实验七dna的琼脂糖凝胶电泳
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和操作步骤DNA的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分析DNA 的大小和纯度，以及进行DNA分子的分离和纯化。
凝胶电泳实验可以帮助我们确定DNA样本的大小和获得纯化的DNA片段供进一步研究使用。
下面是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的原理和操作步骤。
【原理】DNA琼脂糖凝胶电泳是根据DNA分子在电场中的不同迁移速率来分离大小不同的DNA片段。
琼脂糖凝胶是一种凝胶状物质，其孔隙大小能够将DNA分子限制在一定范围内，较大的DNA分子迁移速率较慢，而较小的DNA分子迁移速率较快。
琼脂糖凝胶通常是在平均浓度为1%至2%之间的范围内制备，以便在不同大小的DNA分子之间提供适当的分辨率。
实验中，DNA样品通过切割酶或PCR等方法获得，样品经过核酸电泳缓冲液稀释，并在琼脂糖凝胶板上进行电泳。
凝胶板两侧连接电源，DNA 的带电粒子将在电场的作用下从负极迁移到正极，迁移过程中形成DNA的“条带”，条带的位置和长度反映了DNA的大小。
通常，DNA条带由荧光染料或核酸染料标记，以便在电泳结束后进行可视化。
【操作步骤】以下是DNA琼脂糖凝胶电泳实验的一般操作步骤：1.制备琼脂糖凝胶板：a.准备琼脂糖粉末和核酸电泳缓冲液（通常为TAE或TBE缓冲液）。
b.按照说明书将琼脂糖粉末溶解于核酸电泳缓冲液中。
c.将溶液加热至沸腾并搅拌，使琼脂糖完全溶解。
d.将溶液倒入预先准备好的电泳仓中，插入梳子或制备好的孔板，使其凝固。
2.样品制备：a.提取DNA样品并测定其浓度。
b. 将DNA样品稀释到适当浓度，通常为10-50 ng/μL。
c. 添加适当的加载缓冲液，通常是一些染料和甘胺酸（glycine）或其他添加剂。
3.DNA加载和电泳：a.打开琼脂糖凝胶仓盖，将DNA样品负载于凝胶孔内。
b.将DNA负载区域和样品标注在电泳仓中，以便在电泳结束后可以准确识别DNA带。
c.关闭盖子，将电泳仓放入电泳设备中。
实验技术 DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定(修改后)SDS-PAGE
0.3 0.5 0.6 0.7 1.0 1.2 1.5 2.0
5-60 1-30 1-20 0.8-12 0.5-10 0.4-6 0.2-4 0.1-3
操作步骤
♦琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，核酸染料 琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却， ♦凝胶板的制备：加梳子，倒胶 凝胶板的制备：加梳子， ♦样品的制备：样品 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 体积溴酚蓝 ♦加样：加样端为负极（黑） 加样：加样端为负极（ ♦电泳：5V/cm 电泳： ♦观察：紫外灯下观察，照相 观察：紫外灯下观察，
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电 分子在琼脂糖凝胶中泳动时， 分子在琼脂糖凝胶中泳动时 荷效应与分子筛效应。不同的 荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分 ， 子量大小及构型不同， 子量大小及构型不同，电泳时的泳动率 就不同， 就不同，从而分出不同的区带 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分 ， 琼脂糖凝胶电泳法分离 子筛效应， 子筛效应，迁移速度与分子量的对数值 成反比关系
开环 线性 超螺旋
质粒DNA的3种形式泳动速度 超螺旋 线性 开环 的 种形式泳动速度 超螺旋>线性 种形式泳动速度:超螺旋 线性>开环 质粒
分离不同大小DNA 分离不同大小DNA片段的 DNA片段的 合适琼脂糖凝胶浓度
琼脂糖含（ ） 琼脂糖含（%） DNA片段的有效分离范围 片段的有效分离范围(kb) 片段的有效分离范围
主要实验器材
电泳仪
缓冲液 琼脂糖
凝胶槽
梳子 电泳槽
取液器 溴酚蓝
铺
胶
凝胶凝固后取出梳子
加缓冲液
准备样品
点
样
电
泳
注意观察溴酚蓝染液的迁移
紫外灯下观察电泳结果
DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理和方法步骤
取出凝胶，放在含有溴化乙锭的染色液中染色30min，即可在254nm的紫外灯下观察，有橙红色荧光条带的位置，即为DNA条带，或在紫外灯下照相记录电泳图谱。溴化乙锭是致癌剂，操作时要小心，必须戴手套。
附：
⑴5×TBE（tris-硼酸及EDTA）缓冲液的配制(1000ml)：
Tris 54g，硼酸，LEDTA20ml，将pH调到，定容至1000ml，4℃冰箱保存，用时稀释10倍。
一、实验目的
学习和掌握琼脂糖电泳法鉴定DNA的原理和方法。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。DNA在碱性条件下（的缓冲液）带负电荷，在电场中通过凝胶介质向正极移动，不同DNA分子片段由于分子和构型不同，在电场中的泳动速率液不同。溴化乙锭（EB）可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物，经紫外线照射后，可分出不同的区带，达到分离、鉴定分子量，筛选重组子的目的。
