不同种植年限铁皮石斛多糖、甘露糖含量的测定及其它化学成分比较研究

学成分的比较研究。本文在测定不同种植年限铁皮石斛多 糖及甘露糖的基础上，结合高效液相色谱 － 二极管阵列光 谱检测（ HPLC － DAD） 对其正丁醇及乙醚部位的化学成分 组成及含量变化进行了初步分析。通过探索铁皮石斛中多 糖及其它成分随种植年限不同的变化情况，为铁皮石斛的 采收提供参考。 1 实验仪器与试剂
不 同 种 植 年 限 铁 皮 石 斛 多 糖 、甘 露 糖 含 量 的 测 定 及其它化学成分比较研究
颜美秋1 ，陈素红2 ，周桂芬1 ，庞敏霞1 ，陈梅霞1 ，吕圭源1
（ 1． 浙江中医药大学药物研究所，浙江 杭州 310053； 2． 温州医科大学中药研究院，浙江 温州 325035）
摘 要： 目的： 比较不同种植年限铁皮石斛的多糖及甘露糖含量，并对其正丁醇部位及乙醚部位化学成分进
参照 2010 版《中华人民共和国药典》铁皮石斛项下多 糖含量测定方法［1］，以无水葡萄糖为对照品，采用苯酚 － 硫酸法，在 486nm 处 测 定 紫 外 吸 收，对 照 品 在 9． 75 ～ 68. 25μg·mL － 1 范围内呈良好的线性关系，标准曲线为 Y = 9. 970 7X + 0． 081 1（ r = 0． 998） 。不同年限的铁皮石斛样 品平行制备 3 份，测定结果见表 1。铁皮石斛多糖含量随 种植年限不同而变化，2 年生 ＞ 3 年生 ＞ 4 年生，2 ～ 4 年生 铁皮石斛随种植年限增加，多糖含量减少。 2． 2 甘露糖含量的测定
不同种植年限的铁皮石斛于 2011 年 5 月 4 日采自浙 江天台铁皮石斛种植基地（ 未开花） 。D － 无水葡萄糖对照 品（ 批号： 110833 － 200904 ） 、盐 酸 氨 基 葡 萄 糖 （ 140649 － 200702） ； 甘露糖（ 140651 － 200602） 均购自中国药品生物制 品检定所。甲醇为色谱纯（ 美国 TEDIA） ，其余试剂均为分 析纯。 2 实验方法与结果 2． 1 多糖含量的测定
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江省教育厅项目（ Y201122310） 作者简介： 颜美秋（ 1983 － ） ，女，浙江永康人，助理研究员，博士研
明目等药理 作 用 强 度 的 改 变［3］。 目 前 市 场 上 流 通 的 铁 皮 石斛一般种植年限为 2 ～ 4 年，2010 版《中华人民共和国药
学
究生，研究方向： 中药成分分析及药效物质基础研究。
＞ 4 年生，2 ～ 4 年生铁皮石斛随种植年限增加，多糖含量减少。甘露糖含量随种植年限的变化也呈现与多糖相同
的变化趋势。铁皮石斛正丁醇部位中黄酮类成分在 360 nm 下随种植年限变化有一定的变化，2 年生中黄酮类化
合物相对极性较小，且较集中。3 年生极性分布较广，且含量相对较大。4 年生主要分布在极性大的黄酮类化合
表 1 不同年限铁皮石斛多糖及甘露 糖含量测定结果（ n = 3）
样品
2 年生 3 年生 4 年生
多糖含量（ % ） 30． 0 ± 2． 06 22． 8 ± 2． 31 16． 9 ± 1． 87
甘露糖含量（ % ） 26． 3 ± 1． 63 19． 6 ± 1． 92 13． 2 ± 1． 34
中 Kimura et Migo 的干燥茎，其药用历史悠久，被历代医家奉 滋阴清热之功效。现代药理研究表明，铁皮石斛具有增强
华
免疫、抗疲劳、抗氧化、降血糖、促消化等药理作用［1 － 2］。有
中
收稿日期： 2014 － 12 － 09
医
Baidu Nhomakorabea
研究表明，种植年限对铁皮石斛的多糖、生物碱、游离氨基
药
基金项目： 国家“十二五”科技支撑计划项目（ 2011BAI04B06 ） ； 浙 酸、微量元素含量会产生影响，继而伴随其免疫调节、清咽
Key words： Dendrobium officinale Kimura et Migo，cultivating years，polysaccharides，mannose，ether portion，n － butanol portion
铁皮石斛为兰科植物铁 皮 石 斛 Dendrobium officinale 为滋阴之圣品，列为“中华九大仙草”之首，具有益胃生津，
行比较研究，为铁皮石斛种植年限的确定提供参考。方法： 采用苯酚 － 硫酸法测定多糖含量，柱前衍生化 HPLC
法测定甘露糖的含量，ＲP － HPLC 结合二极管阵列检测器（ DAD） 法分析铁皮石斛正丁醇部位（ 360 nm） 及乙醚部
位（ 280 nm） 分别随不同种植年限的变化情况。结果： 铁皮石斛多糖含量随种植年限不同而变化，2 年生 ＞ 3 年生
第 33 卷 第 4 期 2015 年4 月
中华中医药学刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 4 Apr． 2 0 1 5
DOI： 10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2015． 04． 034
物，含量相对较低。铁皮石斛乙醚部位在 280 nm 下随着种植年限增加，色谱图峰强度增加明显。结论： 从多糖及
甘露糖含量考虑，以 2 年生铁皮石斛含量最高，宜以两年生为用； 而结合酚类及黄酮类成分却与此有所背离，具体
有待进一步深入研究。
关键词： 铁皮石斛； 种植年限； 多糖； 甘露糖； 乙醚部位； 正丁醇部位
典》中虽然对采收季节做出了具体规定，即每年 11 月至翌
刊
通讯作者： 吕圭源（ 1954 － ） ，男，教授，博士研究生导师，研究方向： 中药成分 分 析 及 药 效 物 质 基 础 研 究。 E-mail： lv． gy @
年 3 月，但是关于种植年限问题却没有统一的规定。此前，
263． net。
中图分类号： Ｒ284
文献标志码： A
文章编号： 1673-7717（ 2015） 04-0878-04
