食用菌各级菌种的制作
食用菌菌种制作工艺流程及各工序生产规程
勋业食用菌菌种制作工艺流程及各工序生产规程一：生产工艺流程培养基配制→分装→灭菌→冷却→接种→培养(检查)→成品二：生产规程0：母种使用玻璃试管和棉塞，试管18 mm×180 mm．1或20mm×200mm，棉主要使用梳棉，不应使用脱脂棉。
0：原种使用650 mL-750 ml，耐126℃高温的五色或近五色的玻璃茵种瓶，或850 ml耐126℃高温白色半透明符合《食品包装用聚乙稀成型品卫生标准》规定的塑料菌种瓶，或15cm×28cm 耐126℃高温符合《食品包装用聚乙烯成型品卫生标准》规定的聚丙烯塑料袋．各类容器部应使用棉塞，棉塞应符合规定；也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。
0：栽培种使用符合原种规定的容器，也可使用≤17 cm×35 cm耐126℃高溫符合《食品包装用聚乙烯成型品卫生标准》规定的聚丙烯塑料袋。
各类容器都应使用棉塞或无棉塑料盖，并符合原种规定。
0：母种常用培养甚及其配方培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200 g(用浸出汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，PH值自然。
培养基(综台马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁o.5g，琼脂20g，水1000 mL，pH值自然。
0：生物制剂和天然材料类生物制剂如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净；干燥。
0：净化工作台的消毒处理方法先用75％酒精或新洁尔灭溶液进行表面擦拭消毒，然后预净20min．0：培养期的检查各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种．0:培养条件要求不同种类或不同品种应分区培养。
根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度（多在室温20℃～24℃），保持空气相对湿度在75%以下，通风，避光。
0:灭菌效果的检查方法培养基配制后应在4h内进锅灭菌。
母种培养基灭菌0.11MPa～0.12MPa，30min。
菌种怎么制作,菌种保藏方法
菌种怎么制作，菌种保藏方法1、将土豆切成块，放入烧杯中煮半个多小时，煮好后过滤溶液备用。
2、将琼脂放入溶液中，然后重新将其烧开，琼脂完全溶化后继续煮一段时间。
3、煮好后将汁液分放至试管内，并用高压锅消毒杀菌，消毒后斜放试管，待凝固后开始接种。
4、用酒精对嫩蘑菇进行杀菌，并在无菌箱内将其切成小块，切好后可接种至琼脂基质上。
5、堵上试管口，将琼脂基质放入培养箱，长满菌丝后便可形成一级菌种。
一、菌种怎么制作1、一级菌种（1）向烧杯内放入切成块的土豆，然后煮30多分钟，煮好后过滤溶液备用。
（2）向溶液内放入琼脂，再将其烧开，待琼脂完全溶化后继续煮一段时间。
（3）煮好后，将汁液分放至试管，再用高压锅消毒杀菌。
消毒后将试管斜放，直到冷凉凝固后即可开始接种。
（4）用酒精对嫩蘑菇做杀菌处理，然后在无菌箱内切成小块，接种至琼脂基质上面。
（5）用塞子堵上试管口，再将琼脂基质放入培养箱内，待长满菌丝后即可形成一级菌种。
2、二级菌种（1）将煮熟的大豆和谷粒置于无菌的条件下晾干，再装入经过高温杀菌的玻璃瓶内。
（2）将瓶子封口，放入高压锅中，经高压灭菌后放在无菌室冷凉。
（3）将培养瓶放至无菌箱内，再放入一级菌种，用的小匙挖出黄豆大小的菌种接种入玻璃瓶。
（4）接种后要封口，再将玻璃瓶放到培养室中，待长满菌丝后即可备用。
3、三级菌种（1）制备方法与二级菌种基本一致，培养基可使用煮熟的麦粒、玉米粒及棉籽。
（2）三级菌种的菌丝长满后即可取出来培育，经历三级菌种的培育后可完全制成平菇菌。
二、菌种保藏方法1、斜面低温保藏法将菌种接种至适宜的固体斜面培养基上，待菌种充分生长后用油纸将棉塞部分包扎好，然后放入冰箱，温度控制在2-8°C即可。
2、甘油管保存法（1）将80%甘油用高压蒸汽做灭菌处理，再将菌种放置在斜面培养基上培养，用无菌水制成高浓度的菌悬液。
（2）将1毫升甘油与菌液混匀，使甘油的浓度达到10-30%，然后放在-70°C的环境中冻存。
《食用菌菌种的制备》PPT课件
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• （2）棉籽壳培养基
• 以棉籽壳为主料，是一种应用较广泛的培 养基。配方主要有：
• ①棉籽壳78％，麸皮或米糠20％，蔗糖1％， 石膏粉1％，料水比1:1.2～1.4；
（1）拌料机或拌料槽及拌料、配料工具；
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• （2）衡器 磅称、工业天平、量杯等；
• （3）分装操作台（台高80cm左右）及分 装工具（装瓶机、装袋机；如人工装瓶， 需有压板，打孔棒等。）
• 2、灭菌室 应有灭菌设备，这里专指用于培养基