2、琼脂糖凝胶的制备
称取琼脂糖溶解在电泳缓冲液中，（按的琼脂糖含量，1-25kb大小的DNA用1%的凝胶，20-100kb的DNA用%的凝胶，200-2000bp的DNA用%的凝胶）置微波炉或沸水浴中加热至完全溶化（不要加热至沸腾），取出摇匀。
3、灌胶
将冷却到60℃的琼脂糖溶液轻轻倒入电泳槽水平板上。
称取，，先用800ml双蒸水，加热搅拌溶解后，再用盐酸调pH至（大约加入盐酸20ml），然后定容至1000ml。
⑸100倍电泳缓冲液的配制：
4mol/LTris-HCl（pH8..0），2mol/L醋酸钠，200mmol/LEDTA称取，无水乙酸钠，，先用400ml双蒸水加热搅拌溶解后，再用冰乙酸调pH至（大约加入冰乙酸50ml），然后定容至500ml。用时稀释100倍。
dna琼脂糖凝胶电泳实验报告
dna琼脂糖凝胶电泳实验报告DNA琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分子生物学实验技术，用于分离和分析DNA 分子。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，对DNA分子进行分离和鉴定，以便更好地了解DNA的结构和功能。
实验材料和方法：实验所需的材料包括琼脂糖凝胶、DNA标准品、DNA样品、缓冲液和电泳仪等。
首先，我们制备了琼脂糖凝胶，然后将DNA标准品和待测DNA样品与DNA加载缓冲液混合。
接下来，将混合液注入琼脂糖凝胶槽中，并进行电泳。
实验结果：经过电泳后，我们观察到琼脂糖凝胶上出现了一系列DNA条带。
根据标准品的条带迁移距离，我们可以推断出待测DNA样品的分子大小。
通过比较待测样品与标准品的条带迁移距离，我们可以进一步确定待测样品中的DNA分子的大小。
讨论：琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA分子大小的分离技术。
在琼脂糖凝胶中，DNA 分子会受到凝胶孔隙的阻碍，较大的DNA分子迁移速度较慢，而较小的DNA分子则迁移速度较快。
通过测量DNA分子的迁移距离，我们可以推断出其分子大小。
在实验中，我们使用了DNA标准品作为参照物，通过标准品的迁移距离，我们可以建立一个标准曲线，从而对待测样品中的DNA分子大小进行估计。
这种方法可以应用于DNA样品的定性和定量分析。
需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳实验的结果受到多种因素的影响，如琼脂糖凝胶浓度、电场强度和电泳时间等。
因此，在进行实验时，我们需要控制这些因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。
结论：通过DNA琼脂糖凝胶电泳实验，我们成功地分离和鉴定了DNA分子。
这项实验为我们进一步研究DNA的结构和功能提供了基础。
同时，琼脂糖凝胶电泳技术也广泛应用于生物医学研究、法医学和遗传学等领域，为科学研究和医学诊断提供了重要的工具和方法。
总结：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离和鉴定技术。
通过电泳实验，我们可以分离不同大小的DNA分子，并通过测量其迁移距离来推断其分子大小。
实验七---DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验七---DNA的琼脂糖凝胶电泳实验七DNA的琼脂糖凝胶电泳（4学时）实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本实验学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。
实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA核酸分子是两性解离分子，pH3.5是碱基上的氨基解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，所以分子带正电，在电场中向负极泳动；而pH8.0-8.3时，碱基几乎不解离，而磷酸基团解离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极泳动。
不同的核酸分子的电荷密度大致相同，因此对泳动速度影响不大。
在中性或碱性时，单链DNA与等长的双链DNA的泳动率大致相同。
影响核酸分子泳动率的因素主要是：1、样品的物理性状即分子的大小、电荷数、颗粒形状和空间构型。
一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大。
但是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显。
对线形分子来说，分子量的常用对数与泳动率成反比，用此标准样品电泳并测定其泳动率，然后进行DNA分子长度（bp）的负对数——泳动距离作标准曲线图，可以用于测定未知分子的长度大小。
DNA分子的空间构型对泳动率的影响很大，比如质粒分子，泳动率的大小顺序为：cDNA＞IDNA＞ocDNA但是由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭等的影响，会出现相反的情况。
实验七 质粒DNA的电泳检测
基因工程实验
（4）电场强度
电场强度偏高时电泳分离的线性范围会变窄，电 压过高时也会由于电泳中产生的大量热量导致 DNA片段的降解。
（5）电泳缓冲液 目前有3种缓冲液适用于天然双链DNA的电泳： TAE、TBE和TPE。 （6）溴化乙锭 简称EB，电泳中的染色剂，具有扁平结构，能嵌 入到DNA碱基对间.
