乳腺癌动物模型的研究现状与评价

乳腺癌动物模型的研究现状与评价【摘要】乳腺癌动物模型的建立方法主要可分为自发性、诱发性和移植性3种，每种方法都有其各自的特点和应用条件。

【关键词】乳腺癌;动物模型;现状与评价;综述乳腺癌是一种严重威胁女性健康和生命安全的恶性肿瘤。

乳腺癌在世界范围内呈上升趋势［1］，乳腺癌动物模型的制作对进一步研究乳腺癌的病因、发病机理，从而对其进行有效预防、提高治疗效果将起到非常关键的作用。

在这方面，国内外有关学者已做了大量工作，现将其研究状况作一综述。

1 实验动物的选择建立乳腺癌模型时对动物一般要求其癌诱发率高，饲养方便。

常选用的动物主要有大鼠、小鼠、裸鼠、猫、犬及兔。

其中，大鼠、小鼠由于成本低，易饲养，且诱癌周期相对较短，故多用于大批量的实验研究。

但由于不同科系、性别乃至不同鼠龄的大鼠均会直接影响到诱癌率和造模时间，因此，诱癌率较高的Wistar系雌性大鼠常被选用。

裸鼠因先天性缺乏胸腺，T细胞免疫功能接近于零，所以人体肿瘤异种移植时无排斥反应，移植后的人体肿瘤保持其原有的组织形态，免疫学特点以及特有的染色体组型和对抗肿瘤药的原有敏感性，且对培养条件等要求比SCID鼠低，无毛，易于动态观察肿瘤的生长状态，同时浸润与转移是人类恶性肿瘤的两个重要特征，在裸鼠上可以通过接种方式、部位的选择，达到较满意的转移效果，因此，目前多选择其进行人乳腺癌细胞异位移植。

2 造模方法2.1 自发性乳腺癌动物模型实验动物各群中自然发生或通过遗传育种而保留下来的一类肿瘤称为自发性肿瘤。

C3 H小鼠最常用于自发产生乳腺癌的动物，一般生后6个月可100%产生乳腺癌。

自发性肿瘤模型有一定的优点，首先从肿瘤发生来看，与人类肿瘤相比更相似，实验结果更易于外推于人;其次，对影响肿瘤发生、发展的原因更有可能被发现。

但其肿瘤发生、发展的时间参差不齐，使实验时间延长，实验所需动物数量多，耗费大。

2.2 诱发性乳腺癌动物模型使用化学物质、物理、生物因素等可在实验动物中诱发乳腺癌的发生［2］，目前较多用的是化学诱导方式。

用致癌物质二甲基苯蒽（DMBA）和甲基胆蒽可诱发乳腺癌。

以灌胃［3］、局部涂抹［4］或皮下注射来作用于Wistar雌性大鼠。

胃管灌注低剂量DMBA，持续3个月，可建立乳腺癌癌前病变动物模型［5］。

化学诱导乳腺癌发生的动物模型常用于乳腺癌的病因学研究及预防性研究［6］。

实验性肿瘤诱发研究的开展，能使人们得以有计划、有步骤地观察癌变的整个过程［7］。

但由于化学诱导乳腺癌发生的动物模型建立的过程长，个体差异很大，而且肿瘤细胞的形态特征差别也很大，所以较少用于肿瘤治疗方面的研究。

2.3 移植性乳腺癌动物模型2.3.1 免疫缺陷鼠人乳腺癌移植模型甄林林等［8］采用MCF-7细胞经胰酶消化后，用Hank液清洗2次，再用1%锥蓝染色，在细胞记数板上作细胞计数，并调节使活细胞浓度为1×107 .ml，于6周龄雌性裸鼠右侧胸壁乳垫下接种0.1ml.只。

