纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年
《中国药典》2015年版纯化水质量检验操作规程
本品为饮用水蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水，不含任何添加剂。
1、性状：本品为无色的澄明液体；无臭。
2、检查：2.1酸碱度取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
2.2 硝酸盐取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml 与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸 5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，再精密量取）0.3ml，加无硝10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于1μg NO3酸盐的4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000006%）。
2.3 亚硝酸盐取本品10ml，置纳氏管中，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）1ml与盐酸萘乙二胺溶淮（0.1→100）1ml，产生的粉红色，与标准亚硝酸盐溶液[取亚硝酸钠0.750g（按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成）]0.2ml，加无亚酸盐的水9.8ml，用50ml，摇匀，即得（每1ml相当于1ugNO2同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000002%）。
2.4氨取本品50ml，加碱性磺化汞钾试液2ml，放置15分钟；如显色，与氯化铵溶液（取氯化铵31.5mg，加无水氨水适量使溶解并稀释成1000ml）1.5ml，加无氨水48ml与碱性磺化钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深（0.00003%）。
2.5 电导率应符合规定（通则0681）2.6 总有机碳不得过0.50mg/L（通则0682）。
2.7 易氧化物取本品100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案 2015年版药典 上上2018年
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典- 年2018上上制药有限公司第2页共16页培养基适用性试验方案R2A纯化水需氧菌检查下表用于记录修订/变更主要内容及历史。
页共页第制药有限公司 3 16制药有限公司第4页共16页制药有限公司第5页共16页1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。
参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A培养基进行适用性试验。
通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。
2. 验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用R2A培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。
本验证方案采用1批按GMP要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。
3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。
验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。
3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
．制药有限公司第6页共16页3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。
3.4 验证工作小组成员表姓名部门及职务职责质量负责人/负责验证方案及报告的质量受权人批准审核验证QA组审核验证方案、质量部报告并协调工作长负责验证方案审核、实QC质量部组汇总报告及培训工作长施、具体负责验证方案起草、QC 质量部4. 验证进度计划表本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8 月至2015年 9月。
5. 验证所需要的仪器设备的确认主要检验仪器设备确认表序仪器设备型号编号生产厂家名称号电子天平1电热恒温 2水浴锅．制药有限公司第7页共16页恒温培养 3 箱力蒸汽压4 灭菌锅全生物安5 柜微生物限 6 度检查仪工作洁净7台日/检查人期：复核人/日期：6. 验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表甘油菌种控来源代码菌种名称序号批号缩写1 铜绿假单胞菌 CMCC（B）10104 中国食品药品检定研究院Pa中国食品药品检定研究院 2（枯草芽孢杆菌 B）63501CMCC Bs检查人/日期：复核人/日期：6.2试验所需的培养基检查批号是否通过培养生产厂家名称序号．制药有限公司第8页共16页检查人/日期：复核人/日期：6.3试剂检查人：/日期复核人/日期：6.4.试剂及培养基配制pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
纯化水R2A培养基适用性验证
编号：FAL -Y Z-005.1R2A培养基适用性验证报告科技发展有限公司R2A培养基适用性验证报告1•目的因2015版药典纯化水检验用培养基变更，依1105非无菌产品微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。
2•范围适用于本公司纯化水的微生物限度检查。
3. 依据中华人民共和国药典（2015年版）4. 职责权限5. 验证方法5.1R2A培养基的适用性检查5.1.1R2A培养基应进行培养基的适用性检查。
5.1.2菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
