果蔬实验

苹果出库后生理指标比较测定

——果蔬采后生理设计性实验

摘要：将红富士苹果进行0.2%的乙烯利喷施处理并放在4℃冰箱内冷藏一星期后，并以4℃冷藏但未经乙烯利处理的相同的苹果进行对照。在一定条件下的呼吸强度、可滴定酸含量、细胞膜渗透率（电导率）、多酚氧化酶(PPO)活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性等生理指标进行了测定。其结果为呼吸强度有所降低、可滴定酸含量降低、电导率增强、多酚氧化酶(PPO)活性增强、丙二醛(MDA)含量增加、过氧化物酶(POD)活性减弱。果实成熟度大大提高。

关键词：苹果，乙烯利，指标测定，呼吸强度，酶活性

前言：苹果，属于蔷薇科大宗水果，不仅是我国最主要的果品，也是世界上种植最广、产量最多的果品。其味道酸甜适口，营养丰富，具有降低胆固醇含量的功效，还具有通便和止泻的双重功效，以及降低血压的作用等。据测定，每百克苹果含果糖6.5～11.2克，葡萄糖2.5～3.5克，蔗糖1.0～5.2克；还含有微量元素锌、钙、磷、铁、钾及维生素Ｂ1、维生素Ｂ2、维生素Ｃ和胡萝卜素等，故有“智慧果”、“记忆果”、“大夫第一药”的美称。苹果的营养和药用价值由此可窥见一斑。又因苹果所含的营养既全面又易被人体消化吸收，所以，非常适合婴幼儿、老人和病人食用。

1.试验材料与方法

1.1 试验材料与处理

1.1.1 试验材料于处理

采收后运回实验室，并挑选大小均匀、无病虫害和机械损伤的果实，喷洒0.2%的乙烯利以及未喷洒的置于4℃温度储藏的苹果，定期取样测定相关生理和品质指标

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂：

0.2%的乙烯利、0.4mol•L-1的NaOH溶液、Bacl

2

溶液、酚酞、0.1mol•L草酸溶

液、蒸馏水、0.2 mol·L-1 pH=6.2 Na

2HPO

4

-NaH

2

PO

4

缓冲液、0.1 mol·L-1邻苯二

酚、5%三氯乙酸（TCA）、0.5%硫代巴比妥酸、2.0% H

2O

2

、0.1 mol·L-1愈创木

酚。

1.2.2 仪器：

冰箱、移液管、吸耳球、培养皿、干燥器、三角瓶、刀片、烧杯、电导测定仪、研钵、离心机、恒温水浴锅、分光光度仪、打孔器、锥形瓶、电子秤、试管、容量瓶、酸式滴定管、碱式滴定管

1.3 测定方法

1.3.1 呼吸强度测定

采用静止法。吸取0.4mol•L-1的NaOH溶液25ml于培养皿中，立即放入干燥器中，把已称重的果实（约1kg）放到干燥器中的隔架上，密封并保持20min后，

吸取10mLNaOH转移到三角瓶中，再加入1.0ml的Bacl

2

溶液和两滴酚酞，用以标定好的0.1mol•L-1的草酸溶液滴定至终点，以不放样品的空白组为对照，每个

样品重复三组，操作同上。呼吸强度的单位表示为mgCO

2

•kg-1•h-1。按下式计算：

呼吸强度（mgCO

2•kg-1•h-1）=0.1×（V

样品

-V

空白

）×44×25/（w×1/5）

结果显示：通过对4℃贮藏和乙烯利处理的苹果呼吸强度的测定，未处理的呼吸强度高于处理的。

1.3.2 可滴定酸含量的测定

采用滴定法。取果肉10.0g(W)，蒸馏水匀浆并定容至100ml。浸提10min 后，取40ml至锥形瓶中，滴入酚酞指示剂两滴，用0.1mol•L-1NaOH标准溶液滴定，至出现微红色30s不退色为终点，记下所消耗NaOH标准溶液的体积。重复测定3次。按下式计算：

