第四章基因克隆的载体、噬菌体载体
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插入式载体可携带的外源ＤＮ Ａ片段较替换式为小。
根据体外互补作用研究发现，λ噬菌体的头部和尾 部的装配是分开进行的。头部基因发生了突变的噬 菌体只能形成尾部，而尾部基因发生了突变的噬菌 体则只能形成头部。
将这两种不同突变型的噬菌体的提取物混合起来，便能够在体外装配成有生物 活性的噬菌体颗粒。这就是噬菌体体外包装所依据的基本原理。
2.2λ噬菌体载体
溶菌阶段
(复制和释放)
λ phage
48.5 kb in length Linear or circular genome
溶源阶段
(整合到寄主染色体上)
The phage cos ends(cohesive-end site )
5‘-CGGGGCGGCGACCTCG-3’ 3’-GCCCCGCCGCTGGAGC-5’
可以定向的克隆DNA片段，克隆在M13 RFDNA分子上的双链DNA 片段，到了子代噬菌体便成了单链的形式。所以如果要同时分离ＤＮ Ａ分子中的双链，则需要两种独立的克隆。根据M13的生物学特性知 道，M13子代噬菌体中总是只含有（＋）链，所以M13载体克隆的外 源DNA片段在子代噬菌体中究竟是含有DNA分子中的哪条链，则完全 取决于外源DNA克隆时的取向。这样一来，为分别分离外源DNA分子 的两条链带来一定的麻烦，解决这一问题的一个行之有效的方法就是 定向克隆技术。
能转染E.coli的F+或F-细
胞。
3.噬菌体颗粒的大 小是受其DNA的大 小制约的，这一点 正好与λ噬菌体相 反。所以M13噬菌 体并不存在包装限 制的问题。
M13 life cycle
M13载体
具有多克隆位点(MCS)，方便克隆。许多M13载体的多克隆位点与质 粒载体pUC序列的多克隆位点是相同的，在克隆位点选择上更为方便。
替换型噬菌体λ是使用最广泛的载体。
Charon 4A Lac
EcoR I EMBL3/4
Lac
EcoR I
EcoR I BanH I Sal I
Sal I BamH I EcoR I
Charon 40 Lac
MCS
MCS
替换型载体克隆外源DNA的步骤
1. 应用适当的核酸内切酶 消化λ载体，除去可取 代的DNA片段；
λ噬菌体的包装限制为野生噬菌体DNA（约48.5 kb）的75%-105%。
由于λ噬菌体包装时，当DNA 的长度短于野生型的78%或超过 105%时，噬菌体的活性就急剧 下降。因此只包装它的野生型 DNA（48.5KB）的75% ～ 105%左右的ＤＮＡ，要求λ载体 DNA和外源DNA长度之和在 39～53kb之间。
2.1.3 噬菌体的溶源生命周期
溶源生长周期： 是指在感染过程中没有产生出子代 噬菌体颗粒，噬菌体的DNA是整合到寄主细胞染 色体DNA上，成为它的一个组成部分。 现知道只有双链DNA的噬菌体才具有溶源周期
温和噬菌体：既能进入溶菌生命周期又能进入溶源生命周期 溶源性细菌：具有一种完整的噬菌体基因组的细菌 溶 源 化：用温和噬菌体感染细菌培养物使之形成溶源性细菌的过程 整 合： 噬菌体的DNA是被包容在寄主细胞染色体DNA中 原噬菌体：在溶源细菌内存在的整合的或非整合的噬菌体 超感染免疫性：溶源性细菌不能够被头一次感染并使之溶源化的同种
（左右臂连接） （三段自身连接）
（插入片段）
根据噬菌斑的透明度或颜色来进行重组子的筛选
2.3 单链DNA噬菌体载体(M13)
M13噬菌体载体
M13是一种含单键（+）DNA（ssDNA）的丝状 大肠杆菌噬菌体，其基因组大小为6.4kb。这类载体 主要用来获得大量的单链ＤＮＡ片段，这种单链Ｄ ＮＡ片段在遗传学研究中主要用来测定ＤＮＡ序列 （sanger双脱氧法）、基因的定点突变研究、异源 双链DNA的分析等。
Lytic phase
(Replicate and release)
Lysogenic phase
(integrate into host genome)
λ噬菌体的基因组结构
