川贝母 检验标准操作规程

川贝母检验标准操作规程 文件编码：S0P-QC-ZJ-3017-03

题 目 川贝母检验标准操作规程 制定部门：质量检验中心

颁发部门：质量管理部

分发部门：质量管理部、质量

检验中心

制定人： 日期: 年 月 日 审核人： 日期: 年 月 日 批准人： 日期： 年 月 日

生效日期: 2012年 10 月 1 日

变更历史：1.2003年3月制定； 2.2005年7月执行《中国药典》2005年版第一次

修订； 3.2010年10月执行《中国药典》2010年版第二次修订。4.2012年10月1

日执行《中国药典》2010年版第一增补本第三次修订。

目 的：建立川贝母检验标准操作规程。规范检验操作，确保川贝母质量。

适用范围：适用于川贝母的检验。

责 任 者：质量管理部经理、质检中心主任、质量检验员。

内 容：

1品名：川贝母

2取样：按药材和饮片取样标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6065）取样

3检验依据：川贝母内控质量标准（STP-QS-ZJ-3015）

4性状

松贝 取本品，置明亮处用肉眼观察，呈类圆锥形或近球型,尺量，高0.3~0.8cm ，直径0.3~0.9cm 。，表面类白色。外层鳞叶2瓣，大小悬殊，大瓣紧抱小瓣，未抱部分呈新月形，习称“怀中抱月”；顶部闭合，内有类圆形，顶端稍尖的心芽和小鳞叶1~2枚；先端钝圆或稍尖，微凹入，中心有1灰褐色的鳞茎盘，偶有残存须根。质硬而脆，断面白色，富粉性。气微，味微苦。

青贝 呈类扁球形，高0.4~1.4cm ，直径0.4~1.6cm 。外层鳞叶2瓣，大小相近，相对抱合，顶部开裂，内有心芽和小鳞叶2~3枚及细圆柱形的残茎。

炉贝 呈长圆形，高0.7~2.5cm ，直径0.5~2.5cm 。表面类白色或浅棕黄色，有的具棕色斑点。外层鳞叶2瓣，大小相近，顶部开裂而略尖，基部稍尖或较钝。

5鉴别：

5.1仪器：显微镜、超声波清洗机、电子恒温水浴锅、薄层喷雾气压泵、电子天平 5.2试剂与试液

5.2.1试剂：二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、浓氨试液

5.2.2试液

水合氯醛试液：取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。

甘油乙醇试液：取甘油、稀乙醇各1份，混合，即得。

碘化钾溶液：取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml，即得。临用新制。

稀碘化铋钾试液：取次硝酸铋0.85g，加冰醋酸10ml与水40ml溶解后，即得。

临用前取5ml，加碘化钾溶液（4→10）5ml，再加冰醋酸20ml，加水稀释至100ml，即得。

亚硝酸钠乙醇试液：取亚硝酸钠1g，加乙醇使溶解成100ml，即得。

5.3对照品与：贝母辛对照品、贝母素乙对照品

5.4操作方法

5.4.1按显微鉴别法标准操作规程（SOP-QC-ZJ-6034）检查。

松贝、青贝、取本品粉末10g，过四号筛，平铺于洁净的白纸上，在明亮处用肉眼观察，本品粉末类白色。挑取少许置载玻片上，滴加水合氯醛试液2滴，将载玻片置酒精灯火焰上方2cm处往返摆动加热至边缘起小泡，即停止加热，补充试液后再加热，直至透化完全。透化后放冷，加甘油乙醇2滴，盖上盖玻片。置显微镜下观察，淀粉粒甚多，广卵形、长圆形或不规则圆形，有的边缘不平整或略作分枝状，直径5~64µm，脐点短缝状、点状、人字状或马蹄状，层纹隐约可见。表皮细胞类长方形，垂周壁微波状弯曲，偶见不定式气孔，圆形或扁圆形。螺纹导管直径5～26µm。

炉贝取本品粉末10g，过四号筛，平铺于洁净的白纸上，在明亮处用肉眼观察，本品粉末类白色。挑取少许置载玻片上，滴加水合氯醛试液2滴，将载玻片置酒精灯火焰上方2cm处往返摆动加热至边缘起小泡，即停止加热，补充试液后再加热，直至

透化完全。透化后放冷，加甘油乙醇2滴，盖上盖玻片。置显微镜下观察，淀粉粒广卵形、贝壳形、肾形或椭圆形，直径约至60µm，脐点人字状，星状或点状，层纹明显。

5.4.2 取本品粉末10g，置具塞小锥形瓶中加浓氨试液10ml，密塞，浸泡1小时，加二氯甲烷40ml，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇O.5mI使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素乙对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液.作为对照品溶液。按薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取供斌品溶液1～6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液-水(18：2：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

5.4.3聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性方法。

模板DNA提取

取本品0.1 g，依次用75 %乙醇1ml、灭菌超纯水1ml清洗，吸干表面水分，置乳钵中研磨成极细粉。取20mg，置1.5ml离心管中，用新型广谱植物基因组DNA快速提取试剂盒提取DNA：〔加入缓冲液AP1 400 µL和RNA酶溶液（10 mg/ml）4µL，涡旋振荡，65 ℃水浴加热10分钟，加入缓冲液AP2 130µL，充分混匀，冰浴冷却5分钟，离心（转速为每分钟14000转）10分钟；吸取上清液转移入另一离心管中，加入1.5倍体积的缓冲液AP3/E，混匀，加到吸附柱上，离心（转速为每分钟13000转）1分钟，弃去过滤液，加入漂洗液700 µL，离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再加入漂洗液500 µL，离心（转速为每分钟12000转）30秒，弃去过滤液；再离心（转速为每分钟13000转）2分钟，取出吸附柱，放入另一离心管中，加入50µL洗脱缓冲液，室温放置3～5分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟，将洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2分钟，离心（转速为每分钟12000转）1分钟〕，取洗脱液，作为供试品溶液，置4 ℃冰箱中备用。另取川贝母对照药材0.1 g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

PCR-RFLP反应