实验性自身免疫性重症肌无力模型的制备
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中国临床康复 第 １０ 卷 第 ２８ 期 ２００６－ ０７ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ， Ｊｕｌｙ ２５ ２００６ Ｖｏｌ． １０ Ｎｏ． ２８
·研究快报·
实验性自身免疫性重症肌无力模型的制备☆
杨春晓， 王化冰， 王维治
哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科， 黑龙江省哈尔滨市 １５００８６ 杨春晓☆， 女， １９７２ 年生， 黑龙江省哈尔滨市人， 汉族， ２００５ 年哈尔滨医 科大学毕业， 博士， 副主任医师， 主要从事神经免疫学方面的研究。 中图分类号：Ｒ７４６．１ 文献标识码：Ａ 文章 编 号：１６７１－ ５９２６（２００６）２８－ ０１１６－ ０２ 收稿日期：２００５－ １２－ ０２ 修回日期：２００６－ ０４－ １７ （０５－ ９９－ ８－ ６０４７ ／Ｇ）
杨春晓， 王化冰， 王维治．实验性自身免疫性重症肌无力模型的制备［Ｊ］．中国临床康 复， ２００６， １０（２８）：１１６－ ７ ［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ］
摘要 目的： 建立一种模拟人类重症肌无力的动物模型。 方法： ①主动免疫： 多采用大鼠和小鼠， 将免疫原乙酰胆碱受体与福氏 完全佐剂混合制成抗原乳剂后用于动物免疫。免疫大鼠的抗原乳剂为 ２００ μＬ。小鼠需要在首次免疫后的第 ５～８ 周进行 ２ 次或 ３ 次的追加免 疫， 每次剂量为 １００ μＬ。②被动免疫： 分离重症肌无力患者外周血提取 淋巴细胞， 将包含（ ２．０～２．５） ×１０７ 淋巴细胞的磷酸 盐 缓 冲 液 ０．３ ｍＬ 腹 腔 注射于免疫严重联合免疫缺陷小鼠， 在其血液中产生人类的抗乙酰胆 碱受体抗体。免疫后的小鼠不能产生类似于临床上重症肌无力的体征， 其 表现需要通过肌松药泮库溴铵（ ｐａｖｕｌｏｎ） 予以检测。腹腔注射 ０．０３ ｍｇ ／ｋｇ ｐａｖｕｌｏｎ 后， 令小鼠上肢抓握一横梁， 处于悬空状态 ， 正 常 小 鼠 抓 握 的 时 间在 １０ ｍｉｎ 左右。 结 果 ： ①主 动 免 疫 ： 大 鼠 在 首 次 免 疫 后 即 可 表 现 出 急 性 期 、缓 解 期 和 慢 性期等典型的 ３ 阶段重症肌无力病程。其慢性期的表现更符合人类重 症肌无力。而小鼠表现出一种缓慢进展的发病过程， 大多数小鼠（９０％左 右）在追加免疫后 ７～１４ ｄ 发病。②被动免疫： 免疫后严重联合免疫缺陷 小鼠抓握的时间短于 １０ ｍｉｎ。 结论： 经以上方法诱导出的实验性自身免疫性重症肌无力动物模型， 有 助 于 为 重 症 肌 无 力 的 病 因 、病 理 分 析 及 临 床 药 物 治 疗 提 供 实 验 学 依 据 。 主题词： 重症肌无力， 自身免疫性， 实验性 ／病理学； 疾病模型， 动物
