从枯草中分离提纯枯草芽孢杆菌并培养观察

从枯草中分离提纯枯草芽孢杆菌并培养观察

摘要：枯草培养法是利用枯草杆菌产生芽孢这一性质。因为芽孢对不良环境有较强的抗性。所以枯草在煮沸过程中，不含芽孢的细菌被杀死，而含有芽孢的枯草杆菌能够生存下来，在适宜的条件下进行繁殖生长。

芽孢染色法是利用同一种细菌的芽孢和菌体对不同染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行着色，因芽孢壁厚，透性低，着色脱色均较困难，而使芽孢和菌体呈不同的颜色便于区分。因此芽孢染色采用弱碱性染料孔雀绿，在加热的条件下进行，因孔雀绿与菌体结合较差，所以易被水冲洗掉，而芽孢中的孔雀绿却难溶出，水洗后，再用一种呈红色的碱性染料加以复染，结果，菌体为红色，芽孢为绿色。

关键词：枯草芽孢杆菌提纯培养

正文

（一）研究方法

1、实验器材

1.1、材料：枯草

1.2、器材：三角烧瓶、温箱、木夹、酒精灯、剪刀、棉塞、涂菌棒、

培养皿等。

1.3、药品：7%NaCl牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨液体培

养基等。

2、研究步骤

2.1、枯草杆菌的培养：将枯草数根剪碎，放入三角瓶和电磁炉中，在三角瓶中加入适量Ca(OH)2，在电磁炉中不加入Ca(OH)2。加水没过干草（装量不超过瓶容量的1/2，以保证空气供应）。

2.3、塞好棉塞煮沸5分钟。杀死无芽孢的细菌。枯草杆菌因芽孢抗高温而存活。还有其他的芽孢杆菌。

2.4、置35摄氏度培养1-2天。或室温放置3-4天。

2.5、液面出现白色菌膜。

2.6、将其放入培养基中分离纯化，得枯草杆菌或其他芽孢杆菌。

(1) 将白色菌膜移至牛肉汤蛋白胨培养基中，将其放置恒温箱中37度培养1-2天，产生菌落。

（2）挑菌及纯化：从上述培养基中分别挑取2个单菌落中部分菌体，在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察和镜检，确定是芽孢杆菌属纯种互殴，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨斜面上，置37°C培养1-2天后备用。（菌体应呈杆状，具芽孢，宽度一致；菌落颜色形状、质地、透明度均一致）

2.7、从芽孢杆菌中鉴别分离枯草芽孢杆菌：

（1）用细菌的简单染色法来区分杆菌与球菌。

（2）用革兰氏染色法来验证枯草杆菌呈阳性。

2.8、用已经提纯出来的枯草芽孢杆菌做细菌芽孢染色法来观察芽孢

(二)实验结果

1、镜检结果：在用三角瓶培养的菌体在镜检的视野中全部为球状菌体，在电磁炉中培养的菌体为杆状。

2、芽孢染色结果：在三角瓶中的菌体无绿色芽孢，在电磁炉中培养的菌体有绿色的芽孢产生。

（三）结果分析

三角瓶比电磁炉的密封性好，在灭掉无芽孢的的细菌会相对会比电磁炉要高，而且，在三角瓶中加入了可以杀灭无芽孢的细菌的Ca(OH)2，但是结果却是在空气通透性较大的电磁炉中培养出枯草芽孢杆菌，可能有以下几个原因：由于加入的Ca(OH)2的量过多，导致有芽孢的枯草芽孢杆菌也被杀死了；在高温5min的过程后，接种到培养基上有杂菌；在所用的枯草里的枯草芽孢杆菌较少，影响实验结果；在人为操作上有误差。