基因工程实验
DNA电泳上样缓冲液
主要作用如下：
• 防止电泳过程中DNA被降解，一般上样缓冲液中 含10mmol/l的EDTA。
• 增加样品密度以保证DNA沉入加样孔内，一般上 样缓冲液中加入一定浓度的甘油或蔗糖，增加样 品的比重。
• 指示剂监测电泳的行进过程。
三、操作步骤
基因工程实验
1．称取0.5g琼脂糖粉，放入三角瓶，加入50ml TAE电泳缓冲液(1)，放入微波炉中烧开
13．撰写实验报告。
基因工程实验
四、作业
1.泳道中的质粒DNA有几条带？为什么？ 2.溴酚蓝的迁移率相当于多少bp的DNA? 3.影响本实验结果的因素有哪些？
基因工程实验
谢 谢！
二、实验原理
基因工程实验
根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳 主要分两类： • 聚丙烯酰胺凝胶电泳 • 琼脂糖凝胶电泳
基因工程实验
DNA电泳影响因素 （1）DNA分子大小 DNA分子越大在胶中的摩擦阻力就越大，泳动也 越慢，迁移速率与线状DNA分子质量的对数值成 反比。 （2）DNA分子构型 超螺旋最快、线状分子次之，开环分子最慢。 （3）不同的胶浓度 对于同种DNA分子胶浓度越高，电泳速率越慢。
不要把胶溶液溢到外面。在桌面上静置10～
20min待胶完全凝固。（剩下的胶溶液封口后留 待以后再熔化使用）。 5．在水平电泳槽中加满1TAE电泳缓冲液。根据 电泳槽的长度把电泳仪的电压调至170V(10V/cm)，
实验 DNA的琼脂糖凝胶电泳 紫外吸收法测定核酸的含量
实验DNA的琼脂糖凝胶电泳紫外吸收法测定核酸的含量【实验预习】–凝胶电泳分为哪几种？–在常规的电泳缓冲液中（pH 约8.5），核酸分子带——电，在电场中向——极移动？–什么是琼脂糖，它随温度有怎样的变化？–影响核酸分子的迁移率的因素有哪些？–核酸在——有特征吸收峰？蛋白质在——有特征吸收峰？【实验目的】●1.掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理及其操作；●2.学习利用琼脂糖凝胶电泳方法测定DNA片段大小。
●3.学习紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
【实验原理】1. 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，基本结构是1,3连结的β-D-半乳呋喃糖和1,4连结的3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖,在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，凝胶上具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度，这是它具有多种用途的主要特征和基础可以形成。
2. DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。
3.琼脂糖凝胶电泳对核酸的分离作用主要是依据它们的相对分子量质量及分子构型，同时与凝胶的浓度也有密切关系：1)核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系：（1）DNA分子的大小在凝胶中，DNA 片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。
但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。
此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值;（2）琼脂脂糖的浓度如下表所示，不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖浓度(%) 线型DNA分子的分离范围(Kb)0.3 5～60 0.9 0.5～70.6 1～20 1.2 0.9～60.7 0.8～10 1.5 0.2～30.9 0.5～7 12.0 0.1～22).核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
实验目的掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的原理和方法。
一、实验原理DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。
DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动，除了电荷效应以外，还有分子筛效应。
由于DNA分子可片段的相对分子质量不同，移动速度也不同，所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分离。
0.6~1.4%琼脂糖凝胶适用于3*106~11*106相对分子质量的DNA分子或片段的分离，所需DNA样品量为0.5~1.0ug。
琼脂糖凝胶电泳分离后的DNA可用溴化乙啶染色。
溴化乙啶分子可插入DNA双螺旋结构的两个碱基之间，形成一种荧光络合物。
在254nm波长紫外光照射下，呈现橙黄色的荧光。
用溴化乙啶检测DNA，可检出10-9g以上的DNA含量。
二、试剂与器材1、6×上样缓冲液：含0.25％溴酚蓝、0.25％二甲苯青、30％甘油的TBE 缓冲液。
2、5×TBE电泳缓冲液（0.45mol/L Tris-硼酸、0.01mol/L EDTA,PK=8.3):：称取54gTris碱，27.5g硼酸，3.7g EDTA-Na2溶于800ml蒸馏水中，定容至1000ml 使用时用蒸馏水稀释10倍成为0.5×TBE电泳缓冲液。
