动物生物化学实验教程
动物生物化学实验
分子大小的差异，通过凝胶柱时，大分子的
血红蛋白先流下，硫酸铜后流下，由此将其 分开。
三、 实验试剂及器材
1. 样品液：血红蛋白液-碱性硫酸铜溶液按1：1混
和
2.葡聚糖凝胶：Sephadex G-25
3. 洗脱液：蒸馏水
4. 器材：层析柱，洗脱瓶等
四、实验操作
1. 凝胶溶胀
称取一定量的凝胶，浸泡于与洗脱液
5. 洗脱
打开洗脱瓶出口开关，使洗脱液流经凝
胶柱，在柱下出口处用螺旋夹控制流速为
1ml/min，随着洗脱液的流下，可见红、蓝
两部分逐步分开，并流出。
6. 收集
待红色部分接近柱底部时，开始用试管
收集。每管收集2ml，至全部颜色部分都流
出，收集液为无色透明液体时，停止收集。 分别合并红色和蓝色部分的液体，即为已经 分开的血红蛋白和硫酸铜。
五、实验结果及分析
以凝胶层析法的基本原理说明实验中 的现象及结果
其结构如下图：
根据交联度的不同，商品葡聚糖凝胶从 G-10
至G-200共有8种型号(见下表)。G后面的数字是其
吸水量（毫升/克干胶）乘以10而得的值，代表其 孔径大小。交联度大，孔径小，吸水少，交联度 小，孔径大，吸水多。
3. 本实验原理
本实验是凝胶层析法的基本练习。分离
的混和物为碱性硫酸铜和血红蛋白。由于其
示意图如下：
2. 凝胶层析法常用凝胶：
主要有葡聚糖Leabharlann 胶，聚丙烯酰胺凝 胶，琼脂糖凝胶。
葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶是以葡聚糖 (葡萄糖通过 α-1,6糖苷
键结合而成的线性高分子 ) 为单体，以1,2—环氧氯
丙烷为交联剂，聚合而成的具多孔网状结构的高分 子化合物。商品名为 Sephadex 。其网孔的大小可 通过调节交联剂和葡聚糖的比例来控制，交联度越 大，网孔越小，交联度越小，网孔越大。
动物生物化学实验指导.doc
动物生物化学实验指导（修订版）武汉工业学院生物化学实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。
2．实验前必须认真预习，熟悉本次实验的目的、原理、操作步骤，懂得每一操作步骤的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。
3．实验过程中要听从教师的指导，严肃认真地按操作规程进行实验，并把实验结果和数据及时、如实记录在实验记录本上，文字要简练、准确。
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。
4．实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。
公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。
勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。
实验完毕，仪器洗净放好，将实验台面抹拭干净，才能离开实验室。
5．使用仪器、药品、试剂和各物品必须注意节约。
洗涤和使用仪器时，应小心仔细，防止损坏仪器。
使用贵重精密仪器时，应严格遵守操作规程，发现故障须立即报告教师，不得擅自动手检修。
6．实验室内严禁吸烟！加热用的电炉应随用随关，严格做到：人在炉火在，人走炉火关。
乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能直接加热，并要远离火源操作和放置。
实验完毕，应立即拨去电炉开关和关好水笼头，拉下电闸。
离开实验室以前应认真、负责地进行检查水电，严防发生安全事故。
7．废液体可倒入水槽内，同时放水冲走。
强酸、强碱溶液必须先用水稀释。
废纸屑及其他固体废物和带渣滓的废物倒入废品缸内；不能倒入水槽或到处乱扔。
8．要精心使用和爱护仪器，如使用分光光度计时，不能将比色杯直接置于分光光度计上，并注意拿放比色杯时，不要打碎。
仪器损坏时，应如实向教师报告，并填写损坏仪器登记表，然后补领。
9．实验室内一切物品，未经本室负责教师批准，严禁带出室外，借物必须办理登记手续。
实验一唾液淀粉酶活性的观察原理酶是指化学本质为大分子的生物催化剂。
在一定条件下，酶促化学反应进行的能力即酶活性。
影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH及某些化学物质等都会影响酶的催化活性。
在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温度即酶的最适温度，而能使酶活性达到最高时的PH即酶的最适PH。
实验3 动物生化样品的制备
1、任务背景
分析动物组织中某些物质的含量、探索物质与代谢的过程和规律，是 动物生物化学的常用研究方法。在实践中，经常选用全血、血浆、血 清、或者无蛋白血滤液等血液样品，进行特定蛋白或特定酶含量或图 谱分析，研究相关组织代谢状况；也经常利用离体动物组织研究各种 物质代谢途径和酶系的作用，或从组织中分离、纯化核酸、酶及有意 义的代谢物质进行研究。此外，从动物组织中提取纯化蛋白质、酶等 生物大分子，应用于生产生活实践，是生物化学研究的目标，原材料 的选择与处理是关键。这些工作的开展，都离不开动物生化样品的制 备，掌握以上各种工做中动物生化样品的正确处理和制备方法，是保 证生化研究顺利进行的关键。 2、任务目标 ①掌握动物生化样品制备的原理
②掌握全血、血浆、血清、无蛋白血滤液的制备方法。
③掌握组织样品的 制备方法
1）血液样品的制备