已经定位的λ噬菌体的基因至少有61个，其中有一半左右参与了噬 菌体生命周期的活动，我们称这类基因为λ噬菌体的必要基因；另一 部分基因，当它们被外源基因取代之后，并不影响噬菌体的生命功能， 我们称这类基因为λ噬菌体的非必要的基因。
λ噬菌体载体的主要类型
1. 插入式载体 一种只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点的派生载体。
2. 替换型载体（取代型载体） 具有成对的克隆位点，在这两个位点之间的λDNA区段可以 被 外源插入的DNA片段所取代。
插入式载体
λ噬菌体载体相对于质粒载体来说，克隆片段较大，所以 一般用于cDNA文库或基因组文库的构建。
第二节 噬菌体载体
（Bacteriophage，简称phage）
2.1 噬菌体的一般生物特性
可脱离寄主细胞生存，但不能进行复制。 除了对寄主的依赖性，还具备其它的功能： 1、保护自己的核苷酸分子（DNA、RNA）免遭环
境化学物质的破坏； 2、将其核苷酸分子注入到被感染的细菌细胞； 3、将被感染的细菌细胞转变成制造噬菌体的体系， 从而长生出大量的子代噬菌体颗粒； 4、使感染的细菌细胞释放出子代的噬菌体颗粒
cI基因插入失活：如λ gt10、λNM1149等载体，在cI基 因上有EcoR I及Hind III的酶切位点。外源基因插入后将 导致cI基因的失活。cI基因失活后将导致噬菌体不能溶原 化，产生清晰的噬菌斑。相反，产生混浊的噬菌斑。
Lac Z基因插入失活：如charon16A载体，在非必须区段 引入lac Z基因，在lac Z基因上有EcoR I位点，插入失活 后利用X-gal法筛选（兰白筛选）。
λ phage
Protein coat
DNA
根据执行功能的不同可将基因组分为三个区。左边区域包
括从基因 Nu1 到基因 J 之间的基因，其产物用于噬菌体
DNA 的包装和噬菌体颗粒的形成。中间区域（基因 J 右
边至 gam）编码基因调节、溶源状态的发生和维持以及
遗须右传的边重，区组在域所构（需建基要载因Lo的体nggaa基时rm(m因可le右f。以t边)其去至中掉基许，因多用R基外z）因源对D包裂N含A解噬片生菌段长体替是s复代h非o制。r必tar(mright)
和裂解宿主co菌s 所必须的基因。
12bp
Nonessential region
cos
Exogenous DNA (~20-23 kb)
λ phage
• Viruses that can infect bacteria. •48.5 kb in length •Linear or circular genome (cos ends)
M13mp19 MCS
EcoRI BamHI HindIII PstI BglI BP
B
P
BglI PstI HindIII BamHI EcoRI
BamHI & PstI PB
B
P
B
P
M13克隆 载体分子 结构图
单链DNA噬菌体载体
M13、f1、fd 优越性： 1.单链DNA噬菌体的复制，是以双链环形的DNA为媒介的，
M13噬菌体的特点
1.感染Ecoli后，在宿
主细胞内会形成双链 的复制型DNA （ replication form DNA, RF DNA）。可 以象质粒DNA那样在 体外进行纯化和操作。
2.成熟的噬菌体颗粒仅能
感染E.coli的F+细胞，这
是因为这种噬菌体的感染 位点在性散毛上。但是无 论是RFDNA或ssDNA都
有些噬菌体的DNA碱基不是由标准的A/T/C/G组成 的。
Example：
T4噬菌体DNA没有C碱基，取代的是5-羟甲基胞嘧 啶（HMC）；SP01噬菌体DNA中没有T碱基，取 代的是5-羟甲基尿嘧啶（HMU）。
2.1.2 噬菌体的溶菌生命周期
噬菌体的生命周期分为溶菌周期和溶源周期 只具有溶菌生长周期的噬菌体颗粒叫烈性噬菌体。
2.1.1 噬菌体的结构和其核酸类型
结构：无尾部结构的二十面体型、 具尾部结构的二十面体型、 线状体型
核酸类型：最常见的是双链线性DNA、 双链环形DNA、 单链环形DNA、 单链线形DNA、 单链RNA。