和其他物品消毒灭菌的灭菌锅。
（1）高压蒸汽灭菌锅； （2）常压蒸汽灭菌锅。
扩繁 ↓
原种培养基制备→灭菌→接种→培养→原种 ↓
↓▔▔▔▔▔▔▔▔ 栽培种培养基制备→灭菌→接种→培养→栽培用种
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二、常用设备仪器和药品
（一）设备
食用菌菌种生产流程应呈流水作业，菌种厂 应有配料室、灭菌室、冷却室、接种室、 培养室、贮藏室等。
1、配料室 要求地面平整光滑，有水电，并配备
下列用具、物品：
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第五步：摆斜面、无菌检查
• 灭菌锅压力降到0时，开锅取出试管，待其 温度降到约60℃时即可摆斜面，做法是： 在桌面平放2厘米厚的木条，将试管斜放在 木条上，培养基冷却后即凝固成斜面。斜 面长度一般为试管长度的1/2。无菌检查是 将斜面培养基放在37℃恒温箱中培养24小 时，培养基表面无任何杂菌长出即为合格 的培养基。
• （4）木屑浸出汁培养基
木屑500克，琼脂20克，细米糠100克，硫酸铵1 克，葡萄糖（或蔗糖）20克，水1000毫升。此配 方适用于木腐菌类的菌种分离与培养。
食用菌菌种制作技术
食用菌菌种制作技术作者：夏宏志李希政路晓玉来源：《农业与技术》2017年第23期摘要：本文简要说明了菌种培养基的分类，从消毒、灭菌、菌种制作、菌种培养、菌种污染原因分析上进行了论述，并对菌种老化与退化标准，菌种质量标准，菌种质量鉴别标准上进行了论述，给菌种质量判别提供了依据。
关键词：食用菌；菌种；培养基；菌种制作中图分类号：S646 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.201712320091 菌种的级别划分1.1 母种母种又称一级种，试管种，是食用菌的原始出发菌株。
母种的来源：通过组织分离法或孢子分离法自己选育而成；向有信誉的科研单位购买（引种必须作出菇试验，验证考核后方能用于大面积生产）。
母种转接一般以1支母种可转10～20支，在25℃培养，6～22d长满（因品种而异），母种必须纯度高，活力强。
1.2 原种原种又称二级种。
是由母种扩繁而来。
一般1支母种可转接5～6瓶，25℃培养30d左右长满。
原种要求必须纯度高，活力强，营养丰富。
1.3 生产种生产种又称三级种，栽培种。
是由原种扩繁而来，直接用于生产的菌种[1]。
一般一瓶原种可转接50～60瓶。
25℃下培养20～30d能长满瓶。
一级菌种培养基配方（适用于平菇、香菇、金针菇、木耳、滑菇等大多数食用菌）：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁2g、维生素B1或B2 6片、水1000mL。
1.4 二、三级种配方粉碎玉米芯70%、玉米面30%，另外加石膏1%、白灰2%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.2%、多菌灵0.1%。
1.5 粮食菌种制作选用干净无霉变小麦粒或玉米粒、高粱粒，用清水浸泡12h以上，捞出用水煮，煮至熟而不烂、不开花为准，捞出控干水分，加入石膏粉2%～3%，有条件加入30%木屑拌匀，装点滴瓶较好。
优点：菌丝生长健壮有力，可最大限度提高产量，生长速度较常规配方缩短50%以上时间。
缺点：制作较繁琐，容易污染。
食用菌菌种的制作与培养
食用菌菌种的制作与培养一、母种制作（一）母种培养基制作1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。
因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。
适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯一葡萄糖一琼脂培养基马铃薯（去皮）200克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水1000毫升（2）麦芽汁一葡萄糖一琼脂培养基干麦芽250克琼脂15〜20克葡萄糖（或蔗糖）10克水 1000毫升（3）胡萝卜一葡萄糖一琼脂培养基胡萝卜100克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水 1000毫升（4）蘑菇汁一葡萄糖一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖）20克水 1000毫升（5）蛋白胨一葡萄糖一琼脂培养基蛋白胨2克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克维生素B1 （硫胺素）0.5毫克磷酸二氢钾0.5克琼脂18克硫酸镁0.5克水1000毫升2.母种培养基的制法以最常用的马铃薯一葡萄糖一琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块加水1000毫升，煮沸15〜20分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000 毫升。
趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。
试管口塞上大小合适的棉花塞，塞入试管口内的长度为棉塞总长的3/5。
塞好棉塞后，每10 支作一捆，用牛皮纸包扎好后，置铁丝网笼中，然后进行高压灭菌。
如作为抱子分离用，则将培养基分装于三角瓶或培养皿中，然后高压灭菌。
3.母种培养基的消毒灭菌：母种培养基通常用高压蒸汽灭菌锅来消毒灭菌，常用的高压蒸汽灭菌锅有直式、卧式和手提式三种。
将配制好后的母种培养基移入上述任何一种高压蒸汽灭菌锅中，在15公斤/平方厘米压力下，灭菌30分钟。
[基础]食用菌菌种制作技术图文1
![[基础]食用菌菌种制作技术图文1](https://img.taocdn.com/s3/m/5e1d054e24c52cc58bd63186bceb19e8b8f6ecd9.png)
[基础]食用菌菌种制作技术图文1图文食用菌菌种制作技术一、菌种生产程序母种繁殖栽培种示意图菌种生产程序，通常分为母种、原种和栽培种3个层次，也就是通常所说的一级、二级、三级菌种。
其中母种的分离选育技术性强，一般由专业制种单位制作。
而原种和栽培种的制作则比较简单。
下面介绍各级菌种的制作技术。
二、母种的分离选育母种可以采用人工选择方式分离培育母种，具体步骤与操作方法如下：1、采集种源采集种源用具选择有八成熟、朵形圆正、肉质肥厚、无病虫害的优良菇体作为种源。
采集1～2朵装入灭菌纸袋，带回接种箱进行消毒。
2、母种培养基配制母种培养基常用的是琼脂培养基又叫PDA培养基，常用配方为：马铃薯200～250g，琼脂15～20g，葡萄糖20～25g，清水1000ml。
也可以加硫酸镁1～1.5g，维生素B1微量，磷酸二氢钾2～3g。
先将马铃薯洗净去皮，切成薄片，置于烧杯（或铝锅）内加水煮沸30分钟，捞起后用4层纱布过滤，取汁。
然后将琼脂加入汁内，边加热边搅拌，让琼脂充分溶化。
再将葡萄糖等加入，并补水至1000ml。
稍煮几分钟后，同样用4层纱布过滤，取其汁液。
将汁液趁热装入玻璃试管内，装至管长的1/5。
管口用棉花塞塞紧。
或将汁液装入玻璃三角瓶内，装量为20ml。
然后置于高压锅内，在98～108千帕/cm2的压力下灭菌30分钟左右。
灭菌后及时取出，趁热将试管斜排于桌上，冷却后即成为固体斜面培养基。
3、母种分离方法①、孢子弹射法将种菇表面消毒，吸干水分后，将菇体悬挂于装有琼脂培养基的三角瓶内，让菇体内的孢子自然散落在培养基上萌发菌丝。
也可以剪取一小块菇体，贴附在试管斜面培养基表面，让孢子散落在培养基上萌发菌丝，即能获得母种。
②、组织分离法将消毒过的种菇，在接种箱内用手从菇柄处对半掰开，或用刀片切开，使菇体形成对开。
在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，用接种刀切取一小块菇体，然后纵切成5mm×10mm的小薄片，用接种针挑取1块薄片，接入斜面培养基的中央，每支试管接种一小块薄片，待其萌发菌丝，即可得到母种。
食用菌栽培技术
食用菌栽培技术一、菌种制备菌种制备包括母种、原种、栽培种三级菌种。
1、母种培养基的制作。
常用的主要有以下几种：（1）马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA培养基）。
马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。
（2）猴头菌培养基。
黄豆芽250克加水1000毫升，煮沸15～20分钟，过滤取汁，补足失水至1000毫升。
加入葡萄糖30克、蛋白胨5克、酵母膏1克、琼脂20克，加热溶化，然后分装。
适用于猴头母种培养。
（3）玉米粉培养基。
玉米粉30克左右，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克、蛋白胨0.5克。
玉米粉煮至70℃左右保持1小时，然后加上其余的成分。
2、原种培养基的制作。
常用配方：（1）棉耔壳培养基。
棉耔壳100斤，麦麸15斤，石膏粉1.5斤，料水比1:1.1～1.2。
该培养基适合于大多数食用菌品种。
（2）木屑培养基。
干木屑100斤，麦麸20斤，蔗糖1斤，石膏粉1.5斤，硫酸镁0.5斤，料水比按1：1.1～1.2。
该培养基适合于银耳、黑木耳、猴头、金针菇、平菇等原种培养。
（3）粪草培养基。
稻草63斤，玉米粉4斤，大豆粉3斤，干牛粪25斤，过磷酸钙3斤，硫酸镁2斤，料水比1：1.1～1.3。
适合于双孢菇原种培养。
其中牛粪也可以鸡粪等等畜粪来代替，只是所加的量根据其所含氮量而定。
（4）谷粒培养基。
选新鲜、无虫、无霉变的小麦、（大麦、谷子、高粱、玉米粒均可），淘洗干净，按1：2.0比例加水，煮沸30分钟，闷4～6个小时，沥去水分，标准是“煮透晾干”，再加入干料1%的石膏粉，0.5%的石灰拌匀、装瓶。
适用于平菇、双孢菇原种培养。
该种培养基发菌快，在时间紧迫的情况下采用此培养基可以大大的节省时间。
3、培养基灭菌。
（1）高压蒸汽灭菌法。