全血的制备：测定用的血液多由静脉采集，一般在饲喂前空腹 采取，因为此时血液中化学成分含量比较稳定。采血所用针头、 注射器、盛血容器要清洁干燥，接血时应让血液沿容器壁缓慢 注入，以防溶血和产生泡沫。一般在血液取出后，迅速盛于含 有抗凝剂的试管内，同时轻轻摇动，使血液与抗凝剂充分混合， 以免形成凝血块。采集的全血如不立即进行实验，应储存于冰 箱中。 血浆的制备：由静脉采集的血液，放入装有抗凝剂的试管或离 心管中，轻轻摇动，使血液与抗凝剂充分混合，以防止小血块 的生成。在离心机（2000r/min，10min），血球下沉，上清 液即为血浆。 血清的制备：收集不加抗凝剂的血液，在室温下5~20min即自 行凝固，一般经过3h后，血块收缩分出血清。为促使血清分出， 必要时可离心分离，这样可缩短时间，并取得较多的血清。血 浆与血清成分基本相似，只是血清不含体不久的组织，在适宜的温度及pH等条件下，可以进行一定 程度的物质代谢，是测定相关物质的最佳时期。如果离体过久 后，所含物质的量和生物活性都将发生变化。例如，组织中的 某些酶在久置后会发生变性而失活，有些组织成分如糖原、 ATP等，甚至在动物死亡数分钟至十几分钟内，其含量既有明 显降低。因此，利用离体组织作代谢研究或作为提取材料时， 必须在低温条件下，快速采集，并尽快地进行提取或测定。一 般采用断头法处死动物，放出血液，立即取出实验所需之脏器 或组织，去掉外层的脂肪及结缔组织后，用冰冷的生理盐水洗 去血液；必要时，也可用冰冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液， 再用滤纸吸干，即可做实验。
动物生物化学实验
动物生物化学实验1. 引言动物生物化学实验是研究动物体内生物分子的组成、结构和功能的重要手段。
通过实验可以深入了解动物体内的代谢过程、蛋白质合成、酶活性以及相关疾病的发生机制等。
本文将介绍一系列常用的动物生物化学实验方法和实验步骤。
2. 蛋白质含量测定实验2.1 实验原理蛋白质含量是衡量细胞或组织中蛋白质水平的重要指标。
常用的蛋白质含量测定方法有Lowry 法、Bradford法和BCA法等。
其中，BCA法是一种基于铜离子和比色反应的测定方法，具有灵敏度高、稳定性好的特点。
2.2 实验步骤•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲溶液中，用均匀器均匀打碎组织，使得细胞内的蛋白质充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的蛋白质标准品，分别加入不同浓度的BCA试剂，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入BCA试剂中，混匀后在37摄氏度下孵育一段时间，最后测定吸光度。
•步骤4：计算蛋白质含量。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相比较，根据吸光度值的差异计算待测样品中的蛋白质含量。
3. 酶活性测定实验3.1 实验原理酶活性测定是评估酶功能和酶水平的重要方法。
常用的酶活性测定方法有过氧化物酶（POD）活性测定、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和碱性磷酸酶（ALP）活性测定等。
3.2 实验步骤以POD活性测定为例：•步骤1：制备待测样品。
将待测组织样品加入磷酸缓冲液中，通过离心等方法使得细胞内的酶充分溶解。
•步骤2：制备标准曲线。
选取一系列已知浓度的酶标准品，分别加入过氧化氢溶液和柱剂，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤3：测定待测样品。
将待测样品加入过氧化氢溶液和柱剂中，混匀后在一定时间内测定吸光度。
•步骤4：计算酶活性。
将待测样品的吸光度值与标准曲线相对比，根据吸光度值的差异计算酶的活性。
4. 代谢产物检测实验4.1 实验原理代谢产物是动物体内代谢过程的关键物质，其含量和比例变化可以反映动物的代谢状态。
(生物科技行业)动物生物化学实验讲义
（生物科技行业）动物生物化学实验讲义动物生物化学实验讲义东北农业大学动物生化教研室实验项目1γ–球蛋白的分离实验项目2γ–球蛋白含量测定（光度分析法）实验项目3凝胶柱层析法（γ–球蛋白纯化）实验项目4SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS–PAGE）实验项目5动物组织中DNA的制备实验项目6多聚酶链反应（PCR扩增反应）实验项目7琼脂糖凝胶电泳分离DNA实验项目8转氨酶GPT活性的测定实验项目9氨基酸薄层层析实验项目10琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用实验一γ–球蛋白的分离【原理】中性盐（如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、硫酸镁等）对球状蛋白质的溶解度有显著影响。
随着中性盐浓度的增加，离子强度也增加。
当溶液离子强度增加到一定数值时，溶液中蛋白质的溶解度开始下降。
离子强度增加到足够高时，蛋白质可从水溶液中沉淀出来，这种现象叫做盐析。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液来沉淀分离各种蛋白质。
蛋白质是一种生物大分子，它具有不能通过半透膜的性质。
透析就是利用这种性质使之与其它小分子物质如无机盐、单糖等分开。
本次实验应用的是脱盐透析，即盐析后，将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内，再将透析袋浸入蒸馏水中。