5.1.3菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品，使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后，在漩涡混合器上振荡混匀，制成1ml（相当于10〜100cfu/0.1ml）菌悬液。
5.1.4适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10〜100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30〜35C培养不少于5天，计数；5.1.5结果判定被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5〜2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
5.1.6实验前的准备5.161仪器设备确认人：日期：5.1.6.2操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
5.1.6.3器具无菌培养皿：（直径90mm 1ml注射器5.2 计数方法的验证5.2.1 当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。
纯化水R2A培养基适用性验证
编号：FAL-YZ-005.1R2A培养基适用性验证报告科技发展有限公司目录R2A培养基适用性验证报告1.目的因2015版药典纯化水检验用培养基变更,依1105 非无菌产品微生物限度检查方法,通过此次实验对所更换的R2A琼脂培养基进行适用性检查，以证明该方法及所采用的培养基适用于纯化水微生物限度检查日常检测。
2.范围适用于本公司纯化水的微生物限度检查。
3．依据中华人民共和国药典（2015年版）4. 职责权限5. 验证方法5.1R2A培养基的适用性检查5.1.1R2A培养基应进行培养基的适用性检查。
5.1.2菌种试验用菌株的传代次数不得超过5 代,试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
5.1.3菌液制备铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上振荡混匀,制成1ml(相当于10～100cfu/0.1ml)菌悬液。
5.1.4适用性检查取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各10～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养不少于5天，计数；5.1.5结果判定被检定的固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
判该培养基的适用性检查符合规定。
5.1.6实验前的准备5.1.6.1仪器设备确认人: 日期:5.1.6.2操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
5.1.6.3器具无菌培养皿：（直径90mm）1ml注射器5.2计数方法的验证5.2.1当建立纯化水微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史1・概述2.验证目的和范围3.组织及职责4.验证进度计划表5.验证所需要的仪器设备的确认确认6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的7.验证项目和验证方法7. 1试验菌株7.2菌液制备7・3培养基适用性检查7. 4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）&偏差与漏项控制9.验证报告会审第 4 页共16 页制药有限公司制药有限公司第5 页共16 页1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。
参照《中国药典》2015 版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A 培养基进行适用性试验。
通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。
2.验证目的和范围验证纯化水的需氧菌检查所用R2A 培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。
本验证方案采用1批按GMF要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。
3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。
验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。
3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。
3.4验证工作小组成员表4.验证进度计划表本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8月至2015年9月。
5.验证所需要的仪器设备的确认主要检验仪器设备确认表检查人/ 日期复核人/日期：6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表检查人/ 日期复核人/日期：6.2试验所需的培养基检查检查人/ 日期复核人/日期：6.3试剂检查人/ 日期复核人/日期：64试剂及培养基配制pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
R2A培养基适用性检查方案
前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 1 of 9题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 2 of 9 批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 3 of 9目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 4 of 91.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。
2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。