主要用于母种，灭菌的条件是0.11～0.12千帕。
原种灭菌一般是0.12千帕，1.5小时。
（2）常压蒸汽灭菌。
主要用于原种和栽培种。
灭菌的条件一般是灭菌器内达到100℃后保持8～10个小时。
食用菌菌种制作工艺流程及各工序生产规程
食用菌菌种制作工艺流程及各工序生产规程一：生产工艺流程培养基配制→分装→灭菌→冷却→接种→培养(检查)→成品二：生产规程0：母种使用玻璃试管和棉塞，试管18mm×180mm．1或20mm×200mm，棉主要使用梳棉，不应使用脱脂棉。
0：原种使用650mL-750ml，耐126℃高温的五色或近五色的玻璃茵种瓶，或850ml耐126℃高温白色半透明符合?食品包装用聚乙稀成型品卫生标准?规定的塑料菌种瓶，或15cm×28cm耐126℃高温符合?食品包装用聚乙烯成型品卫生标准?规定的聚丙烯塑料袋．各类容器部应使用棉塞，棉塞应符合规定；也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。
0：栽培种使用符合原种规定的容器，也可使用≤17cm×35cm耐126℃高溫符合?食品包装用聚乙烯成型品卫生标准?规定的聚丙烯塑料袋。
各类容器都应使用棉塞或无棉塑料盖，并符合原种规定。
0：母种常用培养甚及其配方培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200 g(用浸出汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，PH值自然。
培养基(综台马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁o.5g，琼脂20g，水1000 mL，pH值自然。
0：生物制剂和天然材料类生物制剂如酵母粉和蛋白胨，天然材料如木屑、棉籽壳、麦麸等，要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净；枯燥。
0：净化工作台的消毒处理方法先用75％酒精或新洁尔灭溶液进行外表擦拭消毒，然后预净20min．0：培养期的检查各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种．0:培养条件要求不同种类或不同品种应分区培养。
根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度〔多在室温20℃～24℃〕，保持空气相对湿度在75%以下，通风，避光。
0:灭菌效果的检查方法培养基配制后应在4h内进锅灭菌。
母种培养基灭菌0.11MPa～0.12MPa，30min。
食用菌的菌种制作技术
常用消毒灭菌药品 1、酒精常用浓度75％ 2、40％甲醛、高锰酸钾; 3、气雾消毒剂克霉灵、菇保号等 4、高锰酸钾常用浓度0.1％--0.2％ 5、5％石炭酸(苯酚溶液) 6、1％--2％来苏儿。
母种的制作 一、母种培养基的制备 1.母种培养基的配方 (1)PDA培养基:土豆200g，葡萄糖20g， 琼脂20g，水1000ml。 (2)综合培养基:土豆200g，葡萄糖20g， 琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g 维生素B1两片，蛋白胨2g，水1000ml
食用菌母种的制作过程
煮土豆； 配制母液； 分装； 灭菌； 接种； 培养。
母种的简易制作方法
菌种组织的分离方法
母种的扩大繁殖
三、原种的制作方法
(原种培养基的制备 1.原种培养基配方： (1)棉籽壳培养基:棉籽皮78％，麸皮20％，糖1％ 石膏1％。 (2)木屑培养基:木屑78％，麸皮20％，糖1％ 石膏1％。 (3)谷粒培养基:小麦(玉米或谷粒)98％，石膏2％
(3)改良综合培养基:土豆100g，棉籽壳 100g，麸皮50g，葡萄糖20g，琼脂20g， 酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B1两片， 蛋白胨5g，水1000ml。
接种前的准备工作
① 1、接种前对接种箱（室）进行清洁消毒，并准备好接种用具。
2、 将待接种的培养基放入接种箱或室内架子上，用药物熏蒸或紫外线杀 菌灯消毒。
沁源县全民技能提升培训
田建新 沁源县农业技术推广中心
1单核菌丝 2双核菌丝 3锁状联合 4菇蕾 5成熟子实体 6子实层 7担子和担孢子
灭菌设备
接种设备
培养设备
主要接种工具
1、镊子，12cm、18cm两个型号 2、试管、菌种瓶和菌种袋 3、漏斗、量筒、量杯、磨口瓶 4、电炉或煤炉 5、温度计、湿度计、塑料绳、报纸等
食用菌原种的制作方法
食用菌原种的制作方法食用菌原种是培育高品质食用菌的开始，其制作方法关系到菌种的品质和生长效果。
下面将介绍10种关于食用菌原种的制作方法，并详细讲解每种方法的具体操作步骤、注意事项和优缺点。
1. 伏击法制种法伏击法制种法是一种常见的食用菌原种制作方法，其操作简单，适用于多种食用菌的原种制作。
具体方法如下：步骤一：准备原料。
选一定数量的食用菌菌盖和菌蒂，尽量选用种粒外形完整、表面干净、无病害的菌盖和菌蒂。
步骤二：将菌盖和菌蒂归并，放到70%酒精中清洗30秒，然后取出沥干。
