分子生物学实验手册 -高校教材资料精
分子生物学大实验习题及解答(精)
分子生物学大实验习题及解答一、名词解释1、genome；2、基因芯片；3、持家基因；4、Operon；5、感受态细胞；6、逆转录酶；7、PCR技术；8、转化；9、重组DNA技术；10、基因沉默；11、hnRNA；12、复制子；13、反义RNA；14、衰减子；15、拟基因；16、RNA编辑；17、颠换；18、拓扑异构酶；19、变性；20、转座子二、基础理论单项选择题1、DNA连接酶的作用为（）A、合成RNA引物B、将双螺旋解链C、去除引物、填补空隙D、使双螺旋DNA链缺口的两个末端连接2、DNA复制中RNA引物的主要作用是( )。
A、引导合成冈奇片段B、作为合成冈奇片段的模板C、为DNA合成原料dNTP 提供附着点D、激活DNA聚合酶3、下列哪一种蛋白不是组蛋白的成分（）A、 H1B、H2A 、H2BC、 H3、H4D、 H54、DNA的变性：（）A、包括双螺旋的解旋B、可以由低温产生C、是可逆的D、是磷酸二酯键的断裂5、转录需要的原料是:（）A、 dNTPB、 dNDPC、 dNMPD、 NTP6、在原核生物复制子中以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核甘酸：A、DNA聚合酶ⅢB、 DNA聚合酶ⅡC、DNA聚合酶ⅠD、外切核酸酶MFl7、下真核生物复制起始点的特征包括（）A、富含GC区B、富含AT区C、 Z DNAD、无明显特征8、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（）A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同B、分子大小不同C、分子极性不同D、溶解度不同9、DNA复制时不需要以下哪种酶？（）A、 DNA指导的DNA聚合酶B、RNA指导的DNA聚合酶C、拓扑异构酶D、连接酶10、1、证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎链球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。
这两个实验中主要的论点证据是：（）A、从被感染的生物体内重新分离得到DNA，作为疾病的致病剂B、DNA突变导致毒性丧失C、生物体吸收的外源DNA（而并非蛋白质）改变了其遗传潜能D、DNA是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子11、利用自己的位点专一重组酶把自己从寄主基因组中的一个地方移到另一个地方的遗传元件叫（）A、启动子B、转座子C、T-DNAD、顺反子12、原核DNA合成酶中（）的主要功能是合成前导链和冈崎片段A、DNA聚合酶ⅠB、DNA聚合酶ⅡC、DNA聚合酶ⅢD、引物酶13、在基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒以便于重组和筛选。
《分子生物学》实验指导(2015-2016)
《分子生物学》实验指导实验1 总DNA提取生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。
由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。
同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。
本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。
[实验目的]学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。
学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。
[实验原理]植物叶片经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如CTAB），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。
本实验采用CTAB法，其主要作用是破膜。
CTAB 是一种非离子去污剂，能溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。
植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来。
CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。
经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。
由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。
核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。
纯的DNA样品A260/280≈1.8，纯的RNA样品A260/280≈2.0，并且1μg/ml DNA 溶液A260=0.020。
[实验器材]1、高压灭菌锅2、冰箱3、恒温水浴锅4、高速冷冻离心机5、紫外分光光度计6、剪刀7、陶瓷研钵和杵子8、磨口锥形瓶（50ml）9、滴管10、细玻棒11、小烧杯（50ml）12、离心管（50ml）13、植物材料[实验试剂]1、3×CTAB buffer（pH8.0）100mM Tris25mM EDTA1.5M NaCl3% CTAB2% β-巯基乙醇2、TE缓冲液（pH8.0）10mmol/L Tris·HCl1mmol/L EDTA3、氯仿-异戊醇混合液（24：1，V/V）4、95％乙醇5、液氮[实验步骤]1、称取2g新鲜的植物叶片，用蒸馏水冲洗叶面，滤纸吸干水分。
分子生物学：基础实验技能培训实验操作手册
基础实验技能培训实验操作手册2014-08植物基因组DNA提取实验材料：植物样本，植物基因组DNA提取试剂盒，β-巯基乙醇，氯仿，无水乙醇实验仪器、耗材：移液器、电泳仪、离心机、研钵、研钵棒、剪刀、天平、液氮实验前准备：1．Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，5 ml Buffer GP1加5 μl β-巯基乙醇。
加入β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。
2．预热水浴锅65度，将加入配制好的巯基乙醇预热。
3．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4．称取植物样本约100 mg。