有机酸含量(%)=V×0.0067×100×100/(40×W)

V—消耗NaOH标准溶液的体积

0.0067—1ml 0.1mol•L-1氢氧化钠相当于0.0067g苹果酸

结果显示：乙烯利处理的苹果产生的有机酸含量低于未处理的。 1.3.3 细胞膜渗透率的测定

随机取6个苹果，打孔，切取厚1.5mm 果肉小片，混匀，放入2个小烧杯中，每杯20片。用蒸馏水冲洗烧杯中的样品3次，加入20ml 蒸馏水，室温静置20min 后测定电导率(T1)，然后将烧杯放在电炉上煮沸5min ，冷却后测量电导率(T2)。计算细胞膜相对透性。按下式计算：

细胞膜相对透性(%)= （T1/ T2）×100%

结果显示：乙烯利处理的苹果细胞膜相对透性高于未处理的，可以看出经喷洒乙烯利的苹果货架期短于未处理的。 1.2.4 多酚氧化酶(PPO)活性测定

称取果肉3.0 g 加8.0 ml0.2 mol ·L -1 pH=6.2 Na 2HPO 4-NaH 2PO 4缓冲液研磨匀浆，于4500 rpm 离心10 min 后，取上清液1.0 ml 加4.5 ml 缓冲液和0.5 ml 0.1 mol ·L -1

邻苯二酚震荡摇匀，于37 o

C 水浴恒温反应10 min ，取出立即加入5%三氯乙酸0.5ml ，冷却后测其525 nm 吸光度。以反应前加入5%三氯乙酸0.5ml 做空白对照（即取上清液1.0ml 后直接加入5%三氯乙酸0.5ml ，后续操作相同）。以每分钟内吸光度变化0.01为1个PPO 活力单位（U ）。

计算方法：

01

.0)(1⋅⋅⋅⋅⋅=

-T V W V A gFW U PPO S T

活性

A ：样品管在525 nm 的吸光度； V T ：提取酶液总体积，ml ； W ：样品鲜重，g ； V S ：测定用酶液体积，ml ； T ：反应时间，min ；

结果显示：乙烯利处理的苹果PPO 活性高于未处理的，说明喷洒乙烯利的苹果不利于苹果的货架期。 1.2.5 丙二醛(MDA)含量测定

称取果肉2.0 g 加8.0 ml 5.0%三氯乙酸研磨匀浆，于4500 r ·min -1离心10 min ，取上清夜4.0 ml 加入试管中，再加等量（4ml ）0.5%硫代巴比妥酸混匀，于沸水浴恒温反应15 min ，冷却后在450 nm 、532 nm 、600 nm 处比色。以5.0%三氯乙酸代替酶液管作空白对照。

计算方法：

()[]1

4506005321599.0452.6)(V W V A A A gFW mmol MDA T

⋅⋅⋅⋅⋅--=

-含量

A 532 、A 600、 A 450：对应波长下反应液的吸光度；

V T ：提取液总体积，ml ； W ：样品鲜重，g ；

V 1：测定用提取液液体积，ml ；

结果显示：乙烯利处理的苹果丙二醛含量高于未处理的 1.2.6 过氧化物酶(POD)活性测定

称取果肉3.0 g 加8.0 ml0.2 mol ·L -1 pH=6.2 Na 2HPO 4-NaH 2PO 4缓冲液研磨匀浆，于4500 rpm 离心10 min 后，取上清夜1.0 ml 混合1.0 ml 2.0% H 2O 2与1.0 ml 0.1 mol ·L -1愈创木酚及2.0 ml 缓冲液于试管中震荡摇匀，于37 o C 水浴恒温反应10 min ，取出试管立即加入5%三氯乙酸0.5ml ，混合后立即测定混合液470 nm 的吸光度。以反应前加入5%三氯乙酸0.5ml 做空白对照（即取上清液1.0ml 后直接加入5%三氯乙酸0.5ml ，后续操作相同）。