经过一段时间，袋内的盐类浓度即逐渐降低。
若经常更换袋外的液体，最后即可使袋内的蛋白质溶液中所含的盐类除净，从而达到脱盐的目的。
应用不同浓度硫酸铵分段盐析法将血清中γ–球蛋白及α、β球蛋白分离，最后用透析法脱盐，即可得到纯度较高的γ–球蛋白。
【试剂和器材】一试剂1．pH7.2，0.01mol/L磷酸盐缓冲液生理盐水（简称PBS）：取0.2mol/LNa2HPO4溶液36.0ml，0.2mol/LNaH2PO4溶液14.0ml混合，加NaCl8.5克，用蒸馏水稀释至1000ml。
0.2mol/LNa2HPO4溶液：取28.4gNa2HPO4或71.6gNa2HPO4·12H2O用蒸馏水溶解稀释至1000ml。
动物生物化学实验讲义
实验讲义（霍金龙老师）实验一实验基本知识与基本操作，血液样品的处理及组织匀浆的制备实验二考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验三琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制的观察实验四血液葡萄糖的测定（福林—吴宪氏法）实验五核酸的定量测定（紫外吸收法）实验六全血基因组DNA的提取（离心柱型试剂盒提取法）实验七PCR扩增基因实验八琼脂糖凝胶电泳实验九凝胶层析法分离血红蛋白和胰岛素实验十生物化学实验技术理论讲授核酸蛋白层析分离系统实验工作流程一，准备工作1，核酸蛋白检测仪（紫外检测仪） 1台2，色谱采集器 1套3，自动部分收集器 1台4，恒流泵 1台5, 层析柱 1支6，溶液容器和试剂样品二，开机调试1，核酸蛋白检测仪应提前开机半小时预热，然后按仪器使用说明书来调整仪器的透光度，灵敏度，使其稳定在：“100”或“0”上。
2，设定自动部分收集器收集样品的所需时间。
3，设定恒流泵的所需流量。
三，进行实验前的洗脱工作等仪器都设置完成，检测仪工作稳定后，进行样品池实验冲洗，并调整透过率（T100%）和灵敏度A在0.5上检测仪显示读数为“0”（基线）。
四，数据采集及计算分析把样品加入层析柱进行实验，并连接电脑（或记录仪），打开信号采集器，打开电脑上装入电脑层析的应用软件，并进行记录保存。
然后再对实验所记录的数据进行分析和计算。
以上为一个完整的实验操作过程实验一实验基本知识与操作一.目的1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。
2.掌握各种仪器的正规操作。
3.清点洗刷实验用具。
二．实验内容（一）常用生化仪器量器：量筒、容量瓶、吸量管、离心管、微量取液器玻璃仪器容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等（二）玻璃仪器的洗涤1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。
2、使用过的玻璃仪器洗涤（1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，洗净之器皿倒置干净处晾干或烘箱烤干（量筒不可烘烤）。
动物的生物化学实验
结果呈现与解释
将实验结果以图表形式呈现，并结合专业知识对 结果进行解释和讨论。
ABCD
数据处理与分析
运用统计学方法对实验数据进行处理和分析，如 描述性统计、方差分析、回归分析等。
实验报告撰写
按照学术规范撰写实验报告，包括实验目的、方 法、结果、讨论和结论等部分。
05
实验结果分析与解读
数据统计与分析方法
描述性统计
对实验数据进行整理、归类，计算均值、标准差等统计量，以描述数 据的基本特征。
假设检验
通过设定假设、选择适当的检验方法（如t检验、F检验等），判断实 验数据是否存在显著差异。
方差分析
用于分析不同因素对实验结果的影响程度，以及因素间的交互作用。
回归分析
通过建立数学模型，探讨自变量与因变量之间的关系，预测实验结果 。
动物饲养管理
确保动物饲养环境符合标准， 提供充足的食物和水，避免应 激。
实验设计与伦理审查
制定详细的实验计划，并通过 伦理审查确保实验符合相关法 规。
试剂与仪器准备
提前准备好所需试剂和仪器， 确保其质量和性能符合要求。
实验操作规范与技巧
动物麻醉与固定
根据实验需求选择合适的麻醉方法和固 定方式，确保动物在无痛状态下进行实
生物安全研究
动物实验可用于评估生物武器、生物恐怖主义等生物安全威胁的风 险和防范措施。
THANKS
感谢观看
阐明生物小分子代谢途径
分析动物体内糖类、脂类、氨基酸等小分子的代谢过程，揭示其在能量供应、 物质合成与分解等方面的作用。
了解动物生理生化过程
探究动物细胞信号传导机制
通过研究动物细胞内的信号分子、受体、传导通路等，揭示细胞对外界刺激的响 应机制及细胞间的通讯方式。
动物生物化学实验教程正式
动物生物化学实验教程正式实验一血清蛋白质含量测定牛血清蛋白：BSA。
血浆：指血液的液体成分，淡黄色（因含胆红素）。
含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。
血液经抗凝处理、离心沉淀后，获得的液体部分。
血清：血液凝固后，释出的液体。
不含纤维蛋白原及游离钙离子。
蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。
蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一，其种类繁多、结构多样、功能各异，而且分子量相差很大，所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。