3丶琼脂糖4、溴化乙锭（EB）10mg/mL:取EB 0.10g，完全溶解于10mL水中，避免温室保存。
5丶DNA分子量标准品（DNA Marker)。
6丶DNA样品液三、操作方法琼脂糖胶液的制备：称取0.6g 琼脂糖，置于锥形瓶中，加入60ml0.5×TBE电泳缓冲液，置于微波炉或水浴中加热融化，取出摇匀即为1％琼脂糖凝胶液。
待凝胶液冷却却至60℃后加入溴化乙锭3μL，使其终浓度为0.5μg/mL。
胶板的制备在制胶槽内插入样品梳，将凝胶液倒入制胶槽中。
待胶凝固后，取出梳子，讲内槽放入电泳槽内，加入0.5×TBE电泳缓冲液至电泳槽中，使其没过凝胶表面1~2mm，排除加样孔中的气泡。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳的应用
用于分子量较大的样品，如大分子核酸、 用于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等的电泳分 分子量较大的样品 现广泛应用于核酸的研究中。 离。现广泛应用于核酸的研究中。 按相对分子质量大小分离DNA 的凝胶电泳技术，是分析 的凝胶电泳技术， 按相对分子质量大小分离 鉴定基因工程重组DNA 分子的重要实验手段。 基因工程重组 分子的重要实验手段。 鉴定基因工程重组 是现在通用的许多分子生物学研究方法，如DNA核苷酸 是现在通用的许多分子生物学研究方法， 分子生物学研究方法 核苷酸 序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础， 序列分析、限制性内切酶片段分析等的技术基础，受到科 学界的高度重视。 学界的高度重视。
DNA在电场中的迁移率的影响因素 DNA在电场中的迁移率的影响因素
1）DNA的分子大小、形状、构象。 ） 的分子大小、 的分子大小 形状、构象。 2）琼脂糖的浓度。 ）琼脂糖的浓度。 3）所加电压。 ）所加电压。 4）嵌入的染料。 ）嵌入的染料。 5）电泳缓冲液的组成。 ）电泳缓冲液的组成。
琼脂糖凝胶电泳分离后的DNA可用溴化乙啶（EB） 可用溴化乙啶 琼脂糖凝胶电泳分离后的 可用溴化乙啶（ ） 染色。 染色。 溴化乙啶分子可插入DNA双螺旋结构的两个碱基之 双螺旋结构的两个碱基之 溴化乙啶分子可插入 形成一种荧光络合物。 间， 形成一种荧光络合物。 在 254nm波长紫外光照 波长紫外光照 射下，呈现橙黄色的荧光 橙黄色的荧光。 射下，呈现橙黄色的荧光。 用溴化乙啶检测DNA，可检出 -9g以上的 ，可检出10 以上的 以上的DNA含量。 含量。 用溴化乙啶检测 含量
例如：普通琼脂凝胶电泳，很难分离大于 分子。 例如：普通琼脂凝胶电泳，很难分离大于50kb的DNA 分子。 的 如何研究超大片段DNA？ ？ 如何研究超大片段
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测DNA的方法，通过琼脂糖凝胶电泳可以对DNA进行分离和鉴定，广泛应用于分子生物学和遗传学领域。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA，以便对DNA进行分析和鉴定。
实验材料和方法：1. 实验材料，琼脂糖凝胶、DNA样品、电泳缓冲液、DNA分子量标准品、电泳仪等。
2. 实验方法：a. 制备琼脂糖凝胶，按照说明书将琼脂糖加入电泳缓冲液中，加热至完全溶解后倒入凝胶板中，待凝固后形成琼脂糖凝胶。
b. 加载DNA样品，将待检测的DNA样品与DNA分子量标准品混合后加入琼脂糖凝胶槽中。
c. 进行电泳，将装有琼脂糖凝胶的电泳槽连接至电泳仪，设定合适的电压和时间进行电泳。
d. 染色和观察，电泳结束后，取出琼脂糖凝胶进行染色，并在紫外透射仪下观察DNA条带的分离情况。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳检测，我们观察到了DNA在琼脂糖凝胶上的分离情况。
通过比对DNA分子量标准品的条带位置，我们可以初步确定待检测DNA的分子量。
同时，根据DNA条带的数量和位置，我们还可以初步判断待检测DNA的纯度和完整性。
实验讨论：琼脂糖凝胶电泳是一种简单而有效的DNA检测方法，通过该方法可以对DNA进行分离和鉴定。
然而，在实际操作中，我们也需要注意一些问题，比如加载样品时要均匀、染色后要及时观察等。
另外，电泳条件的选择也会对实验结果产生影响，需要根据实际情况进行调整。
结论：通过本次实验，我们成功地利用琼脂糖凝胶电泳对DNA进行了检测，初步确定了待检测DNA的分子量、纯度和完整性。
这为我们进一步的DNA分析和研究奠定了基础。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA检测方法，通过该方法可以对DNA进行分离和鉴定。
在实际操作中，我们需要严格控制实验条件，以确保实验结果的准确性和可靠性。
希望本次实验结果能对相关研究工作提供一定的参考和帮助。
动物医学生化实验《实验七 琼脂糖凝胶电泳分离DNA》课件
【 器材 】 1．电泳槽 。 2．制胶槽。 3．电泳仪 。 4． 加样枪。
【操作】
1．制胶 ：取琼脂糖1 g，加入100ml TBE缓冲 溶液 ；微波炉中熔化，冷至50℃~60℃，倒 入制胶槽；胶凝固后（约10~15min），转至 电泳槽中，加入TBE缓冲溶液。
2．加样：取DNA样品10μL，加 2μL核酸凝胶染 色剂，混匀，上样。
每种DNA样品所处的确切位置需要用 溴乙啶（ethidium bromide，EB）才能 确定。
溴乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检 出10ng甚至更少的DNA。
【 试剂】