5．在研磨植物材料前，向研钵中倒入酒精，放入剪刀、钥匙高温消毒。
6．研钵、剪刀、钥匙冷却后，将液氮加入在研钵中以预冷研钵。
实验步骤：1. 取植物新鲜组织约100 mg，用剪刀将样本剪碎，放入研钵，加入液氮充分研磨至粉末状。
将粉末转移到离心管中。
注意：冻存材料直接研磨，绝对不能化冻。
而且粉末应在化冻前转移，否则内源性DNase 有可能降解基因组DNA。
2. 加入700 μl 65℃预热的Buffer GP1（Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，5 ml BufferGP1加5 μl β-巯基乙醇），迅速颠倒混匀后，将离心管置于65℃水浴20分钟，水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。
3. 加入700 μl 氯仿，充分混匀，12,000 rpm（～13,400×g）离心5分钟。
小心将上层水相转入一新的离心管中，加入700 μl Buffer GP2，充分混匀。
4. 将上步所得溶液全部加入到已装入收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column DM）中。
若一次不能加完溶液，可分多次转入。
10,000 rpm（～11,500×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
5. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
分子生物学实验讲义
实验质粒DNA的碱裂解法提取与纯化一、实验原理细菌质粒是一类双链、闭环的DNA, 大小范围从1kb至200kb以上不等。
各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份, 通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态, 但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上, 随着染色体的复制而复制, 并通过细胞分裂传递到后代。
质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子, 重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。
目前已有许多方法可用于质粒DNA的提取, 本实验采用碱裂解法提取质粒DNA。
碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法, 其基本原理为: 当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时, 蛋白质与DNA发生变性, 当加入中和液后, 质粒DNA分子能够迅速复性, 呈溶解状态, 离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状, 离心时可沉淀下来。
纯化质粒DNA的方法通常是利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。
例如, 氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇分级沉淀等方法, 但这些方法相对昂贵或费时。
对于小量制备的质粒DNA, 经过苯酚、氯仿抽提, RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA, 所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化、DNA片段的分离和酶切、常规亚克隆及探针标记等要求, 故在分子生物学实验室中常用。
二、实验试剂1.溶液Ⅰ: 50mM葡萄糖, 25mM Tris-HCl(pH 8.0), 10mM EDTA(pH 8.0）。
1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml, 0.5M EDTA（pH 8.0）10ml, 葡萄糖4.730g, 加ddH2O至500ml。
在10 lbf/in2高压灭菌15min , 贮存于4℃。
2.溶液Ⅱ: 0.2N NaOH, 1% SDS。
2N NaOH 1ml, 10%SDS 1ml, 加ddH2O至10ml。
分子生物学操作手册
分子生物学操作手册一、引言分子生物学是研究生物体分子结构、功能和相互作用的一门学科。
操作手册旨在提供分子生物学实验的详细步骤，并帮助读者准确、高效地进行实验操作。
本文将介绍PCR扩增、DNA电泳、亚克隆和蛋白质表达等实验步骤，并提供一些常用操作的技巧和注意事项。
二、PCR扩增PCR扩增是分子生物学实验中常用的技术，用于扩增特定区域的DNA片段。
以下是PCR扩增的基本步骤：1. 准备PCR反应体系：根据实验需要，配置PCR反应液，包括DNA模板、引物、酶、缓冲液和dNTPs等。
2. 设定PCR程序：根据模板序列的长度和引物的特性，设定合适的PCR程序，包括变性、退火和延伸等步骤。
3. PCR反应：将PCR反应体系置于热循环仪中，按照设定的程序进行PCR反应。
4. 结果分析：利用DNA电泳等技术，分析PCR反应产物的大小和纯度。
三、DNA电泳DNA电泳是一种常用的DNA分析技术，用于确定DNA片段的大小和纯度。
以下是DNA电泳的基本步骤：1. 制备琼脂糖凝胶：根据需要，配制适当浓度的琼脂糖凝胶，并倒入凝胶槽中，形成凝胶床。
2. 加载样品：将PCR扩增产物或其他DNA样品与DNA标记物混合，加入琼脂糖凝胶孔中。
3. 进行电泳：将凝胶槽放入电泳仪中，进行电泳操作，根据需要设置适当的电压和时间。
4. 结果分析：利用紫外线透射仪观察凝胶上DNA迁移的情况，测量DNA片段的大小。
四、亚克隆亚克隆是将DNA片段插入到载体DNA中的过程，通常用于构建重组DNA或进行基因克隆。
以下是亚克隆的基本步骤：1. 准备载体和DNA片段：准备含有目标基因的DNA片段和经酶切的载体DNA。
2. 消化与连接：将DNA片段与载体DNA进行连接反应，通常使用DNA连接酶。
3. 转化：将亚克隆反应产物转化到适当的宿主细胞中，如大肠杆菌。
4. 筛选与鉴定：通过筛选培养基和PCR等技术，鉴定含有目标基因的克隆。
五、蛋白质表达蛋白质表达是将目标蛋白质在细胞内大量合成的过程，利用该技术可以生产重组蛋白以供研究和应用。
高中生物实验指南：分子生物学实验操作手册