目前测定蛋白质含量的方法很多，常用的测定方法有Folin—酚法（Lowry法）、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等，每种方法在实践中都有其优点和局限性。
本实验采用考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）。
(灵敏度最高)一、实验目的1．掌握分光光度法测定的原理，分光光度计的结构和基本操作要点（光源-单色器-样品室-检测器-显示器）2．掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法3．掌握微量移液器的使用方法4．了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法二、实验原理染料考马斯亮蓝G-250（R250，结合后可以解离）在游离状态下呈红色，最大吸收峰为465nm。
它能与蛋白质的疏水微区结合，形成蓝色复合物，该复合物的最大吸收峰为595nm，在一定浓度范围内（为什么在一定范围内），其吸光度值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质含量的测定。
三、实验操作步骤表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量试管号稀释的血清样品（mL）0.9%NaCl溶液（mL）考马斯亮蓝G-250溶液（mL）空白管-0.15样品管0.1-5室温静置5min，于波长595nm处，以空白管调“0”，测定样品管的吸光度值，查标准曲线，吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量，然后乘以血清的稀释倍数（10倍），可得血清中蛋白质的含量。
四、实验试剂1．考马斯亮蓝G-250溶液（0.01%）：称取考马斯亮蓝G-250100mg，溶于50mL95%乙醇中，再加入100mL85%(W/V)浓磷酸，然后用蒸馏水定容至1000mL，置棕色瓶过夜（如有不容物，可用二层滤纸过滤）。
动物生物化学实验教程
动物生物化学实验教程胡兰版目录第一章动物生物化学实验常识第一节动物生化实验技术发展简史第二节动物生化实验室常识与规则一、实验室规则二、实验室安全及防护知识第三节生化实验基本操作一、玻璃仪器的洗涤二、刻度吸管的使用三、微量移液器的使用四、试管中液体的混匀法第四节常用实验样品的处理一、血液样品的采集二、血清的制备三、全血及血浆的制备四、无蛋白血滤液的制备五、生物大分子的基本制备技术第五节实验报告的撰写规范一、实验记录二、定性实验报告书写格式三、定量实验报告书写格式第二章常用生化实验技术原理及应用第一节离心技术的原理及应用一、离心技术的基本原理二、离心机的主要类型三、常用的离心分离方法四、离心操作的注意事项第二节光度测定法的原理及应用一、分光光度法的基本原理二、光度法的计算三、使用分光光度计的注意事项四、自动生化分析技术第三节电泳技术的原理及应用一、影响电泳迁移率的因素二、几种常用的电泳法第四节层析技术的原理及应用一、层析技术的常用术语二、层析技术的分类三、常用的层析方法四、柱层析的基本装置五、柱层析的基本操作第五节DNA重组技术一、多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）的基本过程二、DNA重组技术（RecombinantDNATechnology）三、DNA重组技术的基本步骤第三章酶学实验内容实验一唾液淀粉酶活性观察实验二转氨酶活性测定——King氏法实验三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察第四章糖类实验内容实验四血糖的测定1.福林一吴宪氏法2.葡萄糖氧化酶法实验五肝糖原的提取和鉴定第五章脂类实验内容实验六血清总脂含量测定（香草醛法）实验七肝组织的生酮作用实验八血清游离脂肪酸测定（一次提取比色法）实验九血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）第六章蛋白质实验内容实验十醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质实验十一蛋白质的含量测定Ⅰ.双缩脲法Ⅱ.Folin-酚试剂法Ⅲ.紫外光吸收法Ⅳ.考马斯亮蓝结合法实验十二血清尿素氮（BUN）的测定（二乙酰一肟法）实验十三氨基酸纸上层析第七章核酸实验内容实验十四动物组织DNA提取实验十五DNA的定量测定（二苯胺法）实验十六动物肝脏总RNA的制备实验十七RNA的定量测定（地衣酚法）实验十八紫外吸收法测定核酸的含量第八章维生素实验内容实验十九维生素B2的定量测定（荧光法）第九章综合性实验内容附录参考文献。
《动物生化实验》实验一、生化实验基本知识
五、仪器
1．每次实验前，实验者应根据黑板上公布本实验使用的仪器 种类与数目，检查。 分发在实验桌上的各种仪器，如有缺损应于清洗前立即向准 备室负责老师补换。实验中如有破损，则必须登记，按学院 规定处理。实验后应将完整仪器洗涤清洁，点交管理人员。 2．公用仪器（包拈贵重仪器，如光电比色计、电动离心机等） 使用时时间不宜过长，以免妨碍他人工作。设有使用登记薄 的仪器，使用后必须登记，以示负责。对于不熟悉之仪器， 切勿随意乱动应请教师指导之。
Hale Waihona Puke 转移溶液到容量瓶中容量瓶的翻动