1．TBE×l0缓冲溶液 。 2．Gel-Dye SuperBuffer Mix核酸凝
胶染色剂。(溴乙啶替代品) 3．标准相对分子质量DNA。 4．琼脂糖。 5．样品DNA 。
实验七 琼脂糖凝胶电泳分离DNA
【原理】 利用不同长度的DNA片段在琼脂糖凝胶中表
现出不同的迁移率，因而可依据DNA分子的大 小将它们分开。
一般琼脂糖凝胶适用于分离大小在0.2～ 50kb范围内的DNA片段。
琼脂糖凝胶具有操作方便、制备容易快速、 凝胶机械性能好、分离DNA片段范围广等特点。
琼脂糖凝胶电泳所需DNA样品量仅 0.5～1ug。凝胶浓度与被分离DNA样品 的相对分子质量成反比关系，一般常用的 凝胶浓度为1%～2%。：电泳结束，将凝胶转至凝胶成像 仪中观察结果，记录。
DNA的琼脂糖凝胶电泳分析ppt课件
❖ 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘 效应 ，中间电场比较均匀 ；
❖ 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；
❖ 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电 ห้องสมุดไป่ตู้孔内 ；
❖ 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调 高电压。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
琼脂糖凝胶 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 浓度（％）
可分辨的线
10~ 7~ 6~ 4~ 3~
性DNA大小 60~5 20~1 0.8 0.7 0.4 0.2 0.1 范围（kb）
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
❖ 2、 50×TAE电泳缓冲液：称取242gTris碱 （即三羟甲基氨基甲烷， Tris为弱碱，在室 温（25℃）下，它的pKa为8.1；根据缓冲理 论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到 9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一 般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得 该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris的pKa的影响 ）， ，加H2O800ml，待 完全溶解后，加57.1ml冰乙酸， 100ml0.5mol/LEDAT（pH8.0），用H2O定 容至1000ml。临用前用H2O稀释成1×TAE 电泳缓冲液。
dna电泳 实验报告
dna电泳实验报告DNA电泳实验报告引言：DNA电泳是一种常用的生物技术方法，用于分离和分析DNA分子。
通过电场作用，DNA分子在凝胶中运动，根据其大小和电荷的不同，可以实现DNA的分离和鉴定。
本实验旨在通过DNA电泳技术，探究DNA分子的特性和应用。
实验材料与方法：1. 实验材料：- DNA样品- 磷酸缓冲液- 热变性试剂- TAE缓冲液- 琼脂糖凝胶2. 实验方法：- 准备DNA样品：从植物或动物细胞中提取DNA，并进行纯化和定量。
- 制备琼脂糖凝胶：将琼脂糖粉溶解在TAE缓冲液中，加热至溶解，冷却后倒入凝胶模具中，形成凝胶。
- 加载DNA样品：将DNA样品与磷酸缓冲液混合，再加入热变性试剂，使DNA变性，然后将样品加载到凝胶槽中。
- 进行电泳：将凝胶槽放入电泳仪中，连接电源，施加电场，使DNA分子在凝胶中运动。
- 可视化：用DNA染料染色后，使用紫外线照射或荧光成像系统观察DNA分子的迁移情况。
实验结果与分析：通过实验，我们观察到DNA分子在电场作用下的迁移情况。
根据DNA分子的大小和电荷，不同的DNA片段会在凝胶上形成不同的迁移带。
较小的DNA片段迁移速度较快，而较大的DNA片段迁移速度较慢。
实验中，我们可以通过与已知大小DNA片段的对比，确定未知DNA片段的大小。
通过测量迁移带的迁移距离，可以绘制出DNA片段大小与迁移距离之间的标准曲线，从而推断未知DNA片段的大小。
此外，DNA电泳还可以用于检测DNA片段的纯度和完整性。
如果DNA片段受到损伤或降解，可能会出现额外的迁移带或模糊的带状图案。
通过观察凝胶上的带状图案，可以初步判断DNA样品的质量。
实验应用：DNA电泳在生物学和医学领域有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 基因检测与鉴定：通过DNA电泳，可以检测和鉴定基因突变、基因型、基因重组等。
这对于疾病诊断、遗传学研究以及法医学领域具有重要意义。
2. DNA指纹鉴定：DNA电泳可以用于人类个体的身份鉴定。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告引言：DNA是生物体中的重要遗传物质，通过检测和分析DNA可以揭示生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法，本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA样品的大小和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料：- DNA样品- DNA标准品- TBE缓冲液- 碱基对应的引物- DNA扩增反应体系- 琼脂糖凝胶- DNA电泳仪2. 实验方法：1) 准备琼脂糖凝胶：a. 取适量琼脂糖粉末加入TBE缓冲液中，搅拌均匀。
