细菌分离培养

环。
操作顺序：
接种环灭菌 勾取细菌
取棉塞
接种
塞棉塞
接种环灭菌
标记 培养。
思考题：
1、划线分离时为什么每次都要讲接种环上多余 的菌体烧掉？划线时为何不能重叠？
2、在恒温箱培养微生物时为何培养皿均需倒置？ 3、如何进行菌落形状的检查？检查时应注意观
察菌落的哪些性状？ 4、分离培养的目的是什么？经一次分离的菌种
无菌操作工具
接 种 工 具
分离纯化法：（细菌分离纯化）
• 1、平板划线法 • 2、稀释涂布平板法 • 3、稀释混合（倾注）平板法 • 4、显微操作器单细胞挑取法 • 5、棋盘格划线法
1.平板划线：
将蘸有混合细菌的接种环在平板表面多方 向连续划线，使混杂的微生物细胞在平板表面 分散，浓度变稀，经培养得到由单个细胞繁殖 而成的菌落，从而达到纯化。
试验内容：
1.需氧菌的分离移植和增菌
• 平板划线分离 • 营养（普通）斜面接种 • 营养（普通）肉汤增菌
2. 厌氧菌的分离培养方法（本次试验不做）
• 生物学方法、化学方法、物理学方法
实验要求：
掌握：
掌握细菌分离培养的基本要领和方法 掌握无菌操作程序 掌握细菌在培养基上生长特点
认识：
认识菌落形态
1cm
手执试管底 露出斜面
培养后生长的斜面菌种
液体培养基接种法：
用于增菌及纯培养细菌的生长特点观察， 如表面生长，沉淀生长，均匀混浊生长等。
细菌在液体培养基中生长的三种不同现象 混浊：细菌均匀弥漫扩散，出现不同程度混浊。 沉淀：细菌由下沉。肉眼可见沉淀物（颗粒絮状） 菌膜：需氧菌易在液面生长，形成可见的菌膜，菌
2、形状 （圆形、不规则形） 3、边缘 （整齐、锯齿状） 4、表面性状（光滑、粗糙） 5、隆起度（扁平、隆起、中凸） 6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明） 7、硬度（干燥、湿润、粘液） 8、溶血（在血培养基上的表现）
2. 斜面移植法：培养，保存菌种及其它。
手执塑料杆处
小指夹棉塞 试管口离火焰
1.平板划线：
平板划线的原则和目的： 通过划线稀释细菌
划线均匀而细密， 不重复
充分利用培养基 面积
获得单个菌落
培养基不能划破
A
B
C
图1 平板画线法 A、B、C分别为1、2、3次画线
注意手势
1.培养皿与酒 精灯的距离
2.左手打开培 养皿的动作
3.右手握接种 棒的姿势
4.右手划线的 运作姿势
分区划线： 多用于粪便等 含菌量较多的 标本。
是否皆为纯种？何为纯种？
涂布平板法：
每划一个区域，将 接种环烧灼一次， 待冷却后再划下一 个区域。每一区域 的划线应接触上一 区域接种线的2~3 次，使菌量逐渐减 少，以形成单个菌 落。
连续划线（曲线划线）：分离含菌量较少的培养物
右手持接种环， 通过火焰灭菌， 冷却后，挑取标 本或培养物少许
1.平板划线：
4
3
1
2
细菌在固体培养 基中的生长情况：
单个菌落（S型）
菌落（R型）
菌苔
细菌的培养特征：
不同种类的细菌在固体、半固体和液体培 养基中可表现出各自特有的培养特征。可以作 为细菌鉴别的特征之一。
细菌在固体培养基中生长表现：
1、大小 （ mm表示。1mm以内露滴百度文库；1-2mm小菌落。
2- -4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落）
细菌的分离纯化技术
分离纯化技术是细菌学实验中最基本的技术之一
• 临床送检样品或混杂的样品 • 分离受杂菌污染的菌种 • 细菌纯培养物 分离纯化： • 使微生物共生群体分离开，得到纯培养物的
过程称微生物的纯分离技术。得到的纯培养 物称纯种。 • 纯种：指一种或一株微生物培养物中所有的 细胞只来源同一个细胞的后代。