高中生物实验指南：分子生物学实验操作手册1. 简介分子生物学是研究生物体内分子结构、组成、功能以及相互作用的科学。
在高中生物学课程中，通过进行一系列分子生物学实验，可以加深对基因、DNA、RNA等内容的理解，并培养学生动手实践和科学探究的能力。
本操作手册将介绍一些适合高中副标准课程的基本分子生物学实验，帮助教师和学生更好地开展这方面的实验教学。
2. 实验一：提取DNA2.1 实验目的了解DNA的结构和提取过程，并掌握提取DNA的基本方法。
2.2 材料与仪器•成熟香蕉或其他植物材料•盐水溶液（含氯化钠）•蛋白酶（如葡萄胺酸酶）•洗涤剂（如洗衣粉）•咖啡滤纸或滤纸漏斗•烧杯•酒精1.将香蕉剥皮后放入砧板上，用刀将香蕉捣碎成泥状。
2.在烧杯中加入适量的盐水溶液，并将捣碎的香蕉放入其中搅拌均匀。
3.加入少量蛋白酶和洗涤剂，再次搅拌均匀，让细胞破裂释放DNA。
4.将混合物过滤到另一个烧杯中，通过滤纸除去大颗粒的残渣。
5.将过滤后的溶液倒入试管中，并缓慢地倾斜试管，在溶液与酒精接触的界面处，会出现白色粘稠物质，即提取到的DNA。
2.4 实验结果及分析实验中提取到的DNA呈现为白色细丝状物质。
通过这个实验可以观察到DNA 在水相和酒精相之间的界面上凝聚堆积。
说明了DNA在酒精中不溶性，从而便于提取。
3. 实验二：PCR扩增3.1 实验目的了解聚合酶链式反应（PCR）的原理和基本步骤，并能够进行PCR扩增实验。
3.2 材料与仪器•PCR试剂盒（含模板DNA、引物、聚合酶等）•热循环仪•PCR试管或反应管1.准备PCR反应体系，按照试剂盒说明书的要求加入模板DNA、引物和聚合酶等。
2.将装有反应溶液的PCR管放入热循环仪中。
3.设置PCR的温度程序，包括变性、退火和延伸阶段。
4.启动热循环仪开始PCR扩增反应。
5.完成PCR后，可以通过凝胶电泳等方法检测扩增产物。
3.4 实验结果及分析通过PCR扩增，可以在较短的时间内大量复制并放大目标基因片段。
分子生物学实验报告全解（有图有真相）讲解
分⼦⽣物学实验报告全解（有图有真相）讲解分⼦⽣物学实验报告慕蓝有志班梦想学院⽬录实验⼀细菌的培养 (2)实验⼆质粒DNA的提取 (4)实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA (7)实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定 (9)实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA (11)实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析 (14)实验七RNA分离与纯化 (17)实验⼋RT-PCR扩增⽬的基因cDNA (19)实验九质粒载体和外源DNA的连接反应 (21)实验⼗感受态细胞的制备及转化 (23)实验⼗⼀克隆的筛选和快速鉴定 (25)实验⼗⼆地⾼⾟标记的Southern杂交 (27)实验⼗三阿拉伯糖诱导绿⾊荧光蛋⽩的表达 (31)思考题 (32)分⼦实验⼼得总结 (33)实验⼀细菌的培养⼀、⽬的学习细菌的培养⽅法及培养基的配置。
⼆、原理在基因⼯程实验和分⼦⽣物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。
质粒的保存、增殖和转化；基因⽂库的建⽴等都离不开细菌。
特别是常⽤的⼤肠杆菌。
⼤肠杆菌是含有长约3000kb的环状染⾊体的棒状细胞。
它能在仅含碳⽔化合物和提供氮、磷和微量元素的⽆机盐的培养基上快速⽣长。
当⼤肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进⼊⼀个滞后期。
然后进⼊对数⽣长期，以20~30min复制⼀代的速度增殖。
最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速⽣长的浓度时，菌体密度就达到⼀个⽐较恒定的值，这⼀时期叫做细菌⽣长的饱和期。
此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。
培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。
实验室中最常⽤的是LB培养基。
三、实验材料、试剂与主要仪器（⼀）实验材料⼤肠杆菌（⼆）试剂1. 胰蛋⽩胨2. 酵母提取物3. 氯化钠4. 1mol/L NaOH5. 琼脂粉6. 抗⽣素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1. 培养⽫2. 带帽试管3. 涂布器4. 灭菌锅5. ⽆菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌⽛签等）6. 恒温摇床四、操作步骤（⼀）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离⼦⽔中加⼊：细菌培养⽤胰蛋⽩胨10g细菌培养⽤酵母提取物5gNaCl 10g摇动容器直⾄溶质完全溶解，⽤1mol/L NaOH调节pH位⾄7.0。
分子生物学实验指导（精）
分⼦⽣物学实验指导（精）分⼦⽣物学实验指导⽣物技术教学室编宁夏⼤学⽣命科学学院2008年8⽉实验⼀分⼦⽣物学实验技术多媒体演⽰[⽬的要求]通过多媒体试验录像进⼀步掌握分⼦⽣物学基本操作技术。
[教学⽅式]多媒体光盘演⽰。
[实验内容]基本的分⼦⽣物学实验操作技术包括核酸凝胶电泳技术；质粒提取；转化；重组体的筛选；PCR技术等。
实验⼆琼脂糖凝胶电泳检测DNA[⽬的要求]通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的⽅法和技术[实验原理]琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA⽚段的常⽤⽅法。
DNA分⼦在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分⼦筛效应，DNA分⼦在⾼于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于糖磷酸⾻架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA⼏乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极⽅向移动。
不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp⾄50 kb的DNA⽚段。
