病毒感染的诊断与防治ppt 第26章立讲义克次氏体和衣原体

引物R17-1、-2在65℃条件下能扩增普氏和莫 氏立克次体 DNA。在琼脂凝胶上产生一条 340bp的核酸带；
引物R169-1、-2仅能扩增普氏立克次体DNA， 产生一条432bp的核酸带。两种引物同时使 用，扩增后普氏可产生340bp和432bp两条带， 而莫氏只产生340bp一条带。
该法敏感性可达0．05ngDNA水平，重复性 好，操作方便，对两型立克次体早期、鉴别 诊断以及自然生态宿主调查研究具有较大价 值。
斑点热病人外斐反应效价通常为OX19高于 OX2，但也有OX2较高者。若仅出现OX2 阳性，则对诊断斑点热有特殊意义。
(2)IFA试验
为现在诊断立克次体病常用的方法。用已知 立克次体抗原(感染鸡胚卵黄囊或细胞培养 悬液)制片，以低稀释度的病人血清初筛， 有呈典型立克次体形态的明亮荧光颗粒者， 判为阳性。再将病程早期及晚期血清分别作 双倍或4倍稀释以测效价，如呈4—8倍增长 者可明确诊断。
(1)免疫荧光检测 用于脏器检查。制备标本片 薄而均匀，组织结构清晰，固定后用荧光抗 体染色, 常见脾、肺及心瓣膜中有立克次体， 也可在肝、肾及皮疹活检组织中检出。
(2)核酸检测 PCR敏感性高，所需样品量只需 ELISA实验的1／5。以编码17kD蛋白的基因 和编码普氏和莫氏立克次体169kD蛋白的基因 作为扩增靶区。
②细胞培养：选鸡胚、成纤维、人羊膜、 HeLa等细胞，接种培养、鉴定后将立克 次体大量繁殖的感染细胞置-70℃储存。
4．抗体检测
立克次体病常用的血清学诊断方法除外斐 反应、间接免疫荧光(IFA )试验、酶联免 疫吸附试验(ELISA)外，还有补体结合(CF) 试验、微量凝集(MA)试验、间接血凝(IHA) 试验、胶乳凝集(LA)试验等 。
(2)鉴定
用免疫荧光法鉴定感染动物脏器、鸡胚卵 黄囊、细胞培养物中的特异性抗原以已知 抗原测定动物恢复期血清中的相应抗体。 必要时用补体结合试验、微量凝集试验等， 作群和种的鉴定。
(3)分离株繁殖及保存
①鸡胚卵黄囊培养 收获卵黄囊，经涂片染 色镜检, 含立克次体较多而又未发现细菌 的卵黄囊膜，或将其作成适当浓度的悬 液置-70℃冰箱保存，或冰冻干燥保藏；
3．分离培养
(1)动物接种
选用健康雄性豚鼠接种以便观察阴囊肿胀现 象。每日测体温，至40℃发热时采血或脏器 悬液、接种鸡胚卵黄囊或细胞培养以分离立 克次体；
感染莫氏立克次体豚鼠在发热1—2日内出现 阴囊红肿，解剖可见腹股沟淋巴结肿大、充 血、脾大2-3倍，有腹水；有阴囊反应者，睾 丸有小出血点，鞘膜充血并有浆液性渗出物 等。鞘膜涂片可查到立克次体。
(1)外斐反应
除Q热、立克次体痘及罗沙利马体感染为阴性 外，其他为阳性。 患者OX凝集素上升较晚，在病程2周左右方出 现阳性，病程中双份血清试验，若效价有4倍 增长，方有诊断意义。
有些病例在病程中效价不见上升，约15％的 经疫苗接种后感染斑疹伤寒的病例。有些 轻症斑疹伤寒或某些发病严重者，其他血 清学试验阳性，但外斐反应可为阴性。
3.有群特异性和种特异性两种抗原。大部分 立克次体与普通变形杆菌X菌株的菌体耐 热多糖抗原有共同的抗原性，故可用这些 菌株代替立克次体抗原进行凝集反应去检 测抗体，这种交叉凝集试验被称为外斐反 应，可供辅助诊断。
外斐反应
立克次体病