步骤三：将菌盖和菌蒂放到滤纸上，擦干表面水分，放到蒸汽锅中蒸10分钟，杀灭病菌和杂菌。
步骤四：将蒸好的菌盖和菌蒂拿出来，再次擦干表面水分，放到培养基上。
步骤五：放到恒温摇床上培养，震荡180rpm，28℃，恒温培养7-14天，即可获得食用菌原种。
优点：操作简单，适用范围广，菌株易保存。
缺点：成活率较低，制作时间较长。
2. 含砂蒸法制种法含砂蒸法制种法是应用含石英砂的菌种培养基来制作食用菌原种，能提高种粒触蒸面积，提高出菌率和菌株的品质。
具体方法如下：步骤一：准备含砂菌种培养基。
将玉米粉、蔗糖、石英砂和蒸馏水按一定比例混合，制作含砂菌种培养基。
步骤二：准备原料。
选一定数量的食用菌菌盖和菌蒂，按照比例加入含砂菌种培养基中。
步骤三：将含菌培养基放在琼脂板上，在30℃下反复震动震荡搅拌。
步骤四：将培养好的固体菌种放在75%-80%的相对湿度内，保持湿润并置于通风且恒温保持在22℃下。
步骤五：待菌体生长到一定大小时，再将其移植到适宜的菌床中。
优点：出菌率高，菌株品质好。
缺点：制备过程中需掌握好配方和稠度。
3. 傅里叶红外辐射制种法傅里叶红外辐射制种法是利用电极辐射灯产生的热量来使制种容器内的培养液升降温，低温使菌体沉积在液表面，高温则使其下沉到液底，实现制种的目的。
具体方法如下：步骤一：将食用菌种子与蔓茎切片、米糠混合后，加入到恒温恒湿的发酵箱内。
食用菌菌种制备技术
食用菌菌种制备技术菌种：原意是指孢子(相当于植物的种子) ，但在实际生产中，常将经过人工培养的纯菌丝体连同培养基质一同叫做菌种。
菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。
母种（一级）：将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成。
可以繁殖原种，也适宜菌种保藏。
原种（二级）：母种菌丝在固体培养基上繁殖而成。
这一过程增强菌丝对培养环境的适应性，又起到扩繁的作用。
原种可以直接出菇。
栽培种（三级）：由原种扩繁而成。
主要是为了扩繁，为生产提供足够的菌种。
菌种制备：也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。
以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。
种子制备包括孢子制备和菌丝体制备（见图）。
其中(1)～(4)为孢子制备过程。
保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，无菌操作挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天(或较长时间)。
所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基。
将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。
将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入4℃冰箱中备用。
一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。
放线菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、牛肉膏及无机盐与琼脂制成的。
将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中，于28～37℃培养5～14天。
所获得的大量孢子可直接作为种子罐(6)的种子。
如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶（5）液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。
种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。
其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆等），及无机盐(如磷酸盐)等。
作为发酵罐(7)的种子应是生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。
第三章 食用菌菌种制作
用途
栽培生产
特点 菌丝多而壮、适应性强
生产总过程
子实体 母种
栽培
原种
栽培种
（二）状态不同的菌种
1.固体 菌种
概念 用固体基质培养的菌种 设备、工艺简单 特点 菌龄长而不一 发酵率较低
概念 用液体基质培养的菌种 2.液体 设备、工艺较复杂 菌种 菌龄短而一致 特点 发酵率高 易老化和自溶
三、菌种生产程序
2、气体灭菌法（熏蒸杀菌法）
适用：接种箱、接种室和菇房消毒。 常用药物：40%甲醛溶液、硫磺、菇保一号、 科达气雾消毒盒、克霉灵气雾消毒剂。
第二节 母种制作
一、母种培养基制作
二、菌种分离 三、母种扩繁
一 母种培养基制作
（一）营养液制作(PDA培养基)
1.
