常见感染性真菌检验

• 培养鉴定：常有培养基有燕麦培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、 石竹叶琼脂、合成琼脂、KCl培养基和土壤琼脂。PDA 和 OA可用以观察菌落形态和色泽，产孢有时较少。KCl培养 基可用以观察分生孢子链的形成。土壤培养基有利于快速 形成厚壁孢子。
二、丝状真菌
（四）药敏试验的药物选择
•曲霉菌属对制霉菌素、两性霉素B及其脂质体、伏立康唑、泊 沙康唑、伊曲康唑、卡泊芬净、米卡芬净等敏感 •毛霉目真菌对两性霉素B、伊曲康唑、特比奈芬等敏感
三、卡氏肺孢菌
（一）分类：
核糖体RNA的核苷酸序列与真菌有更多的同源性；归 类于真菌
（二）临床意义：
在宿主免疫力低下时，可导致间质性浆细胞肺炎，又 称卡氏肺孢菌性肺炎（PCP）。卡氏肺孢菌病是AIDS最常 见、最严重的机会感染性疾病，病死率高达70%~100%
三、卡氏肺孢菌
（三）生物学特性：
•
卡氏肺孢菌生活史有包囊和滋养体两种形态。包囊为感染
一、酵母型真菌
③ 分离培养与鉴定
沙保罗斜面
血平板
芽管形成试验
C. albicans (green)白念 C. tropicalis (blue)热带 C. parapsilosis (white)近平滑 C. glabrata (pink). 光滑/克柔
产色培养基
一、酵母型真菌
（四）微生物学检验 2.隐球菌属
毛霉
镰刀霉
二、丝状真菌
（三）微生物学检验 1.曲霉菌
• 直接显微镜检查 取痰液等被检材料涂于载玻片上，在镜 下可见分枝的菌丝、较粗的分生孢子头，顶端膨大形成顶 囊，顶囊上有小梗，小梗上有许多小分生孢子
• 抗原检测、抗体检测、药敏试验、皮肤试验 • 分离培养与鉴定：标本接种沙保罗琼脂，室温培养后菌落
• 分离培养 临床标本接种于不含放线菌酮的麦芽糖培养 基、马铃薯培养基及沙保罗琼脂培养基，25℃或37℃培养
• 抗体检测
• 鉴定 根据毛霉、根霉与梨头霉的形态特点
毛霉属、根霉属和梨头霉属的鉴别要点
特性
毛霉属
根霉属
梨头霉属
匍匐菌丝和假 根 囊轴
无 多形态
明显，孢囊梗与假根 有，孢囊梗着生
对生
于
匐菌丝中间
一、酵母型真菌
（五）药敏试验的药物选择
1. 白念珠菌 两性霉素B及其脂质体、三唑类、棘白菌素类及 5-FC等药物敏感
2. 热带念珠菌 两性霉素B敏感，对唑类药物较敏感 3. 克柔念珠菌 两性霉素B敏感，对氟康唑天然耐药 4. 光滑念珠菌 两性霉素B敏感，对氟康唑等有较高的耐药性 5. 隐球菌属 两性霉素B及其脂质体、5-FC、氟康唑和伊曲康
酵母相 菌丝相
本章小结
• 临床上最多见的引起皮肤和软组织感染的真菌为皮肤癣真 菌，包括毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子菌属
• 引起侵袭性感染的真菌主要有酵母菌、丝状真菌、卡氏肺 孢菌及二相性真菌等，其中以酵母菌感染较常见，常见的 酵母菌包括念珠菌属和隐球菌属
• 常见的丝状真菌包括曲霉、毛霉及镰刀菌
本章小结
2. 隐球菌属 一般为外源性感染 新生隐球菌致病物质是荚膜
一、酵母型真菌
（三）生物学特性
白色念珠菌
一、酵母型真菌
（三）生物学特性
一、酵母型真菌
（四）微生物学检验
1. 念珠菌属 ① 标本采集 根据感染部位的不同，采集不同的标本 采集标本时应避免病灶周围正常菌群污染