０ 引言 目前普遍认为重症肌无力是 Ｔ 细胞依赖、补体参
与及自身抗体介导的器官特异性自身免疫病。实验性
自身免疫性重症肌无力是模拟人类重症肌无力的一种
动物模型， 为临床分析重症肌无力的病因、病理和治疗 提供了基础。
１ 主动免疫的实验性自身免疫性重症肌无力动物模 型
１．１ 动物种系的选择 现多采用大鼠和小鼠。其中大 鼠对实验性自身免疫性重症肌无力的易感性强弱程度
免疫的常见部位为 ６ 个皮下注射点， 它们包括后 背、后足跖以及尾的起始部。实验中作者常选择后背 ４ 个点作为首次免疫部位， 后足跖为追加免疫部位。 １．３ 模型的诱导 大鼠在首次免疫后 即 可 表 现 出 急 性期、缓解期和慢性期等典型的 ３ 阶段病程。作者以 Ｌｅｗｉｓ 为实验动物， 观察发现急性期平均出现在致敏后 第 ７， ８ 天， 约 ７ ｄ 后症状逐渐消失， 而后进入持续约 １０ ｄ 的缓解期， 慢性期平均出现在致敏第 ２７ 天， 此后 症状不再缓解， 未经治疗的大鼠症状会逐渐加重， 甚至 死于无力咀嚼引起的体质量减轻、衰竭或呼吸困难。大 鼠的急性期症状持续时间短暂， 且能够自发缓解， 其慢 性期的表现更符合人类重症肌无力， 也更适用于重症 肌无力的研究。
小鼠与大鼠不同， 没有急性期和缓解期， 而是表现 出一种缓慢进展的发病过程。大多数小鼠（９０％左右）在 追加免疫后 ７～１４ ｄ 发病， 而在一些高敏感性的种系如 Ｃ５７ＢＬ ／６ 和 ＳＪＬ 中， 个别小鼠可在首次免疫后三四周 出现无力或瘫痪。 １．４ 模 型 的 评 估 在 首 次 （ 大 鼠 ） 和 追 加 免 疫 后 （ 小 鼠） 隔日对动物进行评分， 观察实验性自身免疫性重症 肌无力特有的肌无力的体征。大鼠症状分 ３ 级： ０ 级没 有肯定肌无力的表现； １ 级休息时肌力正常， 但在连续 ２０ 次抓挠运动后下颌靠在地板上， 无力抬起头； ２ 级休 息时表现出像 １ 级一样的无力； ３ 级为濒死状态、脱水 和 瘫 痪［１］。
依 次 递 减 为 Ｗｉｓｔａｒ ＞Ｍｕｎｉｃｈ ＞Ｆｉｓｃｈｅｒ ＞Ｌｅｗｉｓ ＞Ｂｕｆｆａｌｏ ＞Ｂｒｏｗｎ＞Ｎｏｒｗａｙ＞ＡＣＩ＞Ｗａｔａｒ Ｋｙｏｔｏ＞Ｋｏｐｅｎ－ ｈａｇｅｎ＞Ｗａｓｔａｒ Ｆｕｒｔｈ； 小鼠中单倍型 Ｈ－ ２ｂ 系对实验性自身免疫性重 症 肌 无 力 有 高 度 易 感 性 ， Ｈ－ ２ｑ 系 中 度 易 感 ， 单 倍 型 Ｈ－ ２ｋ 和 Ｈ－ ２ｐ 系相对抵抗。其中对实验性自身免疫性 重症肌无力的易感性以小鼠 Ｃ５７ＢＬ ／６， ＳＪＬ 和 ＡＫＰ 较 高， 发病率在 ５０％～７０％， 其他种系如 ＳＷＲ， ＢＡＬＢ ／ｃ 和 Ｃ３Ｈ ／Ｈｅ 易感性低， 仅为 ０％～１５％。 １．２ 抗原 免疫原乙酰胆碱受体自加利福尼亚电 鳗 中提取和纯化， 将它与福氏完全佐剂混合制成抗原乳
剂后再用于动物的免疫。福氏佐剂为非特异性的免疫 增强剂， 可以增强和扩大免疫应答的效果。