如固体是经加热溶解的，溶液冷却后才能转入容量瓶内。如 果要把浓溶液稀释，要用移液管吸取一定体积浓溶液放入容量 瓶中，然后按上述操作加水稀至刻度线。 配好的溶液如需保存，应转移到清洁、干燥的磨口试剂瓶中。 容量瓶用毕后应立即用水冲洗干净。如长期不用，磨口处应洗 净擦干，并用纸片将磨口隔开。容量瓶不得在烘箱中烘烤，也 不能用其它任何方法进行加热。
1.一般玻璃仪器用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满足要求洗 后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾去后，器壁不挂珠， 视为合格。 2.铬酸洗液仅用于毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪 器之洗涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将洗 液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反复使用，直至 变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓硫酸液相同。用洗液浸 洗过的玻璃仪器，应先用自来水冲洗，然后再用蒸馏水或去 离子水清洗，清洗时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏 水，同时清洗的效率也高。
第二部分 生物化学实验基本操作和仪器使用
一、生物化学实验基本知识与操作
1.液体体积的度量仪器及使用方法 生化实验中玻璃器皿分为两类，容器和量器。
液体体积的度量根据精度和需要有：量筒、容量瓶、吸管、 及移液器。其中容量瓶、吸管、及移液器为准确量器。
动物生物化学教学教案
氨基酸缺乏 对动物生长 发育的影响
分析氨基酸缺乏 对动物生长发育 过程的影响和机
制
氨基9酸1在%动
物体内的代 谢途径
描述氨基酸在生 物体内的代谢途 径和相关生理功
能
蛋白质调控机制
蛋白质的合成和降解在机体内保持平衡，受到多 种调控因子的调节。了解蛋白质合成调控中的关 键因子和蛋白质代谢异常的治疗策略对于预防和 治疗相关疾病具有重要意义。进一步研究蛋白质 调控机制有助于揭示相关疾病发生发展的分子机 制。
生长发育 代谢平衡
91%
实验结果展示
01 葡萄糖
最常见的单糖
02 果糖
水果中的天然糖类
03 蔗糖
甜味剂
● 03
第3章 脂质代谢
脂质代谢概述
脂质是生物体内一类 重要的有机化合物， 包括脂肪、甘油和脂 蛋白。在动物体内， 脂质具有多种重要功 能，参与细胞膜的构 建、激素合成和能量 储存等代谢途径。
● 05
第5章 实验设计与数据分析
实验设计原则
在动物生物化学实验 中，实验设计的关键 在于明确实验目的的 具体性和操作性。另 外，需要严格控制实 验条件，确保实验结 果的可靠性和可重复 性，从而有效保障实 验的科学性和准确性。
数据处理方法
统计分析软 件的应用
数据分析工具
实验结果的 可视化呈现
动物生物化学教学教案
汇报人：XX
2024年X月
目录
第1章 概述动物生物化学教学教案 第2章 糖代谢 第3章 脂质代谢 第4章 蛋白质代谢 第5章 实验设计与数据分析 第6章 总结与展望 第7章 动物生物化学教学教案
● 01
第1章 概述动物生物化学教 学教案
介绍
动物生物化学教学教 案是指在教学过程中， 通过理论课教学和实 验教学，深入探讨动 物体内生物化学过程 的原理和机制。这对 于学生全面了解动物 生物学起着关键作用。
动物生物化学实验全文编辑修改
对消法消除系统误差
进行两次测量，使两次读数时出现的系统误差大小相等、符号相反。两次测量值的平均值作为测量结果，以消除系统误差。 例如，由于仪器灵敏度的限制，测量仪器的旋钮由右边调近测量值与由左边调近测量值的结果往往不同。这时，可取两个读数的平均值作为测量值。
系统误差的消除很难找到一个普遍有效的方法。这是因为造成系统误差的各个因素，没有内在的联系。要克服它们，只能具体问题具体分析。
五、实验室安全知识简介
（一）实验室安全
1. 安全用电2. 水火无情3. 严防中毒
4. 避免伤害5. 生物危害6. 射线伤害
（二）实验室灭火
1. 切断室内所有电源，火源2. 报警3. 导线着火时，切断电源或使用四氯化碳灭火器，不能用水及二氧化碳灭火器，以免触电4. 可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空气灭火。不能用水灭火，这样会扩大燃烧面积。5. 金属钠着火时可用砂子覆盖6. 衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。
离心的基本原理
相对离心力： 离心力常用地球引力的倍数来表示，因而称为相对离心力 “ RCF ”。或者用数字乘“g”来表示。 相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g” （980cm/sec2）， 相对离心力RCF可用下式计算： RCF = 1.119×10－5×(rpm)2 r ( rpm — revolutions per minute每分钟转数，r/min )
动物生物化学实验
动 物 生 物 化 学 实 验
实验一 实验室基本知识实验二 氨基酸纸层析实验三 血清蛋白含量测定实验四 影响酶活性的因素实验五 脂质的薄层层析实验六 凝胶层析法基本练习实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验八 动物组织中DNA提取
动物生化实验技术指导书
4.0
4.0
4.0
充分混匀后，室温下（20－25℃）放置30分钟
测A540值