不同的噬菌体之间的核酸分子量的差异也是比较大 的。大分子量的噬菌体生命周期比较复杂；对寄主 的依赖性较低。
替换式载体
野生型噬菌体染色体的中段对于噬菌体的感染和复制是非必要的， 外源DNA可以取代这一片段，例如Charon 4A、 λEMBL 3/4、 Charon40等载体，这些载体是用Lac 5（乳糖操纵子的大部分系列， 包括完整的Lac Z）替换入噬菌体的中间区段，同时将Lac5作为选择 标记，使用时用EcoRI水解，去掉中间的片段，再与欲克隆片段在体
Circular form
Cleavage (during packaging)
Ligation (after infection)
5’-CG
+ GGGCGGGCGACCTCG-3’ Linear form
3’-GCCCCGCCGCTGGA
GC-5’
通过Cos末端互补单链形成环状 DNA 分子，在 宿主细胞的 DNA 连接酶和旋促酶作用下，形成封 闭的环状 DNA 分子，充当转录的模板。
噬菌体再感染。
溶源周期的主要特征
λ噬菌体的特征： 1、噬菌体的DNA分子注入细菌细胞 2、经过短暂的转录之后，需要合成一种整合酶，于是
转录活性便被一种阻遏物所关闭 3、噬菌体的DNA分子插入到细菌染色体基因组DNA上，
变成原噬菌体 4、细菌继续生长、增值，噬菌体的基因作为细菌染色
体的一部分进行复制。
2. 将上述所得的 λDNA 载体臂同外源Байду номын сангаасNA片 段的连接；
3. 对重组体的λDNA分子 进行包装和增殖，以 得到有感染性的λ重组 噬菌体
2.连接
1.酶切 3.组装
4.侵染
体外包装
λ噬菌体DNA体外重组后，一般必须经过体外包装，
然后以噬菌体感染的方式将重组DNA导入E.coli细胞
内。这是因为以感染方式导入细胞的频率可达106～ 108/μgDNA，而以转染（translation）的方式导入 的频率仅为103～105/ μgDNA。
Blue-white selection
M13载体系列的优点
1.在这类载体的基因组中有一条饰变的β-半乳糖苷 酶基因片段（HindⅢ片段），其中插入了一段具 有密集的多克隆位点的序列；
2.M13载体系列是应用基因工程技术成对地构建的， 可有效地克隆双链DNA分子中的每一条链。
M13mp18 MCS
外进行重组、包装。而后，感染E.coli使之在E.coli内繁殖，并裂解 E.coli，形成空斑。
spi-选择 λ噬菌体的red和gam基因产物可抑制噬菌体在宿主细菌 中正常生长，red-和gam-突变型λ噬菌体则可正常生长。当置换型载 体的可置换片段中放上red和gam基因后，外源DNA片段取代了置换 片段，则同时除去了red、gam基因，就可在宿主菌中生长，否则就 不能正常生长。
LA 32.7
λgt 10
cI EcoR I
RA10.6
LA 19.9
Charon 16A
lac Z EcoR I
RA21.9
λ 替换型载体（取代型载体）
EMBL3、DASH
外源DNA取代噬菌体染色体中对于噬菌体的感 染和复制非必要的片段 (～20 kb)
高感染效率 (109 转化株/ug 载体 DNA, 比质 粒高 100倍)
烈性噬菌体溶菌生长的基本过程：
1、吸附 吸附到位于感染细胞表面的特殊接受器上 2、注入 噬菌体DNA穿过细胞壁注入寄主细胞 3、转变 被感染的细胞成为制造噬菌体颗粒的场所 4、合成 大量合成噬菌体特有的核酸和蛋白质 5、组装 包装了DNA头部和尾部组装成噬菌体的颗粒 6、释放 合成的子代噬菌体颗粒从寄主细胞内释放出来
这种复制形式的DNA简称RFDNA； 2. 不论是RFDNA还是ssDNA都能感染大肠杆菌； 3. 单链DNA噬菌体颗粒的大小，是受其DNA的多少制约的，
噬菌体P1基本特征
不存在噬菌体 DNA分子的整合作 用体系，而是变成 了一种进行独立复 制的环形的质粒 DNA分子。
溶源噬菌体的诱发
依赖于阻遏基因与操纵基因的相互作用。阻遏 物被一种蛋白酶切割，失活，使噬菌体转录。 需要删除酶将噬菌体的DNA从大肠杆菌染色体 上删除下来，使之形成环形的DNA分子，恢复 溶源周期开始时的状态。