3.验证项目R2A培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 5 of 94.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
R2A培养基适用性检查方案
前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 1 of 9题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 2 of 9 批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 3 of 9目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 4 of 91.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。
2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。
3.验证项目R2A培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 5 of 94.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
纯化水需氧菌总数计数方法的验证2015
目录一、引言1、概述2、验证的目的二、验证方法合格标准三、主要材料确认1、仪器设备确认2、辅助材料确认3、人员确认4、商品培养基及灭菌培养基确认5、菌种及菌液的制备四、样品制备1、稀释液2、供试液制备3、操作方法五、方法验证1、需氧菌总数的计数方法验证2、计算菌回收率公式六、验证结果及评价七、再验证周期八、验证结论批准一、引言1、概述：根据《中国药典》2015年版三部通则“1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（以下简称《药典》）的要求，对内控标准中有“微生物限度”检查项的产品进行该项验证。
根据《中国药典》2015年版三部纯化水进行方法学确认。
2、验证目的：确保药品微生物限度检查实验的准确性，在建立药品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌总数计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该样品的需氧菌总数的测定。
二、验证方法合格标准1.前提条件：培养基适用性实验应符合规定，即：被检R2A培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应为0.5~2，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
2.计数方法适用性试验：在3次独立的平行试验中，若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值与菌液对照组的平均菌落数的比值）均在0.5～2范围内，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数。
三、主要材料确认1、仪器、设备确认检查结果：检查人：复核人：日期：2、辅助材料确认2.1移液器、接种环、酒精灯、记号笔、酒精棉球、试管架、试管、玻璃平皿、止血钳等2.2需灭菌物品见《微生物限度检查法验证记录》2.3一次性无菌用具见下表检查结果：检查人：复核人：日期：3、人员确认化验员经设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，考核合格后上岗。
4、商品培养基及灭菌培养基4.1 所用培养基均不得有结块、吸潮、异味、颜色发生改变等现象。
培养基检查结果，如下检查结果：检查人：复核人：日期：4.2已灭菌培养基的检查结果及结论见《微生物限度检查法验证记录》。
R2A琼脂培养基适用性检查方案
R2A琼脂培养基适用性检查方案文件编号：VP-QC-2015-05起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述12 验证目的及范围13 验证小组人员组成及职责14 验证依据25 验证前准备26 验证的实施27 偏差处理58 验证数据及评估59验证报告及评审510 再验证及周期511 验证文件及归档512 附件51 验证目的及范围2015版《中华人民共和国药典》中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为R2A 琼脂培养基。
为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性，需对该R2A琼脂培养基进行适用性检查实验。
2 验证方法照2015版药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。
3.验证小组人员组成及职责：验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。
验证小组组成及职责列表4 验证接受标准被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
5.验证前准备验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。
培训人员记录见附件1。
将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。
仪器设备DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器、DK型电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱（30～35℃）、JA2003N电子天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱（20～25℃）、YJ-875SDB型净化操作台。
稀释剂：PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液计数用培养基胰酪大豆胨琼脂培养基验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]灭菌前调节PH溶液：10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。