以A540为纵座标，蛋白质浓度为横座标，绘制标准曲线。
二、样品测定
取2支试管，按下表操作。
试管
0
1
血清稀释液（mL）
0
0.5
蒸馏水（mL）
1.0
0.5
双缩脲试剂（mL）
4.0
4.0
充分混匀后，室温下（20－25℃）放置30分钟
（5）亲和层析：是利用高分子物质能与相应的配基特异性的可逆结合的原理而进行分离。
层析法又按操作的方式不同，可分为柱层析、纸层析和薄层层析等。
硅胶具有吸附其它物质的性能，而且它对各种糖的吸附能力是各不相同的。本实验就利用这种吸附能力的差异，将硅胶在玻璃板上均匀地铺成薄层，而后将糖的混合液点在薄层上，再用乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸和水按一定比例构成的混合液为展开剂进行层析，能使混合的糖分离。再用Molish氏反应使糖显色，其反应式如下：
二、试剂
（1）硅胶G
（2）2％乳糖溶液
（4）2％葡萄糖溶液
（5）2％乳糖、2％葡萄糖等体积的混合液
（7）展开剂：乙酸乙酯－甲醇－冰醋酸—水（12：3：3：2）
（8）α－萘酚－硫酸试剂（Molish试剂）：15％α－萘酚乙醇溶液21mL，加浓硫酸13mL，再加乙醇81mL及水8mL混匀置棕色瓶中。要新鲜配制。
二、目的与要求
利用SephadexG-25凝胶层析，分离一含有溶质分子大小不同的样品，并测出洗脱曲线，通过实验了解并熟悉凝胶渗透层析的原理和实际应用。
三、仪器与试剂
层析柱；恒流泵（或恒压瓶）；自动部分收集器
吸管；刻度试管；752型分光光度计
动物生物化学试验二
实验二电泳技术教学目的与要求：掌握常用的生物化学电泳技术，了解电泳中的注意事项。
教学重点与难点：电泳系统的构建及注意事项。
教学方法与手段：讲授和学生动手操作。
学时安排：2学时教学内容：一、引言生物大分子如蛋白质，核酸，多糖等大多都有阳离子和阴离子基团，称为两性离子。
常以颗粒分散在溶液中，它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。
在电场中，带电颗粒向阴极或阳极迁移，迁移的方向取决于它们带电的符号，这种迁移现象即所谓电泳。
二、实验目的、任务及原理实验目的：掌握电泳技术方法及注意事项。
实验任务：学会醋酸纤维素薄膜电泳的使用方法。
实验原理：醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。
醋酸纤维素素薄膜是由二乙酸纤维素加工制成，具有均一的泡沫结构，厚度仅120um。
醋酸纤维素素薄膜作为是电泳支持体有以下优点：八、、：①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它对各种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象；④对染料也没有吸附。
作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。
目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分离以及免疫电泳中。
例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后显示5条区带。
清蛋白泳动最快，其余依次为a 1—，a 2一，P 一,及Y 一球蛋白。
这些区带经洗脱后可用分光光度计法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。
临床医学常利用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。
此法由于操作简单、快速、分辨率高及重复性好等优点。
目前，以成为临床生化检验的常规操作之一。
三、实验的拓展(由本实验的完成深化和延伸所学的知识，启发学生利用现有的设备拓展出新的实验内容,培养学生的创新思维和创新能力。
动物医学-动物生物化学实验《动物DNA提取》课件
氯仿 ➢ 强蛋白质变性剂，使液相与有机相分开 ➢ 抑制DNA酶的活性
异戊醇 ➢ 消除抽提过程中出现的泡沫
95%乙醇 ➢ 沉淀DNA
5
三、实验步骤
取材
取出冻肝,待溶化后,称取3g,剪成碎块.
匀浆
➢ 加入5 mL 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液充分匀 浆;
3
主要试剂及其作用
EDTA ➢ 螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子 ➢ DNase作用时需要一定的金属离子作辅基 ➢ 抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用
SDS ➢ 抑制核糖核酸酶的作用 ➢ 溶解细胞膜上的脂质与蛋白，溶解膜蛋白而破坏细胞膜 ➢ 与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白 质变性而沉淀下来
➢ 再快速加入1mL 25% SDS,轻轻混匀10min； ➢ 加入3mL 5mol/L NaCl溶液(终浓度为1.07mol/L),继续轻轻混匀10min; ➢ 加入(14mL)一倍体积的氯仿-异戊醇混合液.于带磨口塞的锥形瓶中震摆
10min; ➢ 分别引流入三支小试管，3000rpm离心20min,分为三层:
8
上层-----水相 中间层---蛋白质 下层-----有机相
➢ 小心用皮头滴管吸取上层水相于小烧杯中,加入 2 倍体积的95%的乙醇,静 置；将DNA丝状物缠绕在玻棒上.