根据体外互补作用研究发现，λ噬菌体的头部和尾 部的装配是分开进行的。头部基因发生了突变的噬 菌体只能形成尾部，而尾部基因发生了突变的噬菌 体则只能形成头部。
将这两种不同突变型的噬菌体的提取物混合起来，便能够在体外装配成有生物 活性的噬菌体颗粒。这就是噬菌体体外包装所依据的基本原理。
2.2λ噬菌体载体
溶菌阶段
(复制和释放)
λ phage
48.5 kb in length Linear or circular genome
溶源阶段
(整合到寄主染色体上)
The phage cos ends(cohesive-end site )
5‘-CGGGGCGGCGACCTCG-3’ 3’-GCCCCGCCGCTGGAGC-5’
可以定向的克隆DNA片段，克隆在M13 RFDNA分子上的双链DNA 片段，到了子代噬菌体便成了单链的形式。所以如果要同时分离ＤＮ Ａ分子中的双链，则需要两种独立的克隆。根据M13的生物学特性知 道，M13子代噬菌体中总是只含有（＋）链，所以M13载体克隆的外 源DNA片段在子代噬菌体中究竟是含有DNA分子中的哪条链，则完全 取决于外源DNA克隆时的取向。这样一来，为分别分离外源DNA分子 的两条链带来一定的麻烦，解决这一问题的一个行之有效的方法就是 定向克隆技术。
能转染E.coli的F+或F-细
胞。
3.噬菌体颗粒的大 小是受其DNA的大 小制约的，这一点 正好与λ噬菌体相 反。所以M13噬菌 体并不存在包装限 制的问题。
M13 life cycle
M13载体
具有多克隆位点(MCS)，方便克隆。许多M13载体的多克隆位点与质 粒载体pUC序列的多克隆位点是相同的，在克隆位点选择上更为方便。
替换型噬菌体λ是使用最广泛的载体。
Charon 4A Lac
EcoR I EMBL3/4
Lac
EcoR I
EcoR I BanH I Sal I
Sal I BamH I EcoR I
Charon 40 Lac
MCS
MCS
替换型载体克隆外源DNA的步骤
1. 应用适当的核酸内切酶 消化λ载体，除去可取 代的DNA片段；
λ噬菌体的包装限制为野生噬菌体DNA（约48.5 kb）的75%-105%。
由于λ噬菌体包装时，当DNA 的长度短于野生型的78%或超过 105%时，噬菌体的活性就急剧 下降。因此只包装它的野生型 DNA（48.5KB）的75% ～ 105%左右的ＤＮＡ，要求λ载体 DNA和外源DNA长度之和在 39～53kb之间。
2.1.3 噬菌体的溶源生命周期
溶源生长周期： 是指在感染过程中没有产生出子代 噬菌体颗粒，噬菌体的DNA是整合到寄主细胞染 色体DNA上，成为它的一个组成部分。 现知道只有双链DNA的噬菌体才具有溶源周期
温和噬菌体：既能进入溶菌生命周期又能进入溶源生命周期 溶源性细菌：具有一种完整的噬菌体基因组的细菌 溶 源 化：用温和噬菌体感染细菌培养物使之形成溶源性细菌的过程 整 合： 噬菌体的DNA是被包容在寄主细胞染色体DNA中 原噬菌体：在溶源细菌内存在的整合的或非整合的噬菌体 超感染免疫性：溶源性细菌不能够被头一次感染并使之溶源化的同种
（左右臂连接） （三段自身连接）
（插入片段）
根据噬菌斑的透明度或颜色来进行重组子的筛选
2.3 单链DNA噬菌体载体(M13)
M13噬菌体载体
M13是一种含单键（+）DNA（ssDNA）的丝状 大肠杆菌噬菌体，其基因组大小为6.4kb。这类载体 主要用来获得大量的单链ＤＮＡ片段，这种单链Ｄ ＮＡ片段在遗传学研究中主要用来测定ＤＮＡ序列 （sanger双脱氧法）、基因的定点突变研究、异源 双链DNA的分析等。
Lytic phase
(Replicate and release)
Lysogenic phase
(integrate into host genome)
λ噬菌体的基因组结构