一、酵母型真菌
② 标本直接检查 • 直接镜检 • G试验：也称螯试验，可测定1-3-β-D-葡聚糖，为深部 真菌感染的标志 • 抗原检测 • 抗体检测 • 核酸检测
第二节 侵袭性感染真菌
重点提示
1．侵袭性感染的真菌分类 2．白念珠菌
生物学特性；微生物学检验方法 3．新生隐球菌
生物学特性；微生物学检验方法 4．卡氏肺孢菌 生物学特性
一、酵母型真菌
（一）分类
1. 念珠菌属 念珠菌属（Candida）（假丝酵母菌）有150多个种， 常见致病的有11种 以白念珠菌为最常见的致病菌
二、临床意义
（三）小孢子属
•小孢子菌属感染皮肤和毛发，很少感染指（趾）甲 •铁锈色小孢子菌可引起头白癣，多见于儿童，成人极为少见， 是一些地方流行区少年儿童中头癣的常见原因
足癣
股癣
三、生物学特性
四、微生物学检验
（一）标本采集 （二）直接显微镜检查
– 皮屑+10%KOH液 – 指甲+25%KOH/25%NaOH含5%甘油处理 – 常用湿标本，不加染色，直接显微镜镜检
唑等敏感
二、丝状真菌
（一）分类及临床意义
1. 曲霉 呼吸系统曲霉病、全身性曲霉病、产生毒素引起机 体食物中毒、致癌作用
2. 毛霉 毛霉病 3. 镰刀菌属 眼内炎、角膜炎、溃疡、甲真菌病、皮肤感染、
脓皮病、关节炎、肺炎部感染、心内膜炎、脑脓肿和真菌 血症等
二、丝状真菌
（二）生物学特性
曲霉结构图
二、丝状真菌
•卡氏肺孢菌生活史有包囊和滋养体两种形态。果氏六亚甲基 四胺银（GMS）染色及姬氏染色后可检查有无卡氏肺孢菌 •二相性真菌中组织胞浆菌，在25℃培养时呈典型菌丝体，在 37℃培养时为酵母型，位于细胞内或外。马尔尼菲青霉在 25℃培养为青霉相，37℃酵母相
二、临床意义
（一）毛癣菌属
•毛癣菌属易侵犯人体皮肤、指（趾）甲、毛发的角蛋白组织 并生长繁殖，能产生数种角质溶解酶致病，可引起头癣、体 癣、股癣、叠瓦廯、手癣、足癣及甲癣等
二、临床意义
（二）表皮癣菌属
•絮状表皮癣菌是表皮癣菌属内唯一的致病菌。絮状表皮癣菌 是一种常见的皮肤癣菌，可引起皮肤感染，如股癣、足癣、 体癣、手癣和甲癣
四、二相性真菌
（四）微生物学检验
组织胞浆菌
1．直接显微镜检查 应涂片染色后检查。
•痰液等标本：涂片后先用甲醇固定10min，再用姬姆 萨染色镜检
•皮损、脓液等标本：用20%KOH涂片后镜检
2．抗原检测、药物敏感试验、抗体检测
3．分离培养与鉴定
①标本
含抗生素的沙保罗培养基
25℃培
养，生长缓慢，有时需4~6周才开始生长，逐渐形成白
型，滋养体为繁殖型，呈二分裂法繁殖
卡氏包囊
卡氏包囊和滋养体
三、卡氏肺孢菌
（四）微生物学检验：
• 直接显微镜检查 从患者痰液、支气管肺泡灌洗液或肺活检组织中检查PC是 确诊本病的重要依据
• 抗原检测，核酸检测，抗体检测等。
（五）药敏试验的药物选择
抗真菌药物对卡氏肺孢菌无效
四、二相性真菌
（一）分类
组织胞浆菌 马尔尼菲青霉菌
常见感染性真菌检验
目录
第一节 皮肤黏膜感染真菌 第二节 侵袭性感染真菌
第一节 皮肤黏膜感染真菌
重点提示
• 临床上常见的皮肤黏膜感染真菌的分类 • 毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子菌属的生物学特
性 • 微生物学检验方法
一、分类