7
四、思考题
① 用95%酒精提抽DNA时为什么要轻轻搅动; ② 结合本人操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子
DNA的降解.
实验六 动物肝脏DNA的提取 动物医学院动物生化教研室
一、实验目的
① 了解从动物组织中提取DNA的一般原理； ② 掌握DNA提取的方法和步骤。
[课外阅读]多媒体课件下动物生物化学实验
![[课外阅读]多媒体课件下动物生物化学实验](https://img.taocdn.com/s3/m/63c441c733687e21ae45a909.png)
[课外阅读]多媒体课件下动物生物化学实验一、动物生物化学实验多媒体课件的制作1.多媒体课件总体框架的构建。
根据实验课程的教学特点和教学大纲的要求，在课件的总体规划上突出实验方法和实验技术理论的教学重点，将实验课的10个实验项目，按实验时间、实验技术和研究对象进行组合，划分成5个模块进行实践教学。
每个实验项目的主体框架由实验目的、实验原理、主要试剂及仪器、操作步骤、注意事项和实验结果分析6部分组成。
2.多媒体课件制作的技术支撑及风格定位。
常用的多媒体课件制作软件包括PowerPoint、Authorware、Flash、Photoshop等，在制作设计风格上以“和谐统一、各具特色”为总方针，根据主体内容的特点选择不同的展示风格。
所谓“和谐统一”主要表现在界面的整体规划与设计方面，包括模板选择、内容编排、文本格式和色彩的搭配等。
课件统一采用白色背景模板，主体内容与框架结构编排一致，统一字体格式及页面布局，色彩搭配上以易于阅读和重点突出为主，使用背景与字体对比鲜明的颜色，如浅色背景配黑色或深红、绿、蓝色字体。
而“各具特色”主要由于实验原理、仪器和实验结果等的不同，在图片、图表、动画或视频的选择上呈现差异。
如酶活性实验的结果分析部分，采集学生的实验结果图片，通过实验结果的直观对比，说明不同组间在实验现象上可能出现差异，而不同的实验现象均能用同样的理论来进行解释，通过图片的对比分析，加强学生对实验原理的理解，同时提升学生分析问题和解决问题的能力。
在仪器介绍和实验原理讲解部分，课件主要采用动画或视频进行演示，给学生最直观的感受，易于学生的理解和掌握。
3.多媒体课件的素材采集及编制。
根据动物生物化学实验涉及的研究方法和研究对象，通过实验教学及网络资源两种方式进行课件所需图片、图表、动画和视频等资料的采集，再利用多媒体制作软件将这些素材与课程内容有机结合，通过静态文本、动画和视频演示等多种形式制作成适合实验项目的多媒体课件。
高级动物生化实验指导
《动物生物化学实验原理与技术》实验指导实验目录一、动物血浆（清）IgG的分离纯化二、醋酸纤维薄膜电泳鉴定纯化的IGg三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）四、Western blot五、动物组织中基因组DNA的提取六、细胞总RNA的提取及反转录合成cDNA七、PCR基因扩增八、琼脂糖凝胶电泳检测DNA九、质粒DNA的小抽提一、动物血浆（清）IgG的分离纯化[实验目的]1. 了解蛋白质分离纯化的一般思路。
2. 掌握硫酸铵盐析、凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析等技术的原理与方法[实验原理]分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质(如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等)不同而建立起来的，其中有盐析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳及离心等。
在分离纯化时，要根据具体情况选用几种方法相互配合才能达到分离纯化某一种蛋白质的目的。
血浆（清）蛋白质多达70余种，免疫球蛋白（Immunoglobulin，简称Ig）是血浆球蛋白的一种，免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，简称IgG）又是免疫球蛋白的主要成分之一。
IgG的相对分子量约为15～16万，沉降系数约为7S。
要从血浆中分离出IgG，首先要尽可能除去血浆中的其他蛋白质成分，即进行粗分离，使IgG在样品中的比例大为增高，然后再精制纯化而获得IgG。
IgG作为被动免疫制剂，在兽医临床上具有广泛的应用价值。
本实验主要采用硫酸铵盐析、凝胶过滤脱盐及DEAE-纤维素离子交换层析等方法，从家畜血浆（清）中分离纯化IgG。
1、用盐析法制备血浆（清）IgG粗制品的原理在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。
除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等也都可以用盐析法进行沉淀分离。
不同的蛋白质在同一浓度盐溶液中的溶解度不同，可利用不同浓度的盐溶液使每个蛋白质成分分别析出，通常称为蛋白质的盐析。
因此在蛋白质中加入不同浓度的中性盐可使不同蛋白成分分别析出，从而达到分离纯化抗体的目的。
