免疫应激溃疡性结肠炎模型的建立与评价

免疫应激溃疡性结肠炎模型的建立与评价作者：李楠王雪明稽杨张林张虹宋晶莹石玉玲

【摘要】目的探讨用联合免疫噪声应激法建立大鼠溃疡性结肠炎模型的可行性及价值。方法将80只Wister大鼠随机分为A、B、C、D四组，每组20只。A组为正常对照组；B组为免疫造模组；C组为噪声应激组；D组为免疫+噪声应激联合组。比较造模后20 d 各组血清皮质醇、结肠组织中MPO、NO水平和结肠组织损伤评分。结果联合免疫噪声应激法较免疫组、噪声应激组的结肠组织损伤评分、血清皮质醇、结肠组织MPO、NO含量均明显增高。结论联合免疫噪声应激法建立的溃疡性结肠炎模型持续时间长，优于单一因素，是一种有价值的可行造模方法。

【关键词】免疫复合法；溃疡性结肠炎；模型；噪声：激素

Foundation and Appreciation of Ulcerative Colonitis Model by Combining Immunizatione with Stress

Abstract： Objective To found and appreciate ulcerative colonitis model by combining immunization with stress. Methods A total of 80 Wister rats were divided into four groups (20 rats per group), i.e. Group A (normal control group), Group B (immunization model group), Group C (noise stress model group) and Group D (immunization plus noise stress model group). Results Tissue lesion score, serum cortisol, tissue myeloperoxidase (MPO) and NO were obviously higher in Group D

than in Group B or C.Conclusion The ulcerative colonitis model founded by combining immunization with stress is feasible and better than any of other models.

Key words： ulcerative colonitis; model; immunization; noise; stress

溃疡性结肠炎（UC）素来以病因复杂、治疗难度大、复发率高为特点，且发病率有逐年升高的趋势，已成为临床治疗的一大难题［1］。一种理想动物模型的建立对探索疾病的病因、发病机制、病变发展规律具有指导意义，同时也是明确疾病治疗方法及新药开发与研究的前提和保障。目前，国内外对溃疡性结肠炎动物模型建立方法的研究很多，但主要集中在肠道本身黏膜病变及化学影响因子方面，对外界因素的综合考虑较少［2］，已知噪声应激与胃肠疾患关系密切。我们在众多造模方法中，选取了免疫法结合噪声应激法，建立大鼠溃疡性结肠炎模型。并检测大鼠溃疡面积及血清中皮质醇、结肠组织中MPO、NO活性，探讨多因素造模的可行性。

1 材料与方法

1．1 动物分组 80只Wister大鼠随机分为正常对照组(A)、免疫组(B)、噪声应激组(C)和免疫+噪声应激联合组(D)，每组各20只。

1．2 免疫造模方法二硝基氯苯乙酸模型，大鼠颈背部脱毛，以2%二硝基氯苯(2，4 dinitrochloro．benzene DNCB)液滴背连续7 d 致敏。第8天经肛门插入结肠8 cm 处注入0．04 mmol/L DNCB乙醇液0．25 ml。2周左右出现UC症状，4周左右症状更为严重。

1.3 噪声应激造模方法使用的噪声源系磁带录制的施工工地电锯切割瓷砖的强噪声，由录音机输至扬声器发出。实验时大鼠均匀置于隔音室内，头部正对扬声器，距离25~30 cm。经B＆K2209精密脉冲声级计及频谱分析仪检测噪声主要能量集中在0．25~4．00 kHz，每次校正噪声强度为110dB(A)，暴露时间为上下午各3 h，噪声暴露过程中声压级变化范围不超过1dB(A)。

1．4 组织处理 A、B组大鼠均在无噪声环境下生活，C、D二组大鼠加每天暴露于强噪声下6 h，连续刺激20 d，4组模型分别于10、20 d 经乙醚麻醉后，从眼球静脉取血5 ml，分离血浆，-20 ℃下冷冻待测激素。所有大鼠20 d 取血后处死，剖腹，取出结肠沿大弯侧剪开展平，观察溃疡大小，求出其面积。结肠黏膜损伤积分（CMDL），按结肠组织形态学评分标准(见表1)。表1 结肠组织损伤程度评分标准

1．5 多肽激素含量检测将血样解冻后，采用特异性放射免疫分析法(RIA)测定血浆多肽激素含量。药盒分别由中国原子能研究院、解放军总医院提供，按说明书严格进行操作。

1．6 统计学方法用STATA软件对数据作t检验，P<0.05为有统计学意义。 2 结果

2．1 各组一般情况造模动物在溃疡性结肠炎形成后均出现腹泻、黏液血便及稀便、少动、毛发无光泽等变化。噪声应激后，联合组症状较免疫和应激组明显加重。D、B组分别死亡各1只，其中B、C 二组出现症状有明显差异，B组>C组。