•临床上最多见的引起皮肤黏膜感染的真菌为皮肤 癣真菌，包括：毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子菌 属
（二）临床意义
组织胞浆菌—传染性极大 马尔尼菲青霉菌—患者本身基础性疾病或应用免疫抑制剂等 可能是重要的易感因素
四、二相性真菌
（三）生物学特征
组织胞浆菌：双相性，在25℃培养时呈典型菌丝体，在 37℃培养时为酵母型，位于细胞内或外
马尔尼菲青霉菌：双相性，在自然界中以菌丝形式存在， 在组织中则可形成小圆形到椭圆形细胞
① 直接镜检 用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜 炎最简便、快速之方法
② 抗原检测 检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原，以乳胶凝集试验 最为常用，此法简便、快速
③ 核酸检测、药物敏感试验、抗体检测 ④ 分离培养 将标本接种在沙保罗培养基上，病原性隐球菌在
25℃和37℃孵育的可生长，而非病原性隐球菌在37℃时不生 长。培养2~5d后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负 染色镜检
色至棕色绒毛状菌落
四、二相性真菌
（四）微生物学检验
马尔尼菲青霉菌
1. 标本直接检验 取骨髓涂片、皮肤 印片或淋巴结活体组织瑞氏染色 后镜检
2. 分离培养与鉴定 标本接种沙氏培 养基上，在25℃培养为青霉相； 37℃酵母相
3. 抗原检测
4. 鉴别要点 马尼尔菲青霉的孢子易 与荚膜组织胞浆菌孢子相混淆， 但前者孢子常有横隔，从不出芽
形成快，呈毛状，一般为黄绿色。将菌落涂片镜检可见特 征性的分子孢子头和足细胞。根据不同的曲霉的形态和菌 落特征确定菌种
烟曲霉菌落
烟曲霉,光镜 X400
黄曲霉菌落
黄曲霉,光镜 X200
二、丝状真菌
（三）微生物学检验
2. 毛霉菌
• 直接镜检 临床标本 ＋ 20%KOH
湿片，直接镜检
可见折光性强的粗大菌丝，偶见孢子囊及孢子囊梗
2. 隐球菌属 包括17个种和8个变种，其中对人致病的最主要是新生 隐球菌（Cryptococcus neoformans）及其变种
一、酵母型真菌
（二）临床意义
1. 念珠菌属 白念珠菌：可侵犯人体多个部位，引起各种念珠菌病 热带念珠菌：可引起皮肤、黏膜和内脏念珠菌病 克柔念珠菌：可引起系统性念珠菌病
四、微生物学检验
四、微生物学检验
（三）分离培养与鉴定
标本
70%乙醇或在青、链霉素混合液内
处理5min
生理盐水洗3次
接种沙
保罗琼脂斜面25℃培养观察菌落特征
毛癣菌属
表皮癣菌属
小孢子菌属
五、药敏试验的药物选择
•皮肤黏膜感染真菌除对咪类药物敏感，如咪康唑、酮康唑、 联苯苄唑、克霉唑、益康唑、舍他康唑、布托康唑、芬替康 唑、噻康唑、特康唑、伊曲康唑、氟康唑及伏立康唑等，同 时对特比萘芬、阿莫洛芬、利拉萘酯及环吡酮胺等药物敏感。 临床治疗时常两种药物联合使用
近球形
近球形，常突起
囊托
无
有，有时不明显 有，明显，锥形
孢囊梗
直接由菌丝长出， 单根或成串，常不分 分枝多呈匍匐串
多数为无色wenku.baidu.com
枝，多数棕色
状或梳状，无色
孢囊孢子
卵圆或椭圆形
近球形或不规则
球形或卵形
二、丝状真菌
（三）微生物学检验 3．镰刀菌
• 标本直接检验：可见分支、分隔的菌丝，与曲霉的镜下特 征相似。