在抗原乳剂中， 免疫大鼠的抗原乳剂为 ２００ μＬ， 其中含乙酰胆碱受体 ５０ μＬ； 小鼠一般需要 ２ 次或 ３ 次的追加免疫， 每次剂量为 １００ μＬ， 其中含乙酰胆碱 受体 ２５ μＬ。追加免疫常在首次免疫后的第 ５～８ 周。
·研究快报·
实验性自身免疫性重症肌无力模型的制备☆
杨春晓， 王化冰， 王维治
哈尔滨医科大学附属第二医院神经内科， 黑龙江省哈尔滨市 １５００８６ 杨春晓☆， 女， １９７２ 年生， 黑龙江省哈尔滨市人， 汉族， ２００５ 年哈尔滨医 科大学毕业， 博士， 副主任医师， 主要从事神经免疫学方面的研究。 中图分类号：Ｒ７４６．１ 文献标识码：Ａ 文章 编 号：１６７１－ ５９２６（２００６）２８－ ０１１６－ ０２ 收稿日期：２００５－ １２－ ０２ 修回日期：２００６－ ０４－ １７ （０５－ ９９－ ８－ ６０４７ ／Ｇ）
杨春晓， 王化冰， 王维治．实验性自身免疫性重症肌无力模型的制备［Ｊ］．中国临床康 复， ２００６， １０（２８）：１１６－ ７ ［ｗｗｗ．ｚｇｌｃｋｆ．ｃｏｍ］
摘要 目的： 建立一种模拟人类重症肌无力的动物模型。 方法： ①主动免疫： 多采用大鼠和小鼠， 将免疫原乙酰胆碱受体与福氏 完全佐剂混合制成抗原乳剂后用于动物免疫。免疫大鼠的抗原乳剂为 ２００ μＬ。小鼠需要在首次免疫后的第 ５～８ 周进行 ２ 次或 ３ 次的追加免 疫， 每次剂量为 １００ μＬ。②被动免疫： 分离重症肌无力患者外周血提取 淋巴细胞， 将包含（ ２．０～２．５） ×１０７ 淋巴细胞的磷酸 盐 缓 冲 液 ０．３ ｍＬ 腹 腔 注射于免疫严重联合免疫缺陷小鼠， 在其血液中产生人类的抗乙酰胆 碱受体抗体。免疫后的小鼠不能产生类似于临床上重症肌无力的体征， 其 表现需要通过肌松药泮库溴铵（ ｐａｖｕｌｏｎ） 予以检测。腹腔注射 ０．０３ ｍｇ ／ｋｇ ｐａｖｕｌｏｎ 后， 令小鼠上肢抓握一横梁， 处于悬空状态 ， 正 常 小 鼠 抓 握 的 时 间在 １０ ｍｉｎ 左右。 结 果 ： ①主 动 免 疫 ： 大 鼠 在 首 次 免 疫 后 即 可 表 现 出 急 性 期 、缓 解 期 和 慢 性期等典型的 ３ 阶段重症肌无力病程。其慢性期的表现更符合人类重 症肌无力。而小鼠表现出一种缓慢进展的发病过程， 大多数小鼠（９０％左 右）在追加免疫后 ７～１４ ｄ 发病。②被动免疫： 免疫后严重联合免疫缺陷 小鼠抓握的时间短于 １０ ｍｉｎ。 结论： 经以上方法诱导出的实验性自身免疫性重症肌无力动物模型， 有 助 于 为 重 症 肌 无 力 的 病 因 、病 理 分 析 及 临 床 药 物 治 疗 提 供 实 验 学 依 据 。 主题词： 重症肌无力， 自身免疫性， 实验性 ／病理学； 疾病模型， 动物
０ 引言 目前普遍认为重症肌无力是 Ｔ 细胞依赖、补体参
与及自身抗体介导的器官特异性自身免疫病。实验性
自身免疫性重症肌无力是模拟人类重症肌无力的一种
