黏质红酵母的鉴定及链格孢菌抑菌机制的研究

黏质红酵母的鉴定及链格孢菌抑菌机制的研究

蔡文韬;夏延斌;夏菠;易有金;任佐华

【摘要】从柿子椒中分离得到一株具有抑菌效果的革兰氏阳性红酵母属菌株,经16SrDNA序列分析,该菌株鉴定为黏质红酵母.对该菌株的菌液乙酸乙酯提取物和75％乙醇沉淀物的抑菌机制进行研究,结果表明:其75％乙醇沉淀物和乙酸乙酯提取物对茄科链格孢菌产孢、萌发和菌丝的生长等方面都具有较好的抑菌效果,将其应用于食品(辣椒、番茄)防腐上也有一定的效果,乙酸乙酯提取液浓度为100

mg/mL时,辣椒腐烂率下降了51.879％,番茄腐烂率下降了58.47％,75％乙醇沉淀提取液浓度为100 mg/mL时,辣椒腐烂率下降了47.5％,番茄腐烂率下降了

50.47％.strain-39菌液75％乙醇沉淀物和乙酸乙酯提取物经过不同酸碱和温度处理后,抑菌效果存在差异,紫外诱变处理后对链格孢菌抑菌效果基本没有影响.%An endophytic antagonistic fungi was isolated from bell pepper was partially sequenced, the antagonistic fungi was identified to Rhodotorula mucilaginosa by using 16SrDNA sequence analysis, the fermentation liquid of strain-39 were extracted with ethyl aceta and 75% ethanol sediment, The results show that 75% ethanol sediment and ethyl acetate extract produced from strain-39 had a good antibacterial effect on Alternaria alternata mycelial growth, spores bearing and germi-nation, it also had a significant inhibitory effect on the food (pepper, tomato), when the concentration of ethyl acetate extract was 100 mg/mL, the decay rates of peppers and tomatos were reduced by 51.897% and 58.47%, the concentration of 75% ethanol sediment was 100 mg/mL,the decay rates of peppers and tomatoes were reduced by 47.51% and 50.47%. Growth

inhibition rate had significant difference between 75% ethanol sediment and ethyl acetate extract at various pH(2～12) and different temperature treatment, it had no difference at ultraviolet treatment.

【期刊名称】《食品与机械》

【年(卷),期】2013(029)002

【总页数】7页(P54-59,76)

【关键词】黏质酵母菌;链格孢菌;乙酸乙酯提取物;抑菌机制;75％乙醇沉淀物

【作者】蔡文韬;夏延斌;夏菠;易有金;任佐华

【作者单位】湖南农业大学,湖南长沙410128

【正文语种】中文

链格孢菌是茄科植株中危害较大的病害之一。该病不仅发生在田间，更是采后贮藏过程中的重要性病害，可侵染番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科类果蔬[1，2]，侵害途径主要是通过气孔、皮孔、伤口或表皮侵入果实，在适宜条件下产生大量孢子，对果实造成严重危害[3]。目前主要采用化学法进行防治，但是长期使用化学农药

不仅会造成环境污染，也会使得病原菌的抗药性增强[4]，果蔬上残留的农药也会

对人体健康产生危害[5，6]。因此，利用生物法进行果蔬采后病害防控，得到越来越多的关注。

植物内生菌是一类适宜在植物体内生长的微生物，一般具有较高的安全性，其中部分菌株具有潜在的抗病菌的能力[7]。近年来，利用植物内生细菌防治植物土传病

的研究已取得较大进展。但是对利用微生物进行果蔬采后保鲜方面的研究甚少，且

多数集中在细菌如枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等生物防治方面，并取得了较好的成果。刘杰凤等[8]从番茄、辣椒、茄子中分离出14株对青枯病有较强抑制作用的内生细菌；何红[9]，邱思鑫[10]等报道了内生芽孢杆菌(Bacillus sp.)对辣椒疫霉引起的辣椒苗和果疫病有良好的防治效果；阿里马斯等[11]报道了放线菌对辣椒疫霉菌和炭疽病防治效果，但是关于内生真菌用于茄科链格孢菌的生防研究未见报道。另外由于这些微生物主要源于土壤、果蔬表面，易受外界因素的影响，导致防治效果不稳定，极大地影响了拮抗菌的实用价值。因此植物内生菌的活性物质的提取及其环境稳定性的研究在生物防治和果蔬采后处理已成为研究的热点。本试验从湖南省长沙县果蔬中心采集的柿子椒中筛选到了链格孢菌的拮抗真菌，通过16SrDNA 序列分析对该菌株进行了鉴定，为黏质酵母菌。用乙酸乙酯和无水乙醇对黏质酵母菌发酵液抗菌物质进行提取，并进行活性稳定性测试和防腐应用研究，以期为食品防腐寻求新的技术途径，使内生菌代谢产物成为果蔬采后微生物抑制剂和作为天然杀菌剂具有广泛应用前景和开发潜能。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

Strain-39菌：由本实验室从柿子椒果肉中分离得到；

链格孢菌：由湖南农业大学微生物实验中心提供。

1.2 Strain-39分子鉴定

参照文献[12]、[13]进行16SrDNA分子鉴定，PCR产物直接测序由上海美吉生物医药科技有限公司完成。得到的序列运用Clust X软件校准排齐后，在GenBank

数据库中进行BLAST（/blast/）同源性比对分析。以16SrDNA的序列同源性大于99%为标准进行属种归类。然后在对待测菌株与

模式菌株16SrDNA序列利用程序MEGA3.1中的Neighbor-Joining法构建系统发育树，进一步进行种属鉴定[14]。