纯化水需氧菌检查标准操作规程 (2015年中国药典)
GMP文件纯化水需氧菌检查标准操作规程目的：建立需氧菌检查法的标准操作规程，保证正确操作。
范围：本标准适用于纯化水的需氧菌检查。
依据：《中国药典》2015年版二部。
职责：QC检验员对本标准的实施负责。
正文：1.简述微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检査。
2.环境要求微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
3.仪器生物安全柜、洁净工作台、微生物限度检查仪、恒温培养箱、电热恒温水浴锅。
4.设备：滤杯、高压灭菌锅、剪刀、镊子、75％酒精棉球。
5.供试品：取纯化水10 mL。
备用。
6.实验前准备6.1. 培养基、冲洗液制备方法6.1.1. R2A琼脂培养基：取本品18.2g，加1L纯化水，加热溶解，分装，121 ℃湿热灭菌20 min。
6.1.2. pH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液：pH 7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液干粉16.09 g，加水1000 ml，微温溶解，滤清，121 ℃湿热灭菌20 min。
6.2.用具的洗刷6.2.1.玻璃器皿：如试管、三角瓶等用清洁液浸泡，用流水洗涤，再用纯化水洗涤4～5次，倒置，晾干。
试管、三角瓶等使用过后，应先消毒倒出内容物后，再清洗晾干。
6.2.2.剪刀、镊子用水及去污粉洗涤，用水冲洗干净，再用纯化水洗涤3次。
6.2.3.洁净服、裤、帽子、口罩等用水洗涤洁净后，晾干。
6.3. 用具的包扎及灭菌6.3.1.洗涤洁净的注射器及适配针头各部件与剪刀、镊子一并入垫有纱布的铝盒内，一层层放好，盖上纱布，将铝盒盖好，用牛皮纸包扎。
6.3.2.试管口塞上胶塞、三角瓶等用8层纱布将瓶口扎紧。
纯化水2015年版药典检验方法
纯化水2015年版药典检验方法纯化水2015年版药典检验方法纯化水检验规程1目的规范纯化水的检验操作，保证纯化水质量。
2适用范围适用于本公司车间、化验室用纯化水的检验。
3职责质量部、化验室对本规程的实施负责。
4程序4.1性状本品为无色的澄清液体;无臭。
4.2酸碱度4.2.1仪器和试剂a玻璃烧杯(50ml);b甲基红指示液:取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得;c溴麝香草酚蓝指示液:取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得;d 0.05mol/L氢氧化钠溶液:精密称取0.2g氢氧化钠，加水溶解，最后定容到100ml，即得。
4.2.2检验方法取本品10ml，加入甲基红指示液2滴，不得显红色;另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
4.3硝酸盐4.3.1仪器和试剂a试管;b氯化钾(10%):取氯化钾10g，加无氨水使溶解至100ml，即得;c二苯胺硫酸溶液(0.1%):取二苯胺0.1g，加浓硫酸100ml使溶解，摇匀即得;该试剂最好做到临用现配。
d硫酸:分析纯;e标准硝酸盐溶液:取硝酸钾0.163g，加无氨水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加无氨水稀释成100ml，再精密量取10ml，加无氨水稀释成100ml，摇匀，即得(每1ml相当于1μg)。
NO 34.3.2检验方法取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml 与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管于50?水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液0.3ml，加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0. 000 006%)。
4.4亚硝酸盐4.4.1仪器和试剂a纳氏管;b对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液(1?100):取对氨基苯磺酰胺1g，用稀盐酸溶解定容至100ml，即得;c盐酸萘乙二胺溶液(0.1?100):取盐酸萘乙二胺0.1g，加水溶解，定容至100ml，即得;d无硝酸盐水(无氨水):取纯化水1000ml，加稀硫酸1ml与高锰酸钾试液1ml，蒸馏，即得(检查:取50ml制备好的无氨水，加入1ml碱性碘化汞钾试液，不得显色，即为符合规定的无氨水);e标准亚硝酸盐溶液:取亚硝酸钠0. 750g(按干燥品计算)，加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50ml,摇匀，即得(每lml相当于1μg叫)NO; 2d稀盐酸(9.5%,10.5%):取盐酸234ml，加水稀释至1000ml，摇匀即得。
R2A培养基适用性
前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 1 of 9题目计数培养基适用性验证方案方案号版本号01前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 2 of 9 批准页起草人审核人签字日期QC经理批准人签字日期QA经理前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 3 of 9目录1.验证目的2. 参照标准3. 验证项目4. 验证人员及职责5. 判定标准6. 实验材料7. 菌液制备8. 菌液计数9. 适用性检查10.阴性对照附件1.检测记录前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 4 of 91.验证目的纯化水微生物计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认R2A培养基适合纯化水中总需氧菌总数测定。
2.参照标准2015版中国药典二部1105微生物限度检查法。