准备工作
（1）材料 马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、 水。 （2）仪器用具及消毒药品 电炉子、铝锅、玻 璃棒、漏斗、纱布、止水夹、漏斗架、切菜小刀、切 板、1000ml烧杯、捆扎绳、棉花、试管 （18mm×180mm）、试管架、铁丝筐、1.5cm厚的长木 条、标签、天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、牛 皮纸、皮筋、纱布、恒温培养箱、手提式高压灭菌锅、 超净工作台或接种箱、接种铲、酒精灯、火柴、记号 笔等。消毒药品包括：75％的酒精棉球、0.25%新洁 尔灭溶液、烟雾消毒王或菇保一号等。
二 菌种分离
（一）概念
菌种分离：用无菌操作的方法将所需要的食用菌 从混杂的微生物群体中单独分离出来的过程。
（二）关键
严格按无菌操作规程进行 无菌操作：任何一个操作过程都要注意避免把其 它任何无关的菌体带入到培养基中。 注意二点： 1．严格树立无菌观念； 2．严格遵循无菌操作规程。
栽培种菌种制作工艺流程
栽培种菌种制作工艺流程栽培种菌种制作工艺流程主要包括以下几个关键步骤：
1. 母种（一级种）制作：
- 选取优良菌株：首先选择遗传稳定性好、生产性能优良的原始菌株。
- 制作培养基：按照特定配方配制适宜菌种生长的琼脂培养基，高温灭菌后冷却至接种温度。
- 接种操作：无菌条件下，从保存的菌种试管或冷冻管中取出少量菌丝体，接入已冷却的固体培养基平板或斜面中，置于恒温培养箱内培养。
2. 原种（二级种）制作：
- 制作培养料：根据菌种特性和栽培要求，配制适合菌丝生长的固体或半固体培养料，同样进行灭菌处理。
- 接种与培养：待培养料冷却后，在无菌环境中，将长势良好的母种接种到原种培养料中，密封后放置于适宜的温度和湿度条件下培养，让菌丝充分生长发育。
3. 栽培种（三级种）制作：
- 大量制备培养料：根据栽培规模，大量配置含水量、营养成分适宜的栽培种培养料，经高温灭菌后冷却备用。
- 接种与扩大培养：将已发育成熟的原种均匀撒播或插入栽培种培养料中，适当压实并做好保湿措施，继续在适宜条件下进行大规模培养，直至菌丝充满培养料，达到可以用于栽培的标准。
4. 质量检测与保存：
- 在整个制作过程中，要定期检查菌丝生长状况，确保无杂菌污染。
- 栽培种制作完成后，进行质量检测，确认菌种活力、纯度达标后方可用于大面积栽培。
- 对于暂时不用的菌种，应按照相应菌种的保存条件妥善保存，以保持其活性和遗传稳定性。
以上是通用的菌种制作流程，不同种类的食用菌或药用菌可能在培养基配方、培养条件以及接种方式等方面存在一定的差异。
食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程
食用菌菌种分级和生产的基本工艺流程一、菌种分级食用菌的菌种分为三级，即母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)。
1、母种(一级种) 通过孢子或组织分离培养获得，并经鉴定为种性优良，遗传和生理性状相对稳定的在试管斜面上生长和保存的纯菌丝体。
也有人称之为试管种。
2、原种(二级种) 由母种转接到天然基质(培养基)上经培养而成的菌种。
这是菌丝体和天然基质的混合体。
3、栽培种(三级种) 由原种转接在天然基质(培养基)上扩大繁殖而成的菌种。
栽培种也是菌丝体和天然基质的混合体。
栽培种常作为栽培用菌种，或直接出菇。
也有人称之为生产种。
二、菌种生产的基本工艺流程作为栽培用的菌种，国内外均采用固体培养，使用固体菌种。
其大致工艺流程为：母种→母种扩繁(培养基制备→接种→培养检查→成品)↓↓←原种成品←(培养检查←冷却接种←灭菌←配料分装)原种制作栽培种制作(配料分装→灭菌→冷却接种→培养检查) →栽培种成品三、母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。
(一)、常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。
培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。
第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。
如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。
第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。
第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。
这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。
这一点必须在配制时就考虑到。
这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。
食用菌各级菌种的制作
感谢您的根据 菌种特性，选择合 适的培养基配方， 并进行灭菌处理
接种与培养：将菌种 接入培养基中，控制 好温度、湿度、光照 等条件，促进菌种的 生长繁殖
采收与保存：当菌种 长满整个培养基时， 进行采收并妥善保存 ，以备后续使用
栽培种制作
栽培种制作：将原种接种到栽 培种培养基中，培养成栽培种
接种方法：采用无菌操作技 术，保证菌种纯度
食用菌菌种制作
菌种制作的基本原理
菌种分离：从自 然界中分离出食 用菌的纯菌种
培养基制备：制 备适合食用菌生 长的培养基
接种与培养：将纯 菌种接种到培养基 上，进行培养
菌种鉴定：对培养出 的菌种进行形态学和 生物学鉴定，确保其 纯度和优良性状
菌种保藏：对优良 菌种进行保藏，以 备后续生产和研究 使用
鉴定：对分离 得到的菌种进 行形态学和生 物学鉴定，确 保其纯度和质
量。
保存：将纯化 的菌种进行低 温保存，以备
后续使用。
一级菌种的制作
母种的定义和作用
母种制作
母种制作所需的材料和工具
母种制作的具体步骤和注意事项
母种制作过程中的常见问题和解决方法
原种制作
母种制作：选择优良菌株，进行 培养基制备、接种、培养等步骤
培养基配方：根据菌株特性选择 合适的培养基配方
接种方法：采用无菌操作技术进 行接种
培养条件：控制温度、湿度、光 照等条件，促进菌丝生长
二级菌种的制作
栽培种制作
母种准备：选择优良菌株，制备培养基 原种制作：将母种接入原种培养基，培养至菌丝长满瓶 栽培种制作：将原种接入栽培种培养基，培养至菌丝长满瓶 接种方法：采用无菌操作技术，保证菌种纯度 培养条件：控制温度、湿度、光照等条件，促进菌丝生长 质量检测：对菌种进行质量检测，保证菌种质量和纯度
食用菌菌种制作详解
灭菌效果检验
培养基的灭菌效果要经常检验，是否灭菌彻底： 一般情况下，灭菌后的培养基最好应放在要培 养的温度下，空白培养1周，可检查灭菌效果。 如果在这一段时间内培养基没发生任何变化， 说明灭菌效果良好，可以使用。
液体菌种
简言之就是将纯正优良的菌种，接入液体培养 基（固体培养基不加凝固剂），使菌丝繁殖形 成大量小菌球，然后将这种培养基拌入木屑或 棉籽皮料内，制成菌块、培养其形成子实体。 还可用于制原种、栽培种。