动物生物化学试验-动物医学实践教育中心
《动物生物化学实验》教学大纲一、基本信息二、教学目标及任务《动物生物化学》是为高等农业院校动物医学、动物药学、动物科学和水产养殖等专业本专科开设的重要的专业基础课，也是一门重要的实验性课程。
通过本课程的系统学习和实验，使学生掌握动物生化实验的基本知识,基本理论和基本实验技能,掌握熟悉常用生化仪器的原理和使用方法,了解有关电泳，色谱，制备，透析等基本的生化实验手段,培养理论联系实际的学风和动手能力。
三、学时分配教学课时分配四、实验内容及教学要求实验一：蛋白质的沉淀反应和两性反应，蛋白质透析脱盐。
本实验重点、难点：生化实验常用的仪器的使用；理解蛋白质的一般理化性质；盐析、透析的概念。
本实验教学要求：教育学生对生化实验的认识；了解生化实验常用的仪器及使用方法；理解蛋白质的沉淀、两性反应及透析脱盐的原理；掌握蛋白质盐析和透析等操作技术。
实验二：蛋白质的定量分析------双缩脲法测定蛋白质浓度；分光光度计的使用和注意事项；Excel软件制作标准曲线。
本实验重点、难点：分光光度法测定蛋白质的浓度的原理；标准曲线的制作。
本实验教学要求：了解蛋白质含量测定的原理和方法；掌握分光光度法的原理及分光光度计的使用方法和注意事项；用标准曲线法准确测定未知样品中蛋白质的含量；学习使用Excel软件制作标准曲线。
实验三：动物心脏、肝脏中琥珀酸脱氢酶的制备和活性鉴定*；动物血清和组织匀浆液的制备；附：玻璃匀浆器、离心机的使用。
本实验重点、难点：制备血清和组织匀浆液；观察琥珀酸脱氢酶竞争性抑制的基本原理；玻璃匀浆器、离心机的正确使用。
本实验教学要求：了解琥珀酸脱氢酶竞争性抑制的实验原理；掌握动物血清和组织匀浆液的制备，匀浆器、离心机的使用等方法。
实验四：电泳的概念和一般原理；醋酸薄膜电泳分离血清蛋白；电泳分离条带的扫描及软件分析*。
本实验重点、难点：电泳的概念和一般原理；电泳分析动物血清中各种蛋白组分。
本实验教学要求：了解电泳的概念和一般原理；掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术和操作要点；学会用电脑软件分析动物血清中各种蛋白组分实验五：盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白*。
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动物生物化学实验教程
胡兰版
目录
第一章动物生物化学实验常识
第一节动物生化实验技术发展简史
第二节动物生化实验室常识与规则
一、实验室规则
二、实验室安全及防护知识
第三节生化实验基本操作
一、玻璃仪器的洗涤
二、刻度吸管的使用
三、微量移液器的使用
四、试管中液体的混匀法
第四节常用实验样品的处理
一、血液样品的采集
二、血清的制备
三、全血及血浆的制备
四、无蛋白血滤液的制备
五、生物大分子的基本制备技术
第五节实验报告的撰写规范
一、实验记录
二、定性实验报告书写格式
三、定量实验报告书写格式
第二章常用生化实验技术原理及应用
第一节离心技术的原理及应用
一、离心技术的基本原理
二、离心机的主要类型
三、常用的离心分离方法
四、离心操作的注意事项
第二节光度测定法的原理及应用
一、分光光度法的基本原理
二、光度法的计算
三、使用分光光度计的注意事项
四、自动生化分析技术
第三节电泳技术的原理及应用
一、影响电泳迁移率的因素
二、几种常用的电泳法
第四节层析技术的原理及应用
一、层析技术的常用术语
二、层析技术的分类
三、常用的层析方法
四、柱层析的基本装置
五、柱层析的基本操作
第五节DNA重组技术
一、多聚酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）的基本过程
二、DNA重组技术（RecombinantDNATechnology）
三、DNA重组技术的基本步骤
第三章酶学实验内容
实验一唾液淀粉酶活性观察
实验二转氨酶活性测定——King氏法
实验三琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制的观察
第四章糖类实验内容实验四血糖的测定
1.福林一吴宪氏法
2.葡萄糖氧化酶法
实验五肝糖原的提取和鉴定
第五章脂类实验内容
实验六血清总脂含量测定（香草醛法）
实验七肝组织的生酮作用
实验八血清游离脂肪酸测定（一次提取比色法）
实验九血清总胆固醇测定（胆固醇氧化酶法）
第六章蛋白质实验内容
实验十醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
实验十一蛋白质的含量测定
Ⅰ.双缩脲法
Ⅱ.Folin-酚试剂法
Ⅲ.紫外光吸收法
Ⅳ.考马斯亮蓝结合法
实验十二血清尿素氮（BUN）的测定（二乙酰一肟法）
实验十三氨基酸纸上层析
第七章核酸实验内容
实验十四动物组织DNA提取
实验十五DNA的定量测定（二苯胺法）
实验十六动物肝脏总RNA的制备
实验十七RNA的定量测定（地衣酚法）
实验十八紫外吸收法测定核酸的含量
第八章维生素实验内容
实验十九维生素B2的定量测定（荧光法）
第九章综合性实验内容
附录
参考文献。