已经定位的λ噬菌体的基因至少有61个，其中有一半左右参与了噬 菌体生命周期的活动，我们称这类基因为λ噬菌体的必要基因；另一 部分基因，当它们被外源基因取代之后，并不影响噬菌体的生命功能， 我们称这类基因为λ噬菌体的非必要的基因。
λ噬菌体载体的主要类型
1. 插入式载体 一种只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点的派生载体。
2. 替换型载体（取代型载体） 具有成对的克隆位点，在这两个位点之间的λDNA区段可以 被 外源插入的DNA片段所取代。
插入式载体
λ噬菌体载体相对于质粒载体来说，克隆片段较大，所以 一般用于cDNA文库或基因组文库的构建。
第二节 噬菌体载体
（Bacteriophage，简称phage）
2.1 噬菌体的一般生物特性
可脱离寄主细胞生存，但不能进行复制。 除了对寄主的依赖性，还具备其它的功能： 1、保护自己的核苷酸分子（DNA、RNA）免遭环
境化学物质的破坏； 2、将其核苷酸分子注入到被感染的细菌细胞； 3、将被感染的细菌细胞转变成制造噬菌体的体系， 从而长生出大量的子代噬菌体颗粒； 4、使感染的细菌细胞释放出子代的噬菌体颗粒
cI基因插入失活：如λ gt10、λNM1149等载体，在cI基 因上有EcoR I及Hind III的酶切位点。外源基因插入后将 导致cI基因的失活。cI基因失活后将导致噬菌体不能溶原 化，产生清晰的噬菌斑。相反，产生混浊的噬菌斑。
Lac Z基因插入失活：如charon16A载体，在非必须区段 引入lac Z基因，在lac Z基因上有EcoR I位点，插入失活 后利用X-gal法筛选（兰白筛选）。
λ phage
Protein coat
DNA
根据执行功能的不同可将基因组分为三个区。左边区域包
括从基因 Nu1 到基因 J 之间的基因，其产物用于噬菌体
DNA 的包装和噬菌体颗粒的形成。中间区域（基因 J 右
边至 gam）编码基因调节、溶源状态的发生和维持以及
遗须右传的边重，区组在域所构（需建基要载因Lo的体nggaa基时rm(m因可le右f。以t边)其去至中掉基许，因多用R基外z）因源对D包裂N含A解噬片生菌段长体替是s复代h非o制。r必tar(mright)
和裂解宿主co菌s 所必须的基因。
12bp
Nonessential region
cos
Exogenous DNA (~20-23 kb)
λ phage
• Viruses that can infect bacteria. •48.5 kb in length •Linear or circular genome (cos ends)
M13mp19 MCS
EcoRI BamHI HindIII PstI BglI BP
B
P
BglI PstI HindIII BamHI EcoRI
BamHI & PstI PB
B
P
B
P
M13克隆 载体分子 结构图
单链DNA噬菌体载体
M13、f1、fd 优越性： 1.单链DNA噬菌体的复制，是以双链环形的DNA为媒介的，
M13噬菌体的特点
1.感染Ecoli后，在宿
主细胞内会形成双链 的复制型DNA （ replication form DNA, RF DNA）。可 以象质粒DNA那样在 体外进行纯化和操作。
2.成熟的噬菌体颗粒仅能
感染E.coli的F+细胞，这
是因为这种噬菌体的感染 位点在性散毛上。但是无 论是RFDNA或ssDNA都
有些噬菌体的DNA碱基不是由标准的A/T/C/G组成 的。
Example：
T4噬菌体DNA没有C碱基，取代的是5-羟甲基胞嘧 啶（HMC）；SP01噬菌体DNA中没有T碱基，取 代的是5-羟甲基尿嘧啶（HMU）。
2.1.2 噬菌体的溶菌生命周期
噬菌体的生命周期分为溶菌周期和溶源周期 只具有溶菌生长周期的噬菌体颗粒叫烈性噬菌体。
2.1.1 噬菌体的结构和其核酸类型
结构：无尾部结构的二十面体型、 具尾部结构的二十面体型、 线状体型
核酸类型：最常见的是双链线性DNA、 双链环形DNA、 单链环形DNA、 单链线形DNA、 单链RNA。
不同的噬菌体之间的核酸分子量的差异也是比较大 的。大分子量的噬菌体生命周期比较复杂；对寄主 的依赖性较低。