变形杆菌 变形杆菌
OX19
OX2
流行性斑疹伤寒 ++++
+ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
地方性斑疹伤寒 ++++
(3)ELISA
检测IgM抗体对早期诊断有价值。
立克次体抗原吸附于载体。泛影葡胺梯度离心纯化 抗原为优，检出血清的抗体效价高，纸上ELISA测 定抗体，方法简便。将感染卵黄囊悬液加于玻片 (经氯仿·甲醇洗净)上，凉干、固定，加稀释血清 于抗原点上，每张玻片上包括阳性和阴性对照，加 酶标兔抗人IgM/G于抗原·血清点作用后，将浸透新 鲜配制的底物无灰滤纸覆盖在玻片上约4-6min，可 见滤纸条上阳性对照点位置显紫棕色，取下滤纸条 (即终止反应)，观察是否显色，与对照比较判定结 果。此法简便，并可保存实验记录。
莫氏立克次体
地方性斑疹伤寒(又称鼠型斑疹伤寒)的病原 体。啮齿类动物是主§宿主，传播媒介是鼠 蚤或鼠虱。
鼠蚤叮咬人体时，常排粪于皮肤上，斑疹伤 寒立克次体从抓破的伤口进入人体。若有人 虱寄生，可通过人虱为传播媒介，继发性地 在人群中传播。
致病物质
有两种，其一是内毒素，主要成分为脂多糖 (LPS)；其二为磷脂酶A,能损伤宿主细胞膜 及溶解胞内吞噬体膜，以利于病原体穿入宿 主细胞并在其中生长。
+
斑点热
++++/+ +/+ +++
恙虫病
-
-
腺热
-
-
变形杆菌 OXk ++++ ++
(三)微生物检验
1.标本采集 (1)病人血液标本：发热期均有立克次体血症，
在急性期较易检出立克次体。争取在用抗生 素前采血，立即床侧接种。 (2)活检或尸检材料：肺、肝、脾、淋巴结、心 瓣膜等标本。
2.标本直接检查
普氏和莫氏立克次体所致的斑疹伤寒症状相 似，以高热、头痛、全身皮疹为主要特征。 伴有神经系统、心血管系统等症状和实质性 器官损伤。
(二)微生物特性
1. 比细菌小，呈多形态性，在感染细胞内聚 集成团,分布在胞质内, Gimenez法染色后 呈红色，外表含有微荚膜结构。
2. 必须在真核细胞内才能生长繁殖，培养时 需要C02。通常采用5-9日龄鸡胚作卵黄囊 接种，于32℃-35℃孵育4～13d内死亡，鸡 胚死亡时间与接种剂量大小呈直接相关。普 氏和莫氏立克次体能在多种单层细胞上生长 繁殖。豚鼠可作立克次体的初代分离。
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病毒感染的诊断与防 治ppt 第26章立克次 氏体和衣原体
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第一节 立克次体
对人致病的立克次体有五个属立克次体属、 柯克斯体属、东方体属、埃立克体属和巴 通体属。
共同特点
①大多是人畜共患病原体，引起人类发热和出 疹性疾病；
②以节肢动物为传播媒介或为储存宿主； ③大小介于细菌与病毒之间，光镜下呈多形态
性，主要为微，杆状或球杆状，革兰阴性； ④除了少数外全是专性活细胞内寄生； ⑤菌体内同时含有DNA和 RNA两类核酸； ⑥以二分裂方式进行繁殖； ⑦对抗生素敏感。
一、斑疹伤寒立克次体
(一)临床意义
1．普氏立克次体是流行性斑疹伤寒(又称虱传 斑疹伤寒)的病原体。 病人是惟一的传染源，体虱是主要传播媒介， 而非储存宿主。 传播方式为虱-人-虱，体虱仅是传染媒介。