在琼脂糖溶液中加⼊低浓度的溴化⼄锭（Ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。
琼脂糖凝胶有如下特点：(1) DNA的分⼦⼤⼩在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数⽬的常⽤对数值成反⽐，分⼦越⼤迁移得越慢。
(2) 琼脂糖浓度⼀个特定⼤⼩的线形DNA分⼦,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。
DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。
(3) 电压低电压时，线状DNA⽚段迁移速率与所加电压成正⽐。
但是随着电场强度的增加，不同分⼦量DNA⽚段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩⼩。
要使⼤于2kb的DNA⽚段的分辨率达到最⼤，所加电压不得超过5v/cm。
(4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳⾏为受电泳时的温度影响不明显，不同⼤⼩的DNA⽚段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发⽣明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。
分子生物学实验教材(精)
分子生物学实验教材：参考书：《分子克隆实验指南》（第三版）黄培堂等译科学出版社实验一﹑大肠杆菌感受态细胞的制备及转化一.[目的要求]通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术。
二.[实验原理]细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。
转化是指质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。
细菌处于0︒C ，CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形，外源DNA附着于细胞表面，经42︒C 短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。
将细胞放置在非选择性培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新表型如Amp+得到表达，然后将此细菌培养物涂在选择性培养基上进行培养，从而获得转化子。
三.[教学内容]1.感受态细胞的制备基础知识及方法简介2.CaCl2法制备DH5α或JM109感受态细胞，计算转化效率3.pUC19等质粒和重组产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞四.[实验材料和用品]E. coli DH5α菌株: Rˉ,Mˉ,Ampˉ；pBS质粒DNA，eppendorf管。
超净工作台、恒温摇床、生化培养箱、平皿、LB培养基、CaCl2 溶液、氨苄青霉素、等五.[实验步骤]一、受体菌的培养从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。
将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。
二、感受态细胞的制备 ( CaCl2 法)1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。
2、弃去上清,用预冷的0.05mol/L的CaCl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。
3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/L的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。
分子生物学实验
分子生物学实验分子生物学实验I. 实验概述分子生物学是生物学的一个重要分支，主要研究生物分子的结构、功能及其在生命过程中的作用。
在现代生命科学研究中，分子生物学技术的应用越来越广泛，包括基因克隆、基因表达、蛋白质结构、信号转导等多个方面。
本实验将介绍几种基本的分子生物学实验操作，包括DNA的提取、PCR扩增、电泳检测和蛋白质的SDS-PAGE分析，旨在提高学生对分子生物学基础知识和实验技能的掌握。
II. 实验材料及设备1. 细菌培养基、磷酸盐缓冲液、EDTA、裂解液等试剂；2. 离心管、洗涤管、PCR管、电泳槽等设备；3. 离心机、PCR仪、电泳仪等设备。
III. 实验步骤1. DNA的提取(1) 收集细胞收集需要提取DNA的细胞，如细菌、白细胞等。
将细胞转移到1.5mL离心管中。
(2) 细胞裂解加入200μl裂解液，轻轻摇晃离心管，使细胞充分裂解。
离心管可置于65°C水浴中处理10分钟，使DNA完全裂解。
(3) DNA提取加入500μl磷酸盐缓冲液和10μl EDTA，混匀后离心5分钟。
取上清液转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，并轻轻倒置，使DNA在异丙醇界面上结团。
放置室温下10分钟，使用洗涤管将DNA结团转移到另一离心管中。
加入70%乙醇溶液洗涤2-3次，最后去除乙醇，用无菌水溶解DNA。
2. PCR扩增(1) 设计引物、制备PCR反应液按照所需扩增的DNA序列设计引物，制备PCR反应液，包括所需模板DNA、引物、Taq聚合酶、MgCl2等。
(2) PCR条件将PCR反应管放置PCR仪中，经过若干个循环，达到最终PCR产物的扩增。
PCR条件通常应选择对应引物特异性、Tm温度适中，并根据Taq聚合酶的活性和反应体系的最适条件优化所得。
常用的PCR条件为95℃预变性5min，94℃变性30s，Tm温度退火30s，72℃延伸1min，循环30-35次，最后72℃加延伸10min。
分子生物学常用实验技术(精)
分子生物学常用实验技术第一章质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第二章 DNA酶切及凝胶电泳第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第四章 RNA的提取和 cDNA 合成第五章重组质粒的连接、转化及筛选第六章基因组 DNA 的提取第七章 RFLP和 RAPD 技术第八章聚合酶链式反应 (PCR扩增和扩增产物克隆第九章分子杂交技术第十章测序技术第一章质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定第一节概述把一个有用的目的 DNA 片段通过重组 DNA 技术 , 送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体 (Vector。