3.验证项目R2A培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:小组人员职务姓名所在部门组长质量部组员质量部组员质量部4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 5 of 9前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 6 of 9前版本：N/A JSALPHARM R2A培养基Page 7 of 9菌落计数结果（cfu∕ml）10-5稀释10-6稀释10-7稀释试验次数1 2 平均值 1 2 平均值 1 2 平均值枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌9.适用性检查分别取铜绿假单胞菌与枯草芽孢杆菌菌悬液1ml分别注入无菌平皿中，立即倾注R2A琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，置30～35℃培养不不少于5天；菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表菌落计数结果（cfu∕ml）10-5稀释10-6稀释10-7稀释试验次数1 2 平均值 1 2 平均值 1 2 平均值枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌10.阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。
纯化水《中国药典》2015年版 第二部
中国药典2015年版溶液的澄清度与颜色取本品，加水制成每lml中约含阿魏酸钠20m g的溶液，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号池度标准液(通则0902第一法）比较，不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色3号标准比色液（通则0901第一法）比较，不得更深。
有关物质避光操作。
取本品，加流动相溶解并稀释制成每l m l中约含0. 7m g的溶液，作为供试品溶液；精密量取lm l，置200m l量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勻，作为对照溶液。
照阿魏酸钠有关物质项下的方法测定。
供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积(0.5%)。
水分取本品，照水分测定法（通则0832第一法1)测定，含水分应为13.0%〜16.0%(供无菌粉末用）或应不超过3.0%(供无菌冻干品用）。
热原取本品，加灭菌注射用水制成每l m l中含阿魏酸钠5m g的溶液，依法检查（通则1142)，剂量按家兔体重每l k g 缓慢注射3m l，应符合规定。
无菌照阿魏酸钠项下的方法检査，应符合规定。
其他应符合注射剂项下有关的各项规定(通则0102)。
【含置测定】避光操作。
取装量差异项下的内容物约0.15g，精密称定，加冰醋酸20m l使阿魏酸钠溶解，照阿魏酸钠项下的方法，自“加醋酐3m l”起，依法测定。
每l m l高氣酸滴定液(0.lm o l/L)相当于25.22mg的C10H9N a04•2H20。
【类别】同阿魏酸钠。
【规格】（1)0. lg(2)0. 3g【贮藏】遮光，密封保存。
纯化水ChunhuashuiPurified WaterH2018.02本品为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水，不含任何添加剂。
【性状】本品为无色的澄清液体；无臭。
【检査】酸碱度取本品10m l,加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10m l,加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
硝酸盐取本品5m l置试管中，于冰浴中冷却，加10%氣化钾溶液0.4m l与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1m l，摇匀，缓缓滴加硫酸5m l,摇勻，将试管于50T：水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100m l，摇匀，精密量取l m l,加水稀释成100m l,再精密量取10m l,加水稀释成100m l，摇匀，即得（每l m l相当于1吨N03)]0.3m l,加无硝酸盐的水4.7m l,用同一方法处理后纯化水的颜色比较，不得更深(0.000006%)。
R2A琼脂培养基适用性检查方案
4 验证接受标准 4.1 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比 值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致； 4.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
5.验证前准备 5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证 实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 5.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以 确保其对试验的结果没有影响。 5.3 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。 5.4 相关文件
9.2 验证小组组织专业人员对验证报告进行评审。
9.3 QA对验证报告给出结论，验证合格发放验证合格证。
10.再验证及周期
10.1纯化水微生物限度检查用的A2R琼脂培养基的适用性检查验证，其
再验证周期一般为三年，以证实确认培养基的可靠性。
10.2当药典中纯化水微生物限度检查法发生变更时，需进行再验证；
10-6稀释
10-7稀释
12312312 3
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★ 验证合格证书
验证方案名称： 无菌检查用培养基适用性检查验证方案 验证方案编号： VP-QC-2015-02 验证报告名称： 无菌检查用培养基适用性检查验证报告(NO. ) 验证报告编号： VR-QC-2015-02
R2A琼脂培养基适用性检查方案
文件编号：VP-QC-2015-05
起 草 人： 审 核 人： 批 准 人： 批准日期： 年 月 日
1 概述1 2 验证目的及范围1 3 验证小组人员组成及职责1 4 验证依据2 5 验证前准备2 6 验证的实施2 7 偏差处理5 8 验证数据及评估5 9验证报告及评审5 10 再验证及周期5 11 验证文件及归档5 12 附件5