替换式载体
野生型噬菌体染色体的中段对于噬菌体的感染和复制是非必要的， 外源DNA可以取代这一片段，例如Charon 4A、 λEMBL 3/4、 Charon40等载体，这些载体是用Lac 5（乳糖操纵子的大部分系列， 包括完整的Lac Z）替换入噬菌体的中间区段，同时将Lac5作为选择 标记，使用时用EcoRI水解，去掉中间的片段，再与欲克隆片段在体
Circular form
Cleavage (during packaging)
Ligation (after infection)
5’-CG
+ GGGCGGGCGACCTCG-3’ Linear form
3’-GCCCCGCCGCTGGA
GC-5’
通过Cos末端互补单链形成环状 DNA 分子，在 宿主细胞的 DNA 连接酶和旋促酶作用下，形成封 闭的环状 DNA 分子，充当转录的模板。
噬菌体再感染。
溶源周期的主要特征
λ噬菌体的特征： 1、噬菌体的DNA分子注入细菌细胞 2、经过短暂的转录之后，需要合成一种整合酶，于是
转录活性便被一种阻遏物所关闭 3、噬菌体的DNA分子插入到细菌染色体基因组DNA上，
变成原噬菌体 4、细菌继续生长、增值，噬菌体的基因作为细菌染色
体的一部分进行复制。
2. 将上述所得的 λDNA 载体臂同外源Байду номын сангаасNA片 段的连接；
3. 对重组体的λDNA分子 进行包装和增殖，以 得到有感染性的λ重组 噬菌体
2.连接
1.酶切 3.组装
4.侵染
体外包装
λ噬菌体DNA体外重组后，一般必须经过体外包装，
然后以噬菌体感染的方式将重组DNA导入E.coli细胞
内。这是因为以感染方式导入细胞的频率可达106～ 108/μgDNA，而以转染（translation）的方式导入 的频率仅为103～105/ μgDNA。
Blue-white selection
M13载体系列的优点
1.在这类载体的基因组中有一条饰变的β-半乳糖苷 酶基因片段（HindⅢ片段），其中插入了一段具 有密集的多克隆位点的序列；
2.M13载体系列是应用基因工程技术成对地构建的， 可有效地克隆双链DNA分子中的每一条链。
M13mp18 MCS
外进行重组、包装。而后，感染E.coli使之在E.coli内繁殖，并裂解 E.coli，形成空斑。
spi-选择 λ噬菌体的red和gam基因产物可抑制噬菌体在宿主细菌 中正常生长，red-和gam-突变型λ噬菌体则可正常生长。当置换型载 体的可置换片段中放上red和gam基因后，外源DNA片段取代了置换 片段，则同时除去了red、gam基因，就可在宿主菌中生长，否则就 不能正常生长。
LA 32.7
λgt 10
cI EcoR I
RA10.6
LA 19.9
Charon 16A
lac Z EcoR I
RA21.9
λ 替换型载体（取代型载体）
EMBL3、DASH
外源DNA取代噬菌体染色体中对于噬菌体的感 染和复制非必要的片段 (～20 kb)
高感染效率 (109 转化株/ug 载体 DNA, 比质 粒高 100倍)
烈性噬菌体溶菌生长的基本过程：
1、吸附 吸附到位于感染细胞表面的特殊接受器上 2、注入 噬菌体DNA穿过细胞壁注入寄主细胞 3、转变 被感染的细胞成为制造噬菌体颗粒的场所 4、合成 大量合成噬菌体特有的核酸和蛋白质 5、组装 包装了DNA头部和尾部组装成噬菌体的颗粒 6、释放 合成的子代噬菌体颗粒从寄主细胞内释放出来
这种复制形式的DNA简称RFDNA； 2. 不论是RFDNA还是ssDNA都能感染大肠杆菌； 3. 单链DNA噬菌体颗粒的大小，是受其DNA的多少制约的，
噬菌体P1基本特征
不存在噬菌体 DNA分子的整合作 用体系，而是变成 了一种进行独立复 制的环形的质粒 DNA分子。
溶源噬菌体的诱发
依赖于阻遏基因与操纵基因的相互作用。阻遏 物被一种蛋白酶切割，失活，使噬菌体转录。 需要删除酶将噬菌体的DNA从大肠杆菌染色体 上删除下来，使之形成环形的DNA分子，恢复 溶源周期开始时的状态。