细菌质粒是重组 DNA 技术中常用的载体。
质粒 (Plasmid是一种染色体外的稳定遗传因子 , 大小从 1-200kb 不等 , 为双链、闭环的 DNA 分子 , 并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力 , 能在子代细胞中保持恒定的拷贝数 , 并表达所携带的遗传信息。
质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细胞则不能存活 , 而宿主即使没有它们也可以正常存活。
质粒的存在使宿主具有一些额外的特性 , 如对抗生素的抗性等。
F 质粒 (又称F 因子或性质粒、 R 质粒 (抗药性因子和 Col 质粒 (产大肠杆菌素因子等都是常见的天然质粒。
质粒在细胞内的复制一般有两种类型 :紧密控制型 (Stringent control和松驰控制型 (Relaxed control 。
前者只在细胞周期的一定阶段进行复制 , 当染色体不复制时 , 它也不能复制 , 通常每个细胞内只含有 1个或几个质粒分子 , 如 F 因子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制 , 在每个细胞中有许多拷贝 , 一般在 20个以上 , 如 Col E1质粒。
在使用蛋白质合成抑制剂 -氯霉素时 , 细胞内蛋白质合成、染色体 DNA 复制和细胞分裂均受到抑制 , 紧密型质粒复制停止 , 而松驰型质粒继续复制 , 质粒拷贝数可由原来 20多个扩增至 1000-3000个 , 此时质粒 DNA 占总DNA 的含量可由原来的 2%增加至 40-50%。
分子生物学实验 ppt课件
对每个收集管进行A280与酶活力定性测定
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实验操作
第1次： 菌体超声破壁、离心、包涵体复性、装离子交换柱
实验顺序：超声破壁-->离心（洗涤，注意平衡）-->装柱 -->平衡-->包涵体溶解（2hr） -->复性-->测活
涉及单元实验：破壁、离心、装柱、复性、酶活测定 掌握要点：破壁原理
装离子交换柱方法 包涵体复性原理及方法 脂肪酶测活原理
5 注意留样!（上清0.5ml -20度保存） 注意标清组号！
6 登记测活数据（老师本子）
8 值日： A室、B室
（2组/次）
公用台物品不得挪用 桌面整齐 出席率-平时分！
冰箱分配 测活次序
上午定性测活！
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实验二内容
• 对上一次制备的上清液（8ml）/2 进行离子交 换层析 • 样品活性分析及蛋白浓度测定 • 绘制纯化表 • 纯度分析 (蛋白电泳)
对硝基苯酚磷酸酯 p-NPP
O
O - Na+
O-
P O-
N a+
碱性磷酸酶
O H 对硝基苯酚
p-NP
NO2 NO2
以对硝基酚磷酸二钠为底物，根据水解磷酯键所产生的对 硝基酚量测定酶活力。在37℃、pH10.0条件下，每分钟转 化产生1μmol/L对硝基酚的酶量为1个酶单位
《分子生物学》实验指导书
《分子生物学》实验指导书实验学时：32学时适用专业：生物科学、生物技术实验目录实验一质粒DNA的提取、酶切与电泳鉴定 (1)实验二聚合酶链式反应扩增DNA片段 (3)实验三大肠杆菌感受态细胞的制备与质粒DNA分子转化 (4)实验四植物基因组DNA提取及电泳 (6)实验五植物基因组RNA提取及电泳 (7)实验一质粒DNA的提取、酶切与电泳鉴定实验项目类型：综合性一、实验目的1. 学习质粒的相关基本知识，掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和方法。
2. 学习和掌握限制性内切酶的特性、掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法，并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具。
二、实验原理碱裂解法提取质粒DNA的原理是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA的结构差异来实现分离的。
在pH12-12.5时，线性DNA被彻底变性，但共价闭环质粒DNA虽然氢键也发生断裂，但两条互补链仍会紧密缠绕结合在一起。
当在溶液体系中加入pH4.8的KAC时，溶液恢复中性，质粒DNA迅速复性，染色体DNA则由于变性而相互混乱缠绕，不能复性，从而离心即可以把变性的染色体DNA沉淀和蛋白-SDS复合物沉淀分离出来。
三、实验仪器与材料1. 材料：含pSV的E.coli JM109菌株、1.5ml塑料离心管、离心管架、EB、酚、氯仿、异丙醇、乙醇、琼脂糖、吸头等。
2. 溶液或试剂：LB培养基、溶液Ⅰ、溶液II（0.4mol/L NaOH、2%SDS用前等体积混合）、溶液Ⅲ、分离液：酚/氯仿/异戊醇＝25:24:1、无水乙醇、70%乙醇等。
3. 仪器或其他用具：微量移液器(20μl,200μl,1000μl)、恒温振荡摇床、高压蒸汽灭菌锅、涡旋振荡器、琼脂糖凝胶电泳系统、凝胶成像系统、恒温培养箱、制冰机等。
四、操作步骤质粒DNA的提取步骤：1. 用灭菌的牙签挑取白色单菌落接种于另外已制备好的LB琼脂平板上，保存菌种，并把牙签放入盛3 ml LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。
分子生物学实验讲义(2020版-)
《分子生物学》实验讲义实验一分子生物学实验基础知识及常用仪器介绍实验二质粒DNA分离纯化实验三琼脂糖凝胶电泳实验四聚合酶链反应(PCR)检测质粒DNA实验五限制酶切鉴定质粒DNA实验一分子生物学实验基础知识及常用仪器介绍一、实验目的了解分子生物学实验特点，了解分子生物学实验室常用设备及基本实验操作。
二、实验内容1.分子生物学实验知识⑴严格操作规程分子生物学实验一般比较复杂，如所用试剂多、操作步骤多、实验时间长等，因此为保证实验效果，在实验室中一定要有整体观念，严格按照操作规程进行。
⑵耐心细致操作实验中不能急于求成，特别是对于初入门者，应反复操作，积累经验。
⑶习惯微量操作在分子生物学实验中，试剂的用量往往很少，常常细到1ul液体、ug或ng固体，这是平常肉眼很难看到的，所以刚刚接触实验的人往往感到不习惯，总是担心要取的东西能否看到、准不准确，操作的样品会不会丢失，总是想加大反应体积，以为越多越好。