裸鼠饲养于层流罩中，接种10d，在接种部位乳垫处出现肿瘤结节，肿瘤移植成功率为95%，肿瘤可部分保持人乳腺癌生物学特性，为研究人乳腺癌提供了重要工具。

移植模型相对价廉，可利用ER阳性的癌细胞株，且成瘤期相对短，免疫排斥反应弱，肿瘤移植生长良好，能保持肿瘤细胞的原有形态和生物学特性，可用于研究化疗药物、生物制剂等乳腺癌的治疗作用。

2.3.2 免疫功能正常小鼠乳腺癌移植性模型免疫功能正常的小鼠其移植的乳腺癌细胞或肿块有严格的种系特异性。

最容易得到的近交系小鼠为BALB.C，而来源于BALB.C小鼠的乳腺癌细胞株文献报到最多的是4T1、TM40两株乳腺癌细胞，接种于BALB.C小鼠体内都可生长出乳腺癌［9］。

采用4～6周的BALB.C小鼠，选择对数生长期的TM40D，细胞浓度调至106 ～108 .ml。

在BALB.C小鼠胸壁5～6肋间或腹壁第4对乳腺处皮下接种肿瘤细胞0.1ml，相当于105 ～107 细胞.只小鼠，每天观察肿瘤的生长情况。

乳腺癌细胞数量107 组，接种后1周，肉眼便可见皮下肿块，成瘤率为100%，在无任何治疗的情况下，荷瘤小鼠可存活12～15周。

这种模型是目前抗癌药物筛选和药效学研究中使用最多的模型。

2.3.3 组织块悬液注射法制作兔移植性乳腺癌模型姚青等［10］综合细胞液局部注射和乳腺切开后实体瘤原位种植［11］两者的优点，采用瘤组织块悬液注射于乳腺腺体建立了性质稳定，成瘤率高的兔VX2 乳腺癌模型。

近年来，国内外有大量VX2 瘤株种植于肝、肾、肌肉、骨、膀胱、子宫、肺等建立相应的原位肿瘤动物模型的报道［12、13］。

2.4 乳腺癌远处转移动物模型乳腺癌远处转移动物模型的建立首先有利于药物开发，其次可辨别肿瘤转移抑制或促进基因，使其作为一个新的靶点，用于开发新的治疗方法，并使人们更能理解肿瘤转移的复杂性。

建立乳腺癌远处转移动物模型有各种方法。

细胞原位植入实验鼠，可自发产生肺和骨转移，也可自尾静脉注入或注射入左心室［14］。

3 评价与展望理想的乳腺癌动物模型应具备以下条件:①致癌方法简单、易行;②经济、快速;③指标客观、明确;④对癌变器官的特异性高;⑤重复性好;⑥诱发乳腺癌的病理类型、生物学行为、电镜下表现及组织化学改变等应与人体癌肿相似。

而中医动物模型的复制要从症状、病因、治疗、相关因素、客观指标等多角度来加以考虑，才能充分体现动物模型与原病证的相似性和典型性［15］。

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然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。

诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。

宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。

若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使内外异法也。

侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下：愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。

将军向宠，性行淑均，晓畅军事，试用于昔日，先帝称之曰“能”，是以众议举宠为督：愚以为营中之事，悉以咨之，必能使行阵和睦，优劣得所。

亲贤臣，远小人，此先汉所以兴隆也；亲小人，远贤臣，此后汉所以倾颓也。

先帝在时，每与臣论此事，未尝不叹息痛恨于桓、灵也。

侍中、尚书、长史、参军，此悉贞良死节之臣，愿陛下亲之、信之，则汉室之隆，可计日而待也。

臣本布衣，躬耕于南阳，苟全性命于乱世，不求闻达于诸侯。

先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顾臣于草庐之中，咨臣以当世之事，由是感激，遂许先帝以驱驰。

后值倾覆，受任于败军之际，奉命于危难之间，尔来二十有一年矣。

先帝知臣谨慎，故临崩寄臣以大事也。

受命以来，夙夜忧叹，恐托付不效，以伤先帝之明；故五月渡泸，深入不毛。

今南方已定，兵甲已足，当奖率三军，北定中原，庶竭驽钝，攘除奸凶，兴复汉室，还于旧都。