b. 将混合液加热至溶解，然后冷却至室温。
c. 将琼脂糖凝胶液倒入电泳槽中，插入梳子，待凝固。
2) 准备DNA样品：a. 取DNA样品，加入适量的DNA扩增反应体系。
b. 在PCR仪中进行DNA扩增反应，得到待检测的DNA样品。
3) 进行电泳检测：a. 取一定量的DNA样品和DNA标准品，加入电泳槽中的样品槽。
b. 打开电泳仪，设定适当的电压和时间。
c. 开始电泳，观察DNA在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
结果与讨论：通过琼脂糖凝胶电泳检测，我们可以观察到DNA样品在电场作用下在琼脂糖凝胶中的迁移情况。
根据DNA片段的大小，我们可以通过比较DNA样品与DNA标准品的迁移距离，确定DNA样品的大小。
在实验中，我们发现不同大小的DNA片段会以不同的速度迁移，较小的DNA片段迁移速度较快，较大的DNA片段迁移速度较慢。
这是因为琼脂糖凝胶的孔径大小会影响DNA片段的迁移速度，较小的孔径会使DNA片段迁移速度变慢。
此外，我们还可以通过观察琼脂糖凝胶中DNA样品的带状图案来评估DNA样品的纯度。
如果带状图案清晰且无杂带，说明DNA样品较纯；而如果带状图案模糊或有多个杂带，说明DNA样品可能存在杂质或降解。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分析技术，通过观察DNA片段在琼脂糖凝胶中的迁移情况，我们可以确定DNA样品的大小和纯度。
这种技术在生物学研究和医学诊断中具有重要意义，可以帮助科学家们更好地理解生物体的遗传信息。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验中常用的技术之一，其目的主要包括以下几个方面：1、分离和鉴定 DNA 片段：通过电泳可以将不同大小的 DNA 片段在琼脂糖凝胶中按照分子量大小进行分离，从而能够直观地观察到DNA 样品的组成和纯度。
2、检测 DNA 的质量：通过观察电泳图谱中 DNA 条带的亮度、清晰度和完整性，可以评估 DNA 样品的质量，判断是否存在降解、杂质污染等情况。
3、定量分析 DNA 浓度：结合已知浓度的 DNA 标准品，通过比较样品条带与标准品条带的亮度，可以对 DNA 样品的浓度进行大致的估算。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的线性多糖聚合物。
当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，会形成网状的凝胶结构。
由于琼脂糖凝胶具有分子筛效应，DNA 分子在电场中会向正极移动，其迁移速度取决于 DNA 分子的大小和构象。
较小的 DNA 分子在凝胶中受到的阻力较小，迁移速度较快；较大的 DNA 分子受到的阻力较大，迁移速度较慢。
因此，不同大小的 DNA 分子在琼脂糖凝胶中会被分离成不同的条带。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）等荧光染料对 DNA 进行染色。
EB 能嵌入DNA 分子的碱基对之间，在紫外线照射下发出荧光，从而使 DNA 条带得以显现。
三、实验材料与设备1、实验材料DNA 样品：本次实验使用的是经过提取和纯化的λDNA 样品。
琼脂糖：选用高纯度的琼脂糖粉末。
电泳缓冲液：5×TBE 缓冲液（Tris硼酸EDTA），使用时稀释至1×TBE 工作液。
上样缓冲液（Loading Buffer）：含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度，便于样品沉入加样孔，并指示电泳进程。
核酸染料：溴化乙锭（EB）溶液。
2、实验设备电泳仪：提供稳定的直流电源，用于产生电场。
水平电泳槽：放置琼脂糖凝胶，容纳电泳缓冲液。
凝胶成像系统：用于观察和拍摄电泳结果。
实验七琼脂糖凝胶电泳
实验七琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA一实验原理将两个电极插在电解质溶液中，通上直流电，正离子则向负极移动，而负离子向正极移动，这种现象就是我们熟悉的电泳现象，也称“电泳”。
概括而言，电泳是指带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。
各种电泳技术具有以下特点：①凡是带电物质均可应用某一电泳技术进行分离，并可进行定性或定量分析；②样品用量极少；③设备简单；④可在常温进行；⑤操作简便省时；⑥分辨率高。
本实验采用琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA。
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广，尤其适于分离大片段DNA。
普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2~20kb，利用脉冲电泳，可分离高达107bp的DNA片段。
DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
DNA 分子或片段泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关外（电荷效应），还与DNA 分子的大小和空间构象有关（分子筛效应）。
DNA的相对分子质量越大，其电泳的迁移率就越小。
共价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。
琼脂糖凝胶电泳所需DNA样品量仅0.5～1μg，超薄平板型琼脂糖凝胶所需样品DNA量可以更低。