这些观念都是错误的。
只有定时定量加入液体，才能保证实验成功，所以平时应加以练习，逐渐建立微量操作的观念才能解决好问题。
⑷防止实验污染分子生物学实验的对象主要是核酸，不同生物材料的DNA和DNA之间，不同的样品之间，核酸酶等蛋白酶与核酸之间，产物与反应物之间都有可能造成污染，最终导致实验的失败。
故要从所用试剂、仪器设备、耗材及操作人员等方面进行防止污染的操作。
⑸正确处理试剂分子生物学实验中对试剂的要求十分严格，包括试剂的等级、配制、除菌储备等各方面均有严格要求。
⑹注意实验安全分子生物学实验中，操作者常会接触一些对人体有害的试剂，必须实验安全要求进行实验操作，否则会给实验室甚至整个人类带来巨大的危害。
2.分子生物学实验常用仪器介绍⑴微量取液器⑵水纯化装置（离子交换器、超纯水装置）⑶离心机（低速、高速、超速）⑷电泳装置（电泳仪、电泳槽）⑸灭菌设备（高压蒸汽灭菌锅、过滤除菌器）⑹超净工作台⑺PCR仪⑻凝胶成像系统（紫外分析仪、核酸凝胶电泳图谱的记录）⑼温度控制设备（冷冻设备、培养箱、水浴箱、烤箱）⑽其它设备（紫外可见分光光度计、微波炉、凝胶干燥器、真空干燥仪）3.分子生物学基本实验操作⑴基因组DNA的分离与纯化（核酸浓度和纯度测定）⑵真核细胞mRNA的分离与纯化⑶质粒DNA的提取⑷PCR基因扩增实验⑸限制性内切酶酶切实验⑹DNA重组技术⑺DNA转移技术⑻DNA测序：化学法、双脱氧链终止法⑼核酸探针的制备技术：末端标记、PCR法制探针、非放射性探针⑽分子杂交技术：Southern印迹、Northern印迹和Western印迹4.微量移液器的使用可调节微量移液器标准操作程序（适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液）：⑴调节数字至所需体积；⑵装上吸嘴（不同规格的移液器用不同的吸头），注意气密性）；⑶按到第一档，垂直进入液面几毫米；⑷缓慢松开控制按钮（否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸入移液器内部吸入体积减少）；⑸停顿1s后将吸嘴提离开液面；⑹平稳按压打出液体。
西南大学[1166]《分子生物学》参考资料
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西南大学 网络与继续教育学院欢迎您！ %E9%97%AB%E6%96%87%E9%BE%99 同学学号：W16207893313002单项选择题1、 下列哪一项引起DNA移码突变? 1. DNA 链缺失一个核苷酸 2. DNA 中的胞嘧啶转换为尿嘧啶 3. DNA 中的腺嘌呤转换为鸟嘌呤 4.DNA 中的鸟嘌呤颠换为胸腺嘧啶2、 下列有关DNA 复制的论述，哪一项是正确的? 1. 随从链是连续合成的2. 新链合成的方向与复制叉前进方向相反者，称领头链3. 新链合成的方向与复制叉前进方向相同者，称领头链4. 领头链是不连续合成的3、下列何者是DNA 复制的底物? 1. dTTP2. dGDP3. ATP4.dUTP4、 在蛋白质的生物合成过程中，下列哪一步没有mRNA 参与1. 翻译的模板与核糖体结合2. 氨酰tRNA 识别密码子3. 起始因子的释放4.催化肽键的形成5、 下列有关DNA 聚合酶I 的论述，哪一项是错误的? 1. 没有5′-3′，外切酶活性 2. 是复制酶，又是修复酶 3. 有3′-5′外切酶活性 4.有5′一3′聚合活性6、在原核生物复制子中以下哪种酶除去RNA 引发体并加入脱氧核糖核苷酸？（ ） 1. F. DNA 聚合酶III 2. DNA 聚合酶II 3. DNA 聚合酶I4. 外切核酸酶MFI5.DNA 连接酶7、 参与DAN 复制的酶和蛋白质因子包括：⑴DNA 聚合酶III ；⑵解链蛋白和解旋蛋白；⑶DNA 聚合酶I ；⑷RNA 聚合酶；⑸DNA 连接酶。
它按如下顺序工作： 1. ⑵、⑶、⑷、⑴、⑸ 2. ⑷、⑵、⑴、⑸、⑶ 3.⑵、⑷、⑴、⑶、⑸4. ⑷、⑶、⑴、⑵、⑸5.⑷、⑵、⑴、⑶、⑸8、证明DNA 是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。
这两个实验中主要的论点证据是（ ）。
1.DNA 是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子 2. 生物体吸收的外源DNA （而并非蛋白质）改变了其遗传潜能 3. 从被感染的生物体内重新分离得到DNA 作为疾病的致病剂 4. 真核心生物、原核生物、病毒的DNA 能相互混合并彼此替代 5.DNA 突变导致毒性丧失9、下列除哪个外都是原核细胞中蛋白质生物合成的必要步骤： 1. 氨酰-tRNA 与核糖体的70S 亚基结合 2. 氨酰-tRNA 与核糖体的30S 亚基结合3. 氨酰-tRNA 合成酶催化氨基酸与核糖体结合4.70S 的核糖体分离形成30S 和50S 两个亚基10、Shine-Dalgarno 顺序（SD-顺序）是指：（ ）。
分子生物学实验-文档资料
提纯的思路
1.
基因组DNA的特性：分子量较大、易断（如何保证 DNA分子的完整性？）
2. 组织和细胞的破碎 3. 要去除的物质： 蛋白、多糖、脂类、RNA和小分子物质
一、材料 哺乳动物新鲜组织。
二、设备 移液管 高速冷冻离心机 台式离心机 水浴锅。
三、试剂：
1. 组织匀浆液 200 mL 灭菌备用 10mmol/L Tris-HCl pH 8.0
可能的结果：
由于基因组DNA比较难溶、且容易被降解，电泳时经常 会出现弥散的或不均一的条带（如左图）。所以实验时 一定要注意机械力对大分子DNA的破坏作用，如避免振 荡、使用扩口枪头等。另外要适当的延长溶解时间。
实验的常见问题、关键问题及难点：
基因组DNA的断裂、 蛋白和色素去除不干净 基因组DNA难溶、电泳时凝胶易碎
超净台中干燥加 50uL TE, 40C溶解过夜，-200C保存
基因组DNA的检测
前述方法得到的DNA一般可以用作Southern, RFLP、 PCR等分析。由于所用材料的不同,得到的DNA产量及 质量均不同,有时DNA中含有酚类和多糖类物质,会影 响酶切和PCR的效果。所以获得基因组DNA后,均需检 测DNA的产量和质量。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方 法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构 及所含的成分不同，分离方法也有差异。在提取某种特殊组 织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获 得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对 随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类 物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以动物肝脏为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。