目前，用液体深层发酵法生产菌种，具有生产 量大、周期短、菌龄整齐、成本低廉、接种方 便等特点，是实现食用菌工厂化生产的目标。
生产上常用的栽培种
木屑、棉籽壳菌种 麦粒菌种 玉米粒菌种 木块菌种 木筷菌种 牙签菌种
接种技术与环境的消毒
接种箱（接种室）
接种室和接种箱是进行菌种分离接种的场所， 和外界空间隔绝，防止空气流动，经过一定的 消毒措施后，室内就可达到无菌状态，防止分 离和接种时污染杂菌。一般一个接种箱就可展 开工作，如有条件也可建一个接种室。
2.半合成培养基：在天然培养基中，适当增 加无机盐类，或在合成培养基中添加少量 别的有机物，成为半合成培养基，介于天 然培养基和合成培养基之间。主要目的是 促进菌丝生长发育。 3.合成培养基：用化学成分已知的有机物或 无机物配制而成的培养基。由于各种化学 成分已经清楚，容易控制，所以适合某些 定性和定量研究。
２．原种扩接
选取10支菌丝洁白、粗壮、生长整齐的试 管种进行原种的扩接，另外20支纯菌丝母种等 做完出菇试验后再作留种及相关处理。一支试 管种可接５瓶原种，每支试管接完要进行火焰 干热灭菌后再扩接另一支试管。接种完毕后取 出菌种瓶放入25℃左右恒温箱培养，菌丝满瓶 后10天左右进行出菇试验。
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤
食用菌母种、原种、栽培种制作步骤食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。
菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。
一、菌种制作食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.制作母种（一级种）1.1菌种采集选择健壮无病虫害的食用菌子实体。
经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。
1.2母种培养基制作配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。
先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml 纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。
2.制作原种（二级种）将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph 值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。
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勿堆放过挤 及时挑拣污染瓶（袋） 栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧 控制菌龄（菌丝长满后7~10天使用）
食用菌各级菌种的制作
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食用24
二、菌种质量的鉴定
鉴定 项目
形态特征、生理特性、 栽培性状、经济效益等
（一）母种质量的鉴定
好
菌丝白、整齐、粗壮、 有弹性、萌发快等
食用菌各级菌种的制作
感谢您的阅览
食用菌菌种
人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。
1）母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分 离等培育的菌丝体称为母种。
2）原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、 棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。
3）栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成 为生产上使用的菌种称为栽培种。
食用菌各级菌种的制作
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三、培养基原料用途的几点说明
⑴米糠、麸皮作用 作用：补充氮源和维生素。
稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原 料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。 麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。 米糠：含氮量比麸皮少。 用量：一般10%-20%，过多易引起污染。
食用菌各级菌种的制作
出菇快 产量高 品质好 抗逆性强
食用菌各级菌种的制作
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（二）原种、栽培种质量的鉴定
具有
菌丝白（符合该菌种的颜色） 均匀、粗壮、有菇香味 接种后萌发快
没有
无杂色、无黄水、无结皮、 无原基、无干缩脱壁等现象
菌种种类 品种名称 菌种级别 代时 生产厂家 接种日期
食用菌各级菌种的制作
用于生产
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食用菌各级菌种的制作
光线暗
空气湿度 60%-70%
温度约25℃
食用菌各级菌种的制作
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（二）技术环节
1.母种 培养
培养时间5~10天
及时挑拣污染管
分离的母种要纯化→出菇试验 →使用
控制菌龄（即将长满斜面）
食用菌各级菌种的制作
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食用菌各级菌种的制作
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母种培养
食用菌各级菌种的制作
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2.原种 栽培种 的培养
培养时间：约30天
一般1支试管菌种可繁殖4-6瓶原种，每瓶原
种又可扩大繁殖60-100瓶栽培种。
食用菌各级菌种的制作
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原种和栽培种的生产，无论是培养基成分， 配制方法和灭菌方法基本上是相同的。
1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作 种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直 接用于生产。（母种→原种）