纯化水标准(2015版中国药典)
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载纯化水标准(2015版中国药典)地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容纯化水【试剂】10%氯化钾：取10g氯化钾溶加100ml水使溶解，即得。
稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀释至1000ml，即得。
应含H2SO4 9.5%～10.5%甲基红指示剂：取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液5.3ml使溶解，再加水稀释至100ml，即得。
溴麝香草酚蓝指示剂：取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2，ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。
0.1%二苯胺硫酸溶液：取0.1g二苯胺，加入100ml硫酸（98%）使之溶解，即得。
稀盐酸：取盐酸243ml，加水稀释至1000ml，即得。
应含HCl 9.5%～10.5%高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）：取高锰酸钾3.2g，加水1000ml，煮沸15分钟，密塞，静置2天以上，用垂熔玻璃滤器过滤，摇匀。
高锰酸钾滴定液标定：准确称取于摄氏110度烘过两小时的草酸钠0.2g,置于烧杯中，加5%硫酸120ml,加热至80-90摄氏度，用高锰酸钾标准溶液滴至微红色（在1分钟内不消失）即为终点。
c=5m/v*0.0670式中 c-高锰酸钾标准溶液的浓度（mol/L）;m-称取草酸钠重量（g）;v-滴定时消耗高锰酸钾溶液体积（ml）;0.0670-Na2C2O4（草酸分子量）/2*1/1000。
本品为饮用水经蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得的制药用水，不含任何添加剂。
【性状】本品为无色的澄清液体；无臭。
【检査】酸碱度取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。
纯化水需氧菌总数计数用培养基适用性检查验证方案
纯化⽔需氧菌总数计数⽤培养基适⽤性检查验证⽅案1. 概述:培养基是微⽣物试验的基础，直接影响微⽣物试验结果。
适宜的培养基制备法、贮藏条件和质量控制是提供优质培养基的保证。
供试品微⽣物限度检查中所使⽤的培养基应进⾏适⽤性检查。
2. 验证⽬的：本次验证的⽬的是确认纯化⽔微⽣物限度检查中需氧菌总数计数⽤⽤的R2A 琼脂培养基的质量，以及其制备程序、保存条件等是否满⾜微⽣物限度检查⽤要求。
3. 验证依据：《中国药典》2015年版四部“⾮⽆菌产品微⽣物限度检查：微⽣物计数法”、“《中国药典》2015年版⼆部纯化⽔质量标准”。
4. 验证项⽬：R2A琼脂培养基的适⽤性检查。
5. 适⽤围：成品培养基、由脱⽔培养基或按处配制的培养基均应进⾏培养基适⽤性检查。
6. 验证期：除另有规定外，在实验室中，若采⽤已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同⼀批脱⽔培养基的适⽤性检查试验可以只进⾏⼀次。
如果培养基的制备过程未经验证，那么每⼀灭菌批培养基均要进⾏适⽤性检查试验。
7.验证⼩组⼈员及职责:7.2验证⼈员职责及要求7.2.1按验证案及相关⽂件实施验证。
7.2.2认真观察并做好验证原始记录。
7.2.3对实施验证的结果负责。
7.3验证中各部门的职责7.3.1验证领导组职责731.1制订验证总计划，负责全公司验证⼯作的管理7.3.1.2确定验证项⽬及验证项⽬负责⼈。
731.3负责验证案的批准⼯作。
731.4负责验证资料及结果的审核⼯作。
7.3.1.5负责验证报告的批准⼯作。
7.3.2验证项⽬⼩组职责7.3.2.1负责验证案的起草⼯作。
7.322参与验证案的讨论、确认⼯作。
7.3.2.3负责验证案的实施。
7.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告⼯作。
7.3.2.5参与验证结果的评价⼯作。
7.3.3质量部职责7.3.3.1负责公司验证⽇常管理⼯作。
7.3.3.2负责验证案的审核⼯作。
7.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验⼯作。
2015版纯化水微生物限度检查记录
培养温度
放入培养时间
取出培养时间
累计培养时间
年月日时
年月日时
h
培养
时间/取样点编号 Nhomakorabea阴性对照
24h
1
□长菌
□未长菌
2
48h
1
□长菌
□未长菌
2
72h
1
□长菌
□未长菌
2
菌数报告
CFU/ml
/
标准规定
需氧菌总数每1ml不得过100CFU。
项目结论
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
纯化水微生物限度检查记录
检验日期
年月日
报告日期
年月日
检验依据
《中国药典》2015年版二部、四部通则微生物检查法
需氧菌总数检查：取纯化水50ml，用薄膜过滤器（0.45±0.02um，50MM直径）过滤，减压抽干。取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30～35℃培养3天，计数。
需氧菌阴性对照：取50ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
□符合规定
□不符合规定
/
检验人：复核人：
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纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案--2015年版药典-上上2018年
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案
下表用于记录修订/变更主要内容及历史
1・概述
2.验证目的和范围
3.组织及职责
4.验证进度计划表
5.验证所需要的仪器设备的确认确认
6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的
7.验证项目和验证方法7. 1试验菌株7.