凝胶浓度与被分离DNA样品的相对分子质量成反比关系，一般常用的凝胶浓度为1％～2％。
在电泳的形式上常用平板型电泳，因为平板型电泳可将多个样品和标准相对分子质量DNA放在同一块胶上进行电泳，使各样品在相同的条件下进行电泳，便于相互间的比较。
电泳时，用溴酚蓝示踪DNA样品在凝胶中所处的位置，但每种DNA样品所处的准确位置需要用新型核酸染料GoldView对DNA分子进行染色才能确定。
DNA质量与浓度的琼脂糖凝胶电泳法测定试验原理
II. DNA质量和浓度的重要性
了解DNA样品的质量和浓度对于实验结果的准确性和可靠性至关重要，可帮助优化实验条件并确保数据的可 靠性。
III. 准备琼脂糖凝胶
详细介绍准备琼脂糖凝胶的步骤和注意事项，包括浓度选择、缓冲液配制和 凝胶浇注。
Hale Waihona Puke IV. 准备DNA样品描述准备DNA样品的步骤，如提取、纯化和测量DNA，以确保样品的可靠性和准确性。
V. 加载样品到琼脂糖凝胶上
指导将DNA样品加载到琼脂糖凝胶上的步骤，包括样品混合、电泳槽加载和 阳极与阴极的连接。
VI. 跑电泳
详细说明电泳条件的设置和运行，以及电场对DNA分离的影响，包括电压、 电流和电泳时间。
VII. 可视化DNA带
介绍如何使用染料和紫外线照射来可视化DNA在琼脂糖凝胶上的带状图案，并解释带状图案的含义。
DNA质量与浓度的琼脂 糖凝胶电泳法测定试验原 理 介绍琼脂糖凝胶电泳法（Agarose Gel Electrophoresis，AGE）的原理，以
及DNA质量和浓度的重要性。
I. 琼脂糖凝胶电泳法（AGE） 介绍
琼脂糖凝胶电泳法是一种常用的分离和分析DNA的技术，通过电场使DNA按 照大小分子量分离，并可用于检测DNA的纯度和浓度。
DNA的琼脂糖凝胶电泳
一、原理DNA在碱性的溶液中带有负电荷，因此，在电场作用下朝正极移动。
在琼脂糖凝胶中电泳时，由于琼脂糖凝胶具有一定孔径，长度不同的DNA分子由于所受凝胶的阻遏作用大小不一，迁移的速度不同，从而可以按照分子量大小得到有效分离。
溴化乙锭可插入到DNA分子的双链中。
在紫外光的照射下，插入溴化乙锭的DNA呈橙红色荧光，所以溴化乙锭可以作荧光指示剂指示DNA含量和位置。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：分子量不同的DNA片段。
（二）仪器设备：1. 电泳仪；2. 紫外检测仪；3. 水平电泳槽；4. 移液器；5. 一次性手套。
（三）试剂：1. pH8.3 Tris－硼酸－EDTA缓冲液：称取10.78gTris，5.500g硼酸，0.930gEDTA －Na2溶于无离子水，定容到100ml，用时稀释10倍；2. EB溶液：溴化乙锭（10mg/ml）（用时稀释10倍）；3. 加样缓冲液：50％甘油＋0.25％溴酚蓝；4. 琼脂糖。
三、实验步骤（一）琼脂糖凝胶的制备：1. 称取琼脂糖1g，加入10倍电泳缓冲液10ml，再加入蒸馏水90ml，在电炉上加热溶解，配制成1％琼脂糖凝胶；稍凉后加入配好的EB溶液数滴。
2. 将电泳模板两端密封，倒入琼脂糖凝胶溶液，插入梳子。
3. 冷凝后将梳子拨出，电泳胶放入电泳槽中。
（二）加样：取样品溶液20μl，加入1／5体积加样缓冲液，混匀后，将溶液加到样品孔中，同时在另一样品孔中加入标准分子量DNA。
一般DNA样品最好控制在0.5～1.0μg之间。
（三）电泳：加入pH8.3Tris－硼酸－EDTA缓冲液，通电维持2～4V／cm，电泳至溴酚蓝走到胶底部边缘时停止电泳。
（四）染色及观察：电泳完毕，取出凝胶模具，将其推到一块干净的玻璃板上，于254nm或300nm波长紫外灯下观察，DNA存在的位置呈现橙黄色荧光，放置时间超过4～6h后荧光减弱，因此应立即用用国产全色胶卷拍照，并应加上红色滤色镜。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告
实验目的：
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术对DNA分子进行分离和检测，以便进一步研究DNA的结构和功能。
实验原理：
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的DNA分离和检测方法，其原理是利用DNA分子在电场中的迁移速度差异，通过琼脂糖凝胶的孔隙大小和DNA分子的大小来实现分离。
DNA分子在电场中迁移的速度与其分子大小成反比，因此较小的DNA片段会迁移得更快，而较大的DNA片段会迁移得更慢。
实验步骤：
1. 制备琼脂糖凝胶，按照实验指导书上的配方将琼脂糖加入缓冲液中，混合均匀后倒入凝胶板中，待其凝固成凝胶后形成孔隙结构。
2. 样品处理，将待检测的DNA样品加入负电荷的染料，使其在电场中迁移时能够被可视化。
3. 电泳操作，将样品加载到凝胶槽中，接通电源，让DNA在电场中迁移。
4. 结果分析，观察凝胶板上的DNA条带，根据迁移距离和大小，分析DNA
片段的大小和数量。
实验结果：
经过电泳分离，观察到了DNA条带在凝胶板上的分布情况。
根据条带的迁移距离和大小，我们成功地分离出了不同大小的DNA片段，并且可以进一步对其进行分析和检测。
实验结论：
通过琼脂糖凝胶电泳实验，我们成功地实现了对DNA分子的分离和检测。
这项技术在生物学和遗传学研究中具有重要意义，可以帮助科研人员更好地理解DNA的结构和功能，为进一步的研究奠定基础。
总结：
琼脂糖凝胶电泳是一种简单而有效的DNA分离和检测方法，通过本次实验，我们深入了解了其原理和操作步骤，并取得了令人满意的实验结果。
希望通过今后的实验实践和学习，能够更好地掌握这一技术，为科学研究做出更多的贡献。