分子生物学实验教案大纲目录
分子生物学实验教案大纲目录实验名称：分子生物学实验大纲：I.实验目的II.实验原理III.实验材料和仪器IV.实验步骤V.结果与讨论VI.实验总结目录：I.实验目的A.理解分子生物学的基本原理B.学习基本的实验技术和操作方法C.掌握基本的数据分析和结果解读方法II.实验原理A.DNA的提取和纯化方法B.聚合酶链式反应（PCR）的原理和步骤C.凝胶电泳检测和分析DNA片段D.基因克隆和重组DNA的技术和方法III.实验材料和仪器A.实验材料1.细菌培养基和培养物2.DNA提取试剂盒3.PCR试剂盒4.凝胶电泳试剂和缓冲液5.DNA标尺B.实验仪器1.离心机2.恒温水浴3.PCR仪4.凝胶电泳装置5.UV透射仪IV.实验步骤A.DNA提取和纯化1.细胞样本的处理和预处理2.DNA提取试剂盒的使用方法和步骤B.聚合酶链式反应（PCR）1.反应体系的准备和优化2.PCR反应程序和条件的设置3.PCR反应产物的凝胶电泳分析C.凝胶电泳分析和数据解读1.凝胶制备和加载样品2.凝胶电泳条件和运行3.结果的观察和解读D.基因克隆和重组DNA1.DNA片段的放大和纯化2. Vector DNA的选择和预处理3. DNA片段与Vector DNA的连接和转化4.转化物的筛选和确认V.结果与讨论A.实验结果的展示和解释B.实验数据的分析和讨论C.实验中的出现的问题和改进方法的探讨VI.实验总结A.实验结果的总结和归纳B.实验中的技术要点和注意事项总结C.对实验结果和数据的评价和建议A.分子生物学实验相关的教材和参考书目。
分子生物学实验手册handbook
分子生物学技术实验手册高雄医学院生物学系游仲逸、张永福编着目录实验一：Genomic DNA的制备实验二：Total RNA的制备实验三：聚合脢连锁反应实验四：DNA选殖实验五：基因转型实验六：质体DNA的少量制备和限制脢切割分析实验七：DNA定序分析实验八：北方点墨分析实验九：在大肠杆菌内大量表现重组蛋白实验一：Genomic DNA的制备实验目的纯化genomic DNA是一系列DNA分析，如南方点墨法(Southern blotting)，聚合脢连锁反应(polymerase chain reaction, PCR)，基因组库(genomic library)之建构及筛选等的前置步骤。
本实验将从你所选定之动物组织或细胞中抽取genomic DNA。
你将从本实验中学习如何自细胞或组织中萃取并纯化genomic DNA。
实验原理本实验是以动物组织或细胞作为genomic DNA的来源。
先以阴离子性清洁剂如sodium dodecyl sulfate (SDS)将细胞打破，并使蛋白质变性，以抑制DNase的活性，也让DNA上的蛋白质解离。
同时加入高浓度的ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)亦可抑制DNase的活性。
另外以RNase除去RNA。
而蛋白质则不以有机溶剂如phenol来萃取掉，而是以盐类沉淀方法去除。
如此可避免使用具毒性之有机溶剂，而DNA亦较不会断裂。
萃取到的genomic DNA以酒精沉淀法浓缩，并回溶于TE缓冲溶液中保留。
最后，测波长260 nm与280 nm之吸光值，以计算所抽出DNA之浓度与纯度。
纯DNA的A260/A280比值约为1.8，比值太低时，表示蛋白质残留太多。
DNA浓度计算方式为OD260=1时，DNA浓度约为50 g/ml。
实验材料∙RBC lysis solution：ammonium chloride, EDTA, sodium bicarbonate∙Cell lysis solution：10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM EDTA, 0.5% SDS∙RNase A solution：4 mg/ml RNase A∙Protein precipitation solution：10 M ammonium acetate∙Isopropanol∙70% ethanol∙TE缓冲溶液：10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA实验步骤1. 首先要将细胞溶解，不同材料之处理方式略有差别。
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分子生物学实验室
实验一 氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验二 细菌质粒DNA 的提取
实验三 琼脂糖凝胶电泳
实验四 细菌基因组DNA 的提取与琼脂糖凝胶电泳
实验五 质粒DNA 限制性内切酶实验
实验六 聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因
实验七 胶回收法纯化DNA 与琼脂糖凝胶电泳
南京工业大学制药与生命科学学院
生物工程与技术基础实验与工程实训中心
《分子生物学实验》教学大纲
英文名称： Molecular biology
学分：1 学时：32
教学对象：生物工程专业、制药工程专业、药剂学专业、食品学专业、生物技术专业
教学目的：在开设的理论课程的基础上，结合实验课程的教学，使学生能较全面系统的掌握分子生物学的基本操作，拓宽专业知识面，加深对专业知识的理解，强化动手能力。
基本要求：了解分子生物学的实验操作原理，掌握有关实验仪器的使用方法。
实验内容：
实验一.细菌质粒DNA的提取及酶切实验 （8学时）
基本要求:
通过学习碱变性抽提法对大肠杆菌中的质粒的抽提，掌握质粒DNA的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA的原理。
进一步了解限制性
内切酶的特性及酶切反应过程，掌握DNA的酶切技术。
重点:
掌握质粒DNA的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA的原理。
进一步了解限制性内切酶的特性，掌握DNA的酶切技术。
难点:
掌握质粒DNA的小量制备方法及DNA的酶切技术。