2菌液制备7・3培养基适用性检查
7. 4计数方法适用性试验（薄膜过滤法）
&偏差与漏项控制
9.验证报告会审
第 4 页共16 页制药有限公司
制药有限公司第5 页共16 页
1. 概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。
参照《中国药典》2015 版四部附录1105：微生物计数法的规定，须对纯化水检查所用的R2A 培养基进行适用性试验。
通过适用性试验以确认所采用的培养基适用于纯化水的需氧菌检查。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，验证
R2A琼脂培养基是否适用于本品的需氧菌总数检查。
2.验证目的和范围
验证纯化水的需氧菌检查所用R2A 培养基的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。
本验证方案采用1批按GMF要求组织生产的纯化水，并进行R2A培养基适用性检查。
3.组织及职责
3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准
验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。
验证方案实施完成后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。
3.2验证方案的培训
验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。
3.3验证方案实施过程中的变更和偏差
验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。
3.4验证工作小组成员表
4.验证进度计划表
本次R2A培养基的适用性试验的计划安排时间是2015年8月至2015年9月。
5.验证所需要的仪器设备的确认
主要检验仪器设备确认表
检查人/ 日期复核人/日期：
6.验证所需要的菌种、培养基、试剂、检验样品的确认6.1.试验菌种检查表
检查人/ 日期复核人/日期：
6.2试验所需的培养基检查
检查人/ 日期复核人/日期：
6.3试剂
检查人/ 日期
复核人/日期：
64试剂及培养基配制
pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
加水定容1000mL 微温溶解，滤清，分装至蓝盖试剂瓶，121C 湿热灭菌
20min。
胰酪大豆胨液体培养基：取胰酪大豆胨液体培养基
29.8g ，加1L 纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121 C湿热灭菌20min。
胰酪大豆胨琼脂培养基：取本品40g,加1L纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121 C湿热灭菌20min。
R2A琼脂对照培养基：取本品4.55g ，加300 mL 纯化水，加热助溶，分装至锥形瓶，121C湿热灭菌20min。
R2A琼脂培养基：取本品18.2g ，加1L 纯化水，加热助溶，分装至蓝盖试剂瓶，121C湿热灭菌20min。
7.验证项目和验证方法
7.1试验菌种
R2A 培养基的适用性试验所用的菌株为本实验
室-80 C冰箱保存的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的甘油菌，均为第 2 代。
7.2菌液制备
7.2.1.稀释液的配制
pH 7.0 无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液：称取pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g 。
加纯化水定容1000mL 微温溶解，滤清，分装至1000 mL蓝盖试剂瓶中，121 C 湿热灭菌20min。
7.2.2.菌液的制备
从-80 C冰箱取出铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌
的第2代菌液，分别接种至10ml胰酪大豆胨液体培养基
中，30〜35C培养18〜24小时。
同时分别划线接种至胰酪大豆胨琼脂培养基中，30〜35C培养
18〜24小时。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2〜8C,可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8 C,在验证过的贮存期内使用。
7.3.培养基适用性检查
取铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各不大于100 cfu的菌液1ml分别注入90mm无菌平皿中，注入15-20ml 温度不超过45C的供试R2A琼脂培养基，混匀，凝固，每种试验菌各稀释度制备两个平板，置30-35C倒置培养3天，计数；同时，用R2A琼脂对照培养基替代被检R2A琼脂培养基进行上述试验。
回收率=供试培养基组/对照培养组X100%
计数培养基适用性检查验证记录
试验时间 ____ 年____ 月____ 日
成时间年月日
验证菌株
铜绿假单
胞菌
（培养3
复核人 _________________________ 试验
人____________________ .
7.4接受标准
可接受标准为各株试验菌的回收率应在0.5〜2
范围内。
8.偏差与漏项控制：
微生物限度检查方法验证过程中存在和发现的任何偏差与漏项，都应进行详细的记录，并应按公司GMP文件《偏差处理规程》进行调查与处理。
偏差调查与处理的报告和支持文件，应作为此确认方案的附录部分。
偏差和漏项记录表
偏差和漏项：处理过程: 检查人/ 日期复核人/日期：—
9.验证报告会审
验证报告会审表
验证报告
2015 年8 月29 日至年月日，验证小组根据批准的微生物限度检查方法验证文件对培养基适用性检查（需氧菌）进行了相关的一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：
1、验证方案在实施过程中未做修改。
2、验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在允许范围内。
3、验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。
4、验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入使用。
5、片组分或检验条件改变时须重新验证。
验证小组：
年月日试验报告审批表
验证委员会意见:
批准人:
验证证书
验证证书编号：
验证名称：
有效期：_____________________
上述方法已按验证方案进行验证，各项验证结果符合标准要求，批准此R2A琼脂培养基可进行本品的需氧菌检查。
特发此证。
验证总负责人：
年月日
备注:。