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实验七DNA的琼脂糖凝胶电泳（4学时）
实验目的
琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本实验学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。
实验原理
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA
核酸分子是两性解离分子，是碱基上的氨基解离，而三个磷酸基团中只有一个磷酸解离，所以分子带正电，在电场中向负极泳动；而时，碱基几乎不解离，而磷酸基团解离，所以核酸分子带负电，在电场中向正极泳动。
不同的核酸分子的电荷密度大致相同，因此对泳动速度影响不大。
在中性或碱性时，单链DNA 与等长的双链DNA的泳动率大致相同。
影响核酸分子泳动率的因素主要是：
1、样品的物理性状
即分子的大小、电荷数、颗粒形状和空间构型。
一般而言，电荷密度愈大，泳动率越大。
但是不同核酸分子的电荷密度大致相同，所以对泳动率的影响不明显。
对线形分子来说，分子量的常用对数与泳动率成反比，用此标准样品电泳并测定其泳动率，然后进行DNA分子长度（bp）的负对数——泳动距离作标准曲线图，可以用于测定未知分子的长度大小。
DNA分子的空间构型对泳动率的影响很大，比如质粒分子，泳动率的大小顺序为：cDNA＞IDNA＞ocDNA但是由于琼脂糖浓度、电场强度、离子强度和溴化乙锭等的影响，会出现相反的情况。
2、支持物介质
核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质，琼脂糖是一种聚合链线性分子。
含有不同浓度的琼脂糖的凝胶构成的分子筛的网孔大小不同，是于分离不同浓度范围的核酸分子。
聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺（Acr）在N,N,N′-四甲基乙四胺（TEMED）和过硫酸铵（AP）的催化下聚合形成长链，并通过交联剂N,N′-亚甲双丙烯酰胺（Bis）交叉连接而成，其网孔的大小由Acr与Bis的相对比例决定。
琼脂糖凝胶适合分离长度100至60的分子，而聚丙烯酰胺凝胶对于小片段
（5bp-500bp）的分离效果最好。
选择不同浓度的凝胶，可以分离不同大小范围的DNA分子。
3、电场强度
电场强度愈大，带点颗粒的泳动越快。
但凝胶的有效分离范围随着电压增大而减小，所以电泳时一般采用低电压，不超过4V/cm。
而对于大片段电泳，甚至用电泳过夜。
进行高压电泳时，只能使用聚丙烯酰胺凝胶。
4、缓冲液离子强度
核酸电泳常采用TAE、TBE、TPE三种缓冲系统，但它们各有利弊。
TAE价格低廉，但缓冲能力低，必须进行两极缓冲液的循环。
TPE在进行DNA回收时，会使DNA 污染磷酸盐，影响后续反应。
所以多采用TBE缓冲液。
在缓冲液中加入EDTA，可以鳌合二价离子，抑制DNase，保护DNA。
缓冲液pH常偏碱性或中性，此时核酸分子带负电，向正极移动。
核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
使用溴化乙锭对DNA样品进行染色，可以在凝胶中加入终浓度为μg/ml的EB。
EB掺入DNA分子中，可以在电泳过程中随时观察核酸的迁移情况，但是如果要测定核酸分子大小时，不宜使用以上方法，而是应该在电泳结束后，把凝胶浸泡在含μg/mlEB的溶液中10～30min进行染色。
BE见光分解，应在避光条件下4℃保存。
材料、试剂及器具
1、材料
1kbMarker（分子量标准）；DNA样品
2、试剂
加样缓冲液（6x）：%溴酚兰，40%蔗糖；琼脂糖；溴化乙锭（EB）；酶液（10mg/ml）。
3、器具
（1）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、制胶板等。
（2）紫外透射仪。
操作步骤
1
2、
3、
4、
5、在槽内加入×TBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面
6、
1μl加样缓冲液（6×）+5μl待测DNA样品
〔+μlEB液（10mg/ml）（注：若胶内未加EB，可选用此法）。
〕
7、
8、观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。
当其移动至距胶板前沿约1cm处，可停止电泳。
9、染色：把胶槽取出，小心滑出胶块，水平放置于一张保鲜膜或其他支持物上，放进EB溶液中进行染色，完全浸泡约30min。
10、。
注意事项
1、电泳中使用的溴化乙锭（EB）为中度毒性、强致癌性物质，务必小心，勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。
所有操作均只能在专门的电泳区域操作，戴一次性手套，并及时更换。
2、预先加入EB时可能使DNA的泳动速度下降15%左右，而且对不同构型的DNA 的影响程度不同。
所以为取得较真实的电泳结果可以在电泳结束后再用μg/ml
的EB溶液浸泡染色。
若胶内或样品内已加EB，染色步骤可省略；若凝胶放置一段时间后才观察，即使原来胶内或样品已加EB，也建议增加此步。
3、加样进胶时不要形成气泡，需在凝胶液未凝固之前及时清除，否则，需重新制胶。
4、以×TBE作为电泳缓冲液时，溴酚兰在%～%的琼脂糖凝胶中的泳动速度大约相当于300bp的线性DNA的泳动速度，而二甲苯青FF的泳动速度相当于4Kb的双链线形DNA的泳动速度。
实验报告
1、记录所观察的电泳图谱，注意每条带的相对位置及浓淡等。
2、判断实验37提取的质粒的相对分子量的大约数值，分析解释实验结果。
思考题
如何通过分析电泳图谱评判基因组DNA、质粒DNA等提取物的质量。