2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用 于生产。（原种→栽培种）
3、棉籽壳木屑综合培养基（适用于大多数食用菌菌丝 生长）
木屑32% 、棉籽壳50%、麸皮15% 、石膏1%、蔗糖1% 、 过磷酸钙0.5% 、尿素0.5%，水适量。
4、麦粒培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长）
小麦98% 、石膏2%、水适量。
食用菌各级菌种的制作
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二、培养基（料）配制原则
⑴掌握碳氮比例 食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳
食用菌各级菌种的制作
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三、原种、栽培种的接种
接
用接种耙取蚕豆大母种
原
放于瓶中料面上
种
食用菌各级菌种的制作
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食用菌各级菌种的制作
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接
用接种匙（镊、铲）取枣大原种
栽
放于袋的两端或瓶中料面上
培
种
食用菌各级菌种的制作
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栽培种接 种
食用菌各级菌种的制作
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四、菌种培养
(一)培养条件
场所清洁
空气清新
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二、培养基（料）配制原则
⑶ 注意物理性状 培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，
以及持水性能等物理性状。 ⑷调节酸碱度
各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时， 应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节 pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有 时为了控制这类杂菌的发生，往往将pH值适当调 高0.5-1。
食用菌各级菌种的制作
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一、常用培养料的配方和配制方法
木屑——米糠培养料：木生菇类，如： 木耳、银耳、香菇；
培 养 谷粒——多种菇类。 料
棉籽壳——米糠培养料：多种菇类。
食用菌各级菌种的制作
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一、常用培养料的配方和配制方法
1、木屑米糠培养基（适用于木腐菌食用菌菌丝生长）
木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。 2、棉籽壳麸皮培养基（适用于大多数食用菌菌丝生长） 棉籽壳78%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏1%、水适量。
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污染
黄 水
食用菌各级菌种的制作
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食用菌菌种的保存
•
无论是母种、原种或栽培种，如果未及时
原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供 食用菌钙离子； ②钙不断中和食用菌产生的有机酸； ③钙还能中和单宁。
食用菌各级菌种的制作
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四、原种、栽培种的制作方法
按配方称取原料→拌料→调节含水量65%左右→ 装袋→灭菌（1.5kg／cm2，1.5-2h）→冷却→接 种（接入黄豆大小一块菌种）→培养（25℃ 27℃）→菌丝长满瓶（袋）→培养7d-8d→扩大 成栽培种。
、
1.外观
差
丝干燥、收缩、自溶 产生红褐色液体等
食用菌各级菌种的制作
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好母种
退化母种
食用菌各级菌种的制作
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2.鉴定 耐干湿性试验
原种 培养基 含水量
＜50% 接入母种→正常生长
＞70%
耐高温性试验
适温培养7天 30~35 ℃锻炼24h 再适温培养
仍正常生长
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出菇试验
栽培
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三、培养基原料用途的几点说明
⑵加糖的作用 ①初期补充碳源，用量1%-5%。 ②诱导胞外酶的产生。
纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖 作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长， 同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。
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三、培养基原料用途的几点说明
⑶Ca2＋作用 ①提供食用菌钙离子：
含水量65%左右判断：用手紧握培养料，手指 缝中有水珠渗出，但不滴下。
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五、杂菌检查（菌种检查）
接种后的原种，一般在3d~5d左右菌丝恢复 生长，应每天全面检查杂菌情况，如有污染及 时剔除；如发现接种块无新菌丝萌发，则认为 是死菌，应及时补种。
正常：菌丝白色 杂菌：黄、红、绿、黑 死菌：补种
氮比（C／Ｎ）。 菌丝体生长阶段：C／Ｎ=20∶1； 子实体形成阶段：C／Ｎ=30-40∶1。
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二、培养基（料）配制原则 ⑵ 选好培养材料
选不含杀菌物质的木屑 杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌
物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理， 如：蒸煮、晒等。
食用菌各级菌种的制作