Variation Characteristicsof Polysaccharides and Mannose Content and Chemical Composition of n － butanol and Ether Portionfor Different Cultivating Years of D． officinale Kimura et Migo
Abstract： Objective： To compare the polysaccharidesand mannose content and chemical composition of n － butanol and ether portion in different cultivating years of D． officinale Kimura et Migo． Methods： The content of polysaccharides and mannose from Dendrobium were determined by phenol － sulfuric acid method and pre － column derivatization HPLC． Chemical composition analysis of n － butanol and ether portion for different cultivating years of D． officinale Kimura et Migo was carried on rp － HPLC equipped with DAD at 360nm and 280 nm． Ｒesults： The results showed that the content of polysaccharides and mannose was decreasing as growth years increased，among which the content of 2 years was the highest． The peak intensity and composition of flavonoids at 360 nm from n － butanol portion was variable with growth years． While the total peak intensity of ether portion at 280 nm keeps increasing along withgrowth years． Conclusion： If take the polysaccharide content and mannose content as the mainreference index of quality，it’ssuitable to harvest the D． officinale Kimura et Migo of two years old． Whereas，considering the flavonoids and total phenols，two years is possibly not a best choice，whichdeserves further investigation．
2． 3 正丁醇部位及乙醚部位 HPLC － DAD 分析 2． 3． 1 色谱条件 色谱柱 Ultimate XB C18 （ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ； 柱温为 30 ℃ ； 流速： 1 mL / min； 检测波长为 280 nm 和 360 nm； 以甲醇为流动相 A，以 0． 2% H3 PO4 溶液为流 动相 B，进行梯度洗脱，具体梯度为： 25： 75 ～ 25： 75 （ 0 ～ 5 min） ，25： 75 ～ 30： 70 （ 5 ～ 10 min） ，30： 70 ～ 40： 60 （ 10 ～ 25 min） ； 40： 60 ～ 45： 55（ 25 ～ 45 min） ； 45： 55 ～ 70： 30 （ 45 ～ 60 min） ； 流速： 1． 0 mL·min － 1 。 2． 3． 2 供试品溶液的制备 （ 1） 正丁醇部位的制备取不 同生长年限铁皮石药材烘干，粉碎，过 3 号筛。取粉末约 1． 0 g，准确称定，加水 100 mL 回流提取 1 h。滤过，滤液减
美国 Agilent 1200 高效液相（ Agilent 公司） ； 美国 Millipore Milli Q A10 型纯水仪； 瑞士 Mettler Toledo AG135 型电 子天平； 美国 PerkinElmer Lambda45 紫外分光光度计，LXJ － IIB 低速 大 容 量 多 管 离 心 机，KQ 500DE 型 超 声 波 清 洗 器。
YAN Meiqiu1 ，CHEN Suhong2 ，ZHOU Guifen1 ，PANG Min Xia1 ，CHEN Mei Xia1 ，LU Guiyuan1
（ 1． Institute of Materia Medica，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China； 2． Institute ofChinese Medicine，Wenzhou Medical University，Wenzhou 325035，Zhejiang，China）
曾有不同种植年限铁皮石斛中 多 糖 含 量 比 较 研 究 的 报
道［4］，但是目前国内外文献报道都并未涉及多糖外其它化
第 33 卷 第 4 期 2015 年4 月
中华中医药学刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 4 Apr． 2 0 1 5
参照 2010 版《中华人民共和国药典》铁皮石斛项下甘 露糖含量测定方法［1］，以盐酸氨基葡萄糖为内标，1 － 苯基 － 3 － 甲基 － 5 － 吡唑啉酮（ PMP） 为衍生化试剂，采用柱前 衍生化 HPLC 分析不同生长年限铁皮石斛中甘露糖的含量 （ n = 3） ，测定结果见表 1。铁皮石斛甘露糖含量随种植年 限的变化也呈现与多糖相同的变化趋势，甘露糖含量 2 年 生 ＞ 3 年生 ＞ 4 年生，2 ～ 4 年生铁皮石斛随种植年限增加， 甘露糖含量减少。