水产品中的组胺的检测

实验二水产品中的组胺的检测

一、实验目的

l．了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理。

2．掌握正戊醇提取组胺的操作技术。

3．学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。

二、实验原理

水产品中的组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最主要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水产品受到这些细菌污染后，会产生大量的组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。

三、仪器与试剂

(1) 正戊醇；三氯乙酸溶液(100g/L)；碳酸钠溶液(50g/L)；氢氧化钠溶液(250g/L)；盐酸(1+11)。

(2) 偶氮试剂

①甲液：称取0.625g对硝基苯胺，加6.25mL盐酸溶液溶解后，再加水稀释至250mL，置冰箱中。

②乙液：亚硝酸钠溶液(5g/L)，临用现配。

甲液5mL、乙液40mL混合后立即使用。

(3) 磷酸组胺标准贮备液准确称取0.2767g于(100士5)℃干燥2h的磷酸组胺，溶于水，移入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg组胺，

(4) 磷酸组胺标准使用液吸取5.0mL磷酸组胺标准贮备液，置于250mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20μg组胺。

四、实验步骤

1．样品处理

称取5.00～l0.00g切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入15～20mL三氯乙酸溶液，浸泡2～3h，过滤。吸取2.0mL滤液，置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次加入3mL

正戊醇，振摇5min，提取三次。合并正戊醇提取液并稀释至10.0mL。吸取2.0mL正戊醇提取液于分液漏斗中，每次3mL盐酸(1+11)振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至10.0mL。备用。

2．测定

吸取2.0mL盐酸提取液于10mL比色管中。另吸取0、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、l.0mL组胺标准使用液(相当于0、4μg、8μg、12μg、16μg、20μg组胺)，分别置于10mL比色管中，加水至lmL，再各加lmL盐酸溶液。样品与标准管各加3mL碳酸钠溶液、3mL偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10min后用lcm比色杯以零管为参比，于480nm波长处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。

管号012345样品管组胺标准使用液/mL00.200.400.600.80 1.02mL 纯水/mL 1.00.800.600.400.200

提取液盐酸溶液/mL标准管加1.0样品管不加

碳酸钠溶液/mL样品与标准管各加3.0

偶氮试剂/mL样品与标准管都加3.0，加水至刻度，混匀，放置10min

组胺含量/μg048121620

吸光值（A）

五、结果计算

(1) 计算公式

m1

x=

m2×(2/v1) ×(2/10) ×(2/10)×1000

式中，x为样品中组胺的含量，mg/100g；

V1为加入三氯乙酸溶液的体积，mL；

m1为测定时试样中组胺的含量，μg；

m2为试样质量，g。

(2) 结果的表述报告算术平均值精确至小数点后一位。

六、注意事项

1. 本方法的最低检出浓度为5mg/100g，允许相对误差≤10％。

2. 用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的组胺时，必须用氢氧化钠溶液调pH至碱性，以便于游离组胺的提取。

七、思考题

1. 影响组胺含量测定准确性的因素有哪些?

2. 组胺与偶氮试剂的反应中，酸碱度控制不当会给实验结果造成怎样的影响?