142 例儿童急性白血病的流式分析

142 例儿童急性白血病的流式分析

发表时间：2014-04-17T16:03:42.373Z 来源：《中外健康文摘》2013年38期供稿作者：刘俊闪刘炜王国锋

[导读] 骨髓涂片进行瑞吉氏染色，镜下分类500 个细胞，细胞化学染色包括过氧化物酶染色、糖原染色、α- 乙酸萘酚酯酶染色，按F A B 标准进行白血病分型。

刘俊闪刘炜王国锋( 河南省郑州市儿童医院血液科河南郑州 4 5 0 0 0 3 )

【摘要】目的探讨四色流式细胞术检测儿童急性白血病免疫表型的意义。方法应用流式细胞仪分析、形态学、细胞化学染色相结合的方法对142 例儿童急性白血病进行诊断。结果 142 例儿童急性白血病中AML39 例，占27.5%，ALL103 例，占73%，ALL 中B-ALL90 例，占63.4%，T-ALL13 例，占9.1%。AML,B-ALL,T-ALL 分别有不同抗原的高表达，且存在部分AML 表达淋系抗原，某些ALL 表达髓系抗原。结论四色流式细胞术对儿童急性白血病的准确诊断有重要意义。

【关键词】儿童急性白血病流式分析

【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）38-0113-02

白血病（A L）是一组高度异质性的造血系统恶性肿瘤，血细胞形态学及细胞组织化学染色一直是白血病诊断与分型的基石，随着免疫学技术的不断发展，在此基础上加上免疫分型，诊断率可从70% 左右提高到90% 以上，我们总结了142 例儿童急性白血病的形态学及免疫分型特点，报告如下。

1资料与方法

1.1 病例

选择2011 年8 月-2013 年6 月我院收治的AL 患者共142 例，其中男性63 例，女性79 例，年龄4 月-14 岁，平均年龄39.3 月。分类按照法国、美国、英国三国协作组(FAB 分型)[1] 方案分型，其中急性髓系白血病(AML)39 例，急性淋巴细胞白血病（ALL）103 例。

1.2 细胞化学染色方法

骨髓涂片进行瑞吉氏染色，镜下分类500 个细胞，细胞化学染色包括过氧化物酶染色、糖原染色、α- 乙酸萘酚酯酶染色，按F A B 标准进行白血病分型。

1.3 免疫分型试剂及方法

1.3.1 仪器与试剂仪器为美国BD 公司FACScalibur 型流式细胞仪。单抗包括C D2、C D3、C D4、C D5、C D7、C D8、C D10、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD38、CD64、CD117、HLA-DR、MPO、cCD79a、cCD3、

cCD22,TdT。流式细胞仪及所有单抗均购自Becton-Dickson 公司。

1.3.2 荧光标记染色方法每个病例在治疗前抽取肝素抗凝骨髓或外周血3ML , 取B D 专用流式细胞仪专用试管，每管中加入4 种荧光标记抗体（FITC/PE/PerCP/APC）和标本，并同时设定阴性对照管，混匀后避光15m i n，然后加入1X 溶血素，混匀避光10m i n，离心450g，5min，弃上清，加PBS 混匀，再离心450g，5min，弃上清加PBS 混匀，上机检测。

1.3.3 流式细胞仪检测测定前以标准校正荧光微球校正仪器，应用Ce l l Q u e s t 软件设置获取条件，每测定管获取分析30000 个细胞。用C D45/ S S C 双参数建立二维点图，根据细胞C D45 抗原表达及S S C 将不同细胞分群，然后对各群细胞设门，分析所圈定的白血病细胞群的表面标记。以表面抗原阳性率≥ 20% 为阳性判断[2]。

2结果

2.1 形态学分布

2 年内收治的142 例儿童急性白血病中 AML38 例，其中M0 型

3 例，M1 型2 例，M2 型11 例，M3 型5 例，M

4 型7 例，M

5 型10 例；

A L L100 例，其中L1 型46 例，L2 型34 例，L3 型20 例；形态学不能准确归类的白血病的4 例。

2.2 免疫分型

142 例A L 中急性髓细胞系白血病（AML）39 例，急性淋巴细胞白血病（A L L）103 例。133 例形态学+ 组织化学诊断与流式细胞免疫分型符合，符合率为93.7%。形态学诊断为AML -M0 中有2 例经流式细胞检测分别诊断为B - A L L（1 例）、T- A L L（1 例）。而形态学诊断为A L L 中有3 例经流式细胞检测分别确诊为M0(1 例)、M5(1 例)、M7(1 例)，形态学不能准确分类的4 例流式细胞仪最后分别为B-ALL(3 例)、 M7(1 例)。

39 例髓系AML 中C D33 表达率最高为89.7%（35/39）, 同时或分别表达髓系标志抗原C D64, C D13，C D117, C D15, MP O，分别为79.5%（31/39）、69.2%（27/39）、69.2%（27/39）, 59.0% （23/39）,48.7%（19/39）。其中15 例AML 伴随有淋系抗原

CD7(7/39),CD56(6/39),CD19 (2/39) 。

103 例ALL 中，B-ALL 为63.4%（90/142），主要表达CD19、cCD79a,cCD22，HLA-DR、CD10，分别为100%（90/90）、100%（90/90）、100%（90/90）、98.9%（89/90）、91.1%（82/90）。T-ALL 为9.1% （13/142），主要表达cCD3，CD7、CD5、CD2，分别为100%（13/13）、100%（13/13），92.3%（12/13），76.9%（10/13）。其中29 例A L L 伴随髓系标志抗原CD13

（11/103），CD13+33（6/103）， CD33（2/103），CD15（8/103）表达,T-ALL 伴随CD10（2/13）。

3讨论

白血病为小儿常见的恶性肿瘤，小儿白血病以急淋多见，在A L L 免疫亚型中，又以B-ALL 最多见。本研究借助CD45/SSC 双参数散点图进行设门将白血病细胞与正常细胞分开，诊断急性白血病具有形态学不可比拟的优势。

在本组病例，儿童急性白血病中B-ALL最多见，占63.3%（90/142），与国内外文献报道相符。主要表达C D19, c C D79a , c C

D22,HLA-DR,CD45 可以阴性。而T-ALL 以cCD3，CD7,CD5,CD2 为主。AML 所占比值较成年人低，主要表达CD33, CD64，

CD13,CD117 MPO，其中急性早幼粒白血病占AML12.8% (5/39)，C D34、H L A - D R 表达均较低，与文献报道一致。AML -M5 细胞化学染色MP O 经常为阴性或弱表达，C D14 对于形态不典型的单核细胞白血病较高的特异性。AML - M7 在AML 中所占比例为5% , 两例均表达C D117、C D41a、CD61, 而MPO、TdT 和其他的T、B 标志均为阴性。

本组病例白血病细胞表面分化抗原存在交叉表达现象，其中L y + A M L 表达淋系抗原主要为C D7、C D19，C D56, 而A M L 伴随弱CD19+(CD56+)、弱CD33+ 时多提示存在t（8；21）及AML1/ E T O 融合基因，文献报道此型A M L 患者对化疗反应好，预后相对好。