 补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活 以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多 克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与 补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球 蛋白试验。
• 原理： 凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有 多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷， 并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异 性凝集。 当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG 抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作 用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分， 再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与 凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消 失，而真正的凝集不会消失。
输血相容性检测
1
内容提要
一 红细胞抗原抗体检测技术 二 抗体的筛选及鉴定 三 交叉配血 四 抗筛和配血结果分析 五 案例分析
2
红细胞抗原抗体检测技术
盐水介质凝集试验 抗人球蛋白试验 酶介质凝集试验 凝聚胺试验 微柱凝胶免疫试验
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盐水介质凝集试验
• 盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗 体分子上的抗原结合位点结合，交叉联结形 成肉眼可见的凝集。
胞在胶质介质中的位置肉眼判断。
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微柱凝胶试验
• 特异性胶：抗A、 抗B、抗D
• 中性胶：对照孔、 反定型
• 抗人球蛋白胶： 抗筛、交叉配血
18
几种方法的比较
方法
盐水法
抗球蛋 白法 酶法
凝聚胺 法
优点
操作方便,费用低廉
检测不完全抗体最灵敏 的方法 增强Rh 、Kidd系统
方便、应用最广
缺点
只能检出不相配合完全抗体,不能检 出不相配合的不完全抗体
21
结果的判读与解释
• 溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反 应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无 凝集。
• 记录结果，并与以前结果对照。 • 抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义
的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应 的抗体，可能被漏检。
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抗体鉴定
• 通过筛选，抗体一经检出，应进一步作抗体鉴 定试验，以确定其特异性。
• 主侧：受血者血清+供者红细胞 检测对供者红细胞起反应的抗体
• 次侧：受血者红细胞+供者血清 检测对受者红细胞起反应的抗体
• 自身对照：受血者红细胞+受血者血清 排除自身抗体、直接抗球蛋白试 验阳性及红细胞缗钱状凝集
7
直接抗人球蛋白试验
• DAT是检测体内致敏红细胞的一种方法，用于 检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，尤其 是IgG和C3d包被的红细胞。
应用： • HDN和自身免疫性溶血性贫血的诊断 • 红细胞被药物抗体致敏的检查 • 急性和迟发性溶血性输血反应的检查
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间接抗人球蛋白试验
• IAT是检测血清中不完全抗体的一种，用于测 定在体外能引起红细胞致敏的抗体。
胶法 复性好、特异性好、检
Fra Baidu bibliotek
测结果可较长时间保存
19
抗体的筛选及鉴定
• 有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、 引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞 存活期减少的在37℃有反应的同种异型抗体
• 不规则抗体：抗A，抗B以外的抗体 • 包括：同种抗体和自身抗体
20
抗体筛选方法
• 盐水介质凝集法 • 抗人球蛋白法 • 凝聚胺法 • 微柱凝胶法
活性的抗体有意义。室温有活性，37℃无活性 者临床意义不大。 • 优点：简便、快捷、直观。 缺点：不能发现不完全抗体。
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抗人球蛋白试验
• 抗人球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立 的，又称Coombs试验。抗人球蛋白试验的 建立在血型血清学上有着非常重要的意义。
• 分为直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗 人球蛋白试验（IAT）。
• ①自身细胞检查 - 排除非特异性 ②谱红细胞检查
23
抗体鉴定
• 谱红细胞： 一般是由8-16人份的已知血型表现型O型红细 胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱 红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。
• 方法： 在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、 酶技术及抗人球蛋白实验。
24
交叉配血
• 常用的酶（0.5%）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、 无花果酶
12
酶介质凝集试验
• 优点： 酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性， Rh和Kidd系统最明显
• 缺点： ①酶法处理RBC，蛋白酶会使RBC的抗原结构破 坏和变性（M、N、Fya、Fyb） ②操作繁复，少数人对酶液过敏
13
凝聚胺试验
操作复杂、不利于急诊检查和血库的 大批量工作
破坏M、N、S、s、Fy(a) 、Fy(b)抗原 结构,易失活,寿命短,反应时间长
Kell系统部分抗体如抗K 、抗 kp(a) 、 抗kp(b)检测不出,需要抗球蛋白试验. 且肝素对其有影响,易引起假阴性.
国际安全输血检查的推
微柱凝 荐方法，灵敏度高、重 费用高
应用： • 血型的鉴定，如Rh血型 • 抗体的检出和鉴定 • 交叉配血
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11
酶介质凝集试验
• 原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电 荷，是红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能 消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电 荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之 间的间距，使IgG抗体分子能与有相应抗原的 红细胞产生凝集
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微柱凝胶试验
• 原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做 成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。 抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用， 红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝 胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙， 沉积到底部。
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微柱凝胶免疫反应的本质：凝集反应 • 红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细