凡纳滨对虾对哈维氏弧菌不同攻毒方式的响应

凡纳滨对虾对哈维氏弧菌不同攻毒方式的响应

樊英;许拉;王晓璐;李乐;盖春蕾;于晓清;李天保;叶海斌

【摘要】Litopenaeus vannamei with 3.5 cm body length was infected by Vibrio harveyi with the methods of injection and dipping, the accumulative mortalities within 7 days were investigated.The change of gut histological structure and the dynamics of Vibrio num-ber in the gut were studied by tissue slice. The results showed that the accumulative mortality of

L.vannamei in high concentration (107CFU·mL-1) dipping treatment was the highest with about 68%;while t hat in high concentration(107CFU·mL-1) injection treatment was about 62%. The Vibrio number in the gut of

L.vannamei infected increased significantly,the increase in dipping treat-ment was earlier and larger than that in injection treatment;the Vibrio number in the gut decreased and stabilized over time. The gut histological structure of L.vannamei infected was damaged seriously within a short time in the treatment of high concentration with the epithelial cells degraded and collapsed,mucosal folds exfoliated, as well as the muscular layer damaged, which were not repaired during the test.%通过注射和浸浴2种方式,使体长约3.5 cm的凡纳滨对虾感染哈维氏弧菌,测定7 d内各组对虾死亡率;通过组织切片探究肠道组织结构变化,并对肠道内容物中弧菌数量进行监测.结果表明:高浓度(107CFU·mL-1)浸浴组的对虾死亡率最高,约68%;高浓度

(107CFU·mL-1)注射组对虾死亡率约62%.被感染的对虾肠道中弧菌数量明显增多,浸浴组比注射组弧菌数量增加时间较早且幅度较大;随着时间延长对虾肠道中的弧菌数量发生回落,且趋于稳定.感染哈维氏弧菌后对虾肠道组织受到损伤,2种感染方

式均呈现高浓度处理下短时间内受损加重,上皮细胞溃散,黏膜褶皱处发生不同程度的脱落,肌层发生损伤,且试验期间未能修复.

【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》

【年(卷),期】2018(047)003

【总页数】5页(P342-346)

【关键词】凡纳滨对虾;哈维氏弧菌;攻毒;肠道;组织结构

【作者】樊英;许拉;王晓璐;李乐;盖春蕾;于晓清;李天保;叶海斌

【作者单位】山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,山东省海水养殖病害防治重点实验室,山东青岛266104

【正文语种】中文

【中图分类】S945.4;S917.1

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)隶属于弧菌科弧菌属，是海水中一种常见的病原菌，在海洋环境中分布很广，主要感染虾及鱼类[1-2].通常情况下，哈维氏弧菌是凡纳

滨对虾(Litopenaeus vanname)的正常菌群;在养殖动物自身健康或养殖环境发生

变化的情况下，该菌开始大量繁殖，通过不同方式不同程度地打破宿主微生态平衡，损伤宿主的组织结构.对虾被感染后一般会出现肝胰腺混沌、白鳃、红腿、肌肉白

浊等症状[3].目前发现哈维氏弧菌的致病性相关因子主要为胞外产物(extracellular products, ECP)，包括蛋白酶、溶血素、外毒素、脂多糖等，还与噬菌体介导的毒力基因转移相关[4-7].弧菌的致病过程与对虾生理状态、环境胁迫、菌的攻毒方式

等相关.注射和浸浴是病原学研究中常见的攻毒手段.本文研究凡纳滨对虾在不同浓

度和不同感染途径的哈维氏弧菌作用下，肠道组织形态、肠道弧菌数量及虾体死亡率的变化，为阐明哈维氏弧菌的致病机理提供理论基础.

1 材料与方法

1.1 攻毒对象及养殖条件

健康的凡纳滨对虾来自山东滨州某养殖场，体长约3.5 cm.正式试验前，凡纳滨对虾暂养于塑料桶(85 cm×55 cm×45 cm)内4 d，连续充气，以配合饲料饱食投喂.养殖水体盐度为18‰，水温26 ℃，pH 8.0，亚硝酸盐含量0.01 mg·L-1，氨氮

含量0.01 mg·L-1.随后将凡纳滨对虾随机分组，每组20尾.在攻毒试验前禁食1 d.

1.2 供试菌株及致病性

试验所用攻毒菌株是从某养殖场濒死对虾肝胰腺分离的哈维氏弧菌，由山东省海水养殖病害防治重点实验室分离、保存(命名TCBS-G).通过预试验确定哈维氏弧菌的半致死浓度LD50(7 d)为1.3×107 CFU·mL-1.

将分离纯化的哈维氏弧菌接种于2216e液体培养基，28 ℃培养20 h，通过分光

光度计560 nm(D560 nm)比浊测定后备用.将供试菌液(1.8×107 CFU·mL-1)300 mL加入20 L水体中，浸泡20尾试验对虾，对照组为同体积无菌生理盐水.浸泡

12 h后捞出试验对虾，彻底换水，健康养殖条件下暂养4 d，每天观察对虾被感

染后的发病与死亡情况，以濒死对虾重新分离到原感染菌为致病性判定指标.