动物模型， 为临床分析重症肌无力的病因、病理和治疗 提供了基础。
１ 主动免疫的实验性自身免疫性重症肌无力动物模 型
１．１ 动物种系的选择 现多采用大鼠和小鼠。其中大 鼠对实验性自身免疫性重症肌无力的易感性强弱程度
免疫的常见部位为 ６ 个皮下注射点， 它们包括后 背、后足跖以及尾的起始部。实验中作者常选择后背 ４ 个点作为首次免疫部位， 后足跖为追加免疫部位。 １．３ 模型的诱导 大鼠在首次免疫后 即 可 表 现 出 急 性期、缓解期和慢性期等典型的 ３ 阶段病程。作者以 Ｌｅｗｉｓ 为实验动物， 观察发现急性期平均出现在致敏后 第 ７， ８ 天， 约 ７ ｄ 后症状逐渐消失， 而后进入持续约 １０ ｄ 的缓解期， 慢性期平均出现在致敏第 ２７ 天， 此后 症状不再缓解， 未经治疗的大鼠症状会逐渐加重， 甚至 死于无力咀嚼引起的体质量减轻、衰竭或呼吸困难。大 鼠的急性期症状持续时间短暂， 且能够自发缓解， 其慢 性期的表现更符合人类重症肌无力， 也更适用于重症 肌无力的研究。
小鼠与大鼠不同， 没有急性期和缓解期， 而是表现 出一种缓慢进展的发病过程。大多数小鼠（９０％左右）在 追加免疫后 ７～１４ ｄ 发病， 而在一些高敏感性的种系如 Ｃ５７ＢＬ ／６ 和 ＳＪＬ 中， 个别小鼠可在首次免疫后三四周 出现无力或瘫痪。 １．４ 模 型 的 评 估 在 首 次 （ 大 鼠 ） 和 追 加 免 疫 后 （ 小 鼠） 隔日对动物进行评分， 观察实验性自身免疫性重症 肌无力特有的肌无力的体征。大鼠症状分 ３ 级： ０ 级没 有肯定肌无力的表现； １ 级休息时肌力正常， 但在连续 ２０ 次抓挠运动后下颌靠在地板上， 无力抬起头； ２ 级休 息时表现出像 １ 级一样的无力； ３ 级为濒死状态、脱水 和 瘫 痪［１］。
依 次 递 减 为 Ｗｉｓｔａｒ ＞Ｍｕｎｉｃｈ ＞Ｆｉｓｃｈｅｒ ＞Ｌｅｗｉｓ ＞Ｂｕｆｆａｌｏ ＞Ｂｒｏｗｎ＞Ｎｏｒｗａｙ＞ＡＣＩ＞Ｗａｔａｒ Ｋｙｏｔｏ＞Ｋｏｐｅｎ－ ｈａｇｅｎ＞Ｗａｓｔａｒ Ｆｕｒｔｈ； 小鼠中单倍型 Ｈ－ ２ｂ 系对实验性自身免疫性重 症 肌 无 力 有 高 度 易 感 性 ， Ｈ－ ２ｑ 系 中 度 易 感 ， 单 倍 型 Ｈ－ ２ｋ 和 Ｈ－ ２ｐ 系相对抵抗。其中对实验性自身免疫性 重症肌无力的易感性以小鼠 Ｃ５７ＢＬ ／６， ＳＪＬ 和 ＡＫＰ 较 高， 发病率在 ５０％～７０％， 其他种系如 ＳＷＲ， ＢＡＬＢ ／ｃ 和 Ｃ３Ｈ ／Ｈｅ 易感性低， 仅为 ０％～１５％。 １．２ 抗原 免疫原乙酰胆碱受体自加利福尼亚电 鳗 中提取和纯化， 将它与福氏完全佐剂混合制成抗原乳
剂后再用于动物的免疫。福氏佐剂为非特异性的免疫 增强剂， 可以增强和扩大免疫应答的效果。
在抗原乳剂中， 免疫大鼠的抗原乳剂为 ２００ μＬ， 其中含乙酰胆碱受体 ５０ μＬ； 小鼠一般需要 ２ 次或 ３ 次的追加免疫， 每次剂量为 １００ μＬ， 其中含乙酰胆碱 受体 ２５ μＬ。追加免疫常在首次免疫后的第 ５～８ 周。