实验二. 细菌基因组DNA的提取 （4学时）
基本要求:
了解细菌基因组DNA的提取的目的，原理，掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法
重点:
掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法
难点:
掌握细菌基因组DNA的提取的实验步骤及操作方法
实验三. 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验（4学时）
基本要求:
了解大肠杆菌感受态细胞的制备原理及转化反应的目的，应用范围及操作过程，掌握重组DNA质粒转化大肠杆菌的操作技术。
重点:
掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的操作技术
难点:
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
实验四. 聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因及琼脂糖凝胶电泳 （8学时） 基本要求:
熟悉聚合酶链反应（PCR）的基本原理、实验基本条件；了解 PCR反应条件的优化和注意事项和应用范围 掌握聚合酶链反应（PCR）的实验技术：了解核酸琼脂糖凝胶电泳的原理及操作步骤，掌握琼脂糖凝胶电泳的实验方法。
重点:
掌握掌握琼脂糖凝胶电泳的实验方法。
难点:
聚合酶链反应（PCR）的实验技术，琼脂糖凝胶电泳的实验方法。
实验五. 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质 （4学时）
基本要求:
了解聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质的基本原理，学会用该法测定蛋白质分子量的操作技术。
重点:
掌握聚丙烯酰氨凝胶的配制方法，了解聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质的基本步骤及实验结果的判定
难点:
聚丙烯酰氨凝胶电泳的实验步骤及实验结果的判定
实验一 氯化钙法大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验目的
掌握重组DNA 质粒转化至大肠杆菌宿主的操作技术。
实验原理
带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒DNA ,,该过程称之为转化过程。
受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl 2，RuCl 等化学试剂法）的处理后，细胞
膜的通透性发生变化，能容许外源DNA 的载体分子通过。
实验步骤
1 感受态细胞的制备：
1) 挑菌37℃培养。
2) 将过夜培养的细菌转接培养2-3小时。
3) 将菌液置冰上10分钟，4℃离心8000rpm 30秒。
4) 用氯化钙溶液悬浮菌体，冰浴，离心弃去上清。
5) 氯化钙溶液悬浮菌体。
2 转化：
1) 取出感受态细胞,试剂A，无菌双蒸水和待转化的质粒DNA，均置冰盒内。
2) 取离心管管一支，将质粒、试剂A、无菌水，感受态细胞混匀冰浴20分钟。
3) 在管内加入400ul LB 液体培养基，振荡培养10-40分钟。
4) 涂布培养。
大肠杆菌形态图
实验二 质粒DNA 的提取
实验目的
本实验通过质粒快速提取试剂盒的试剂对大肠杆菌中的重组质粒pET-22b 的抽提，掌握质粒DNA 的小量制备方法，了解碱裂解法制备质粒DNA 的基本原理。
实验原理
载体是基因工程所必需的工具，它用于将目的基因运载到宿主细胞内进行克隆与表达。
常用的载体有质粒、λ噬菌体、M13噬菌体、逆转录病毒DNA 和昆虫病毒DNA 等，而质粒是最常用的载体。
实验步骤
1 收集菌泥。
2 悬浮细菌。
3 加入200μl 裂解液 (Solution 2)，充分裂解菌体。
4 加入400μl 絮凝剂(Solution 3)。
5 15000rpm 离心10分钟，无需低温离心。
6 将步骤5中的上清转移到吸附柱(3S)中，
12000rpm 离心1分钟。
7 将吸附柱放入同一支收集管中，吸取洗涤液到吸附
柱，离心1分钟。
8 重复步骤7一次。
9 将吸附柱放入同一支收集管中，高速离心2分钟。
10在吸附柱(3S)膜中央加50μl 无菌双蒸水，室温高速离心1分钟。
质粒图谱1 质粒图谱
2
质粒电泳图
实验三 琼脂糖凝胶电泳
实验目的
用来检测DNA的情况，如DNA片段分子量的大小、纯度等。
实验原理
利用琼脂糖凝胶电泳相对于标准DNA的移动度，可测定DNA片段的相对分子量。
一般800bp以上的片段用08%的琼脂糖凝胶，800bp以下的片段，用10%-20%的琼脂糖凝胶。
用溴化乙锭染色，在紫外灯下可以直接确定并分析DNA片段在凝胶板中的迁移率。
实验步骤：
1 将配好的电泳缓冲液，倒入电泳槽。
2 将琼脂糖凝胶放入微波炉熔化。
3 熔化后的琼脂糖凝胶倒入插好梳子的模具中。
4 静置1小时左右，等琼脂糖凝胶凝固后垂直拔去梳子。
5 将琼脂糖凝胶放入电泳槽中。
6 点样,一般上样量为10×Loading Buffer 05-1μl、DNA样品（质粒）3μl混匀，点入凝胶孔内。
7 质粒电泳参数：电泳仪的电压100V，电流500mA，功率250W。
电泳时间40分钟。
8 将琼脂糖凝胶取出，放入紫外与可见分析装置。
9 凝胶成像系统显像，拍照。
电泳图 凝胶成像系统
实验四 细菌基因组DNA 的提取
实验目的
本实验通过利用小量细菌基因组DNA 抽提试剂盒对大肠杆菌基因组DNA 的抽提，掌握细菌基因组DNA 的小量制备方法。
实验原理
本实验使用 溶菌酶破壁及蛋白酶K 消化以确保基因组DNA 得率。
不使用苯酚/氯仿等有机试剂，无须传统的乙醇沉淀、洗涤、干燥、溶解过程，简化了操作。
实验步骤
1 细菌的消化
2 加入 400 ul DL 液和 25 ul 蛋白酶 K，迅速温和地来回颠倒离心管彻底混匀。
温浴30 分钟。
离心 1 分钟后，取上清至另外一个离心管中。
3 加入 200 ul 异丙醇,离心弃去收集管中的液体。
4 加入 500 ul 洗涤液，离心 30 秒。
5 将吸附柱移入另外一个干净的收集管中。
离心 15 秒。
6 将吸附柱放入同一个收集管中。
离心 1 分钟。
7 在吸附膜中央加入 100 ul T1 液，离心 1 分钟。
将 DNA -20 ℃ 保存。
8 取纯化后基因组片段洗脱液2μl 加上样缓冲液 1μl 混匀，标准分子量DNA2-3μl，电泳检测结果。
大肠杆菌的细胞的结构 细菌基因组DNA
的结构。