血清葡萄糖浓度的测定解析

AT AS
×CS
✓ 参考值: 3.89-6.11 mmol/L
思考题
1. 分析血糖的各个检测方法的优缺点。
✓人体对糖的耐受现象 ✓ OGTT为口服葡萄糖负荷试验，可了解人体进食葡萄糖后的血 糖调节能力，早期发现糖代谢异常，早期诊断糖尿病，是一种简 单、快捷的诊断方法。
✓ OGTT重复性差，操作繁琐，并非必需的糖尿病诊断方法，因 此不推荐临床常规应用。
✓ 方法：试验前三天，受试者每日食物中糖含量不应低于150 g，且维持正常活 动。影响试验的药物应在三天前停用，受试前应空腹10-16 h。空腹取血后，5 分钟内饮入250 mL含75 g无水葡萄糖的糖水(妊娠妇女用量为100 g，儿童按1.75 g/kg体重给予，不超过75 g)。服糖后半小时、l小时、2小时、3小时各抽血一次， 定量测定血糖。采血同时每隔1小时取尿液作尿糖试验。整个过程不可吸烟、喝 咖啡、喝茶或进食。
• 空腹血糖损害IFG (impaired fasting glucose) 和糖耐量减退IGT (impቤተ መጻሕፍቲ ባይዱired
glucose tolerance) 是正常向糖尿病的过渡状态，这部分人虽然现在还不是糖尿 病， 但是将来发生2型糖尿病的危险性非常高，可以说是糖尿病的后备军。据 有关研究报道，每年5-8%的 IGT者将发展成为2型糖尿病。
糖耐量正常: 空腹血糖 ≤ 6.1 mmol/L；
服糖30-60 min达峰值,但一般＜10 mmol/L
服糖2h后恢复至空腹血糖水平, 即＜7.8 mmol/L
尿糖(-)
空腹血糖 服糖2h后血 (mmol/L) 糖(mmol/L)
正常
≤6.1
＜7.8
糖尿病性糖耐量 ≥7.0
＞11.1
空腹血糖损害 6.1-7.0
血清葡萄糖浓度测定
实验目的
1. 掌握血清葡萄糖浓度测定方法(GOD-POD法)。 2. 了解口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的测定方法与临床
意义。
实验原理
血糖测定方法
（一）无机化学法：Folin-Wu法基于葡萄糖醛基的还原性
Cu2+
OHGlu
磷钼酸 Cu+
显色
（二）有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法等
＜7.8
糖耐量减退
＜7.0
7.8-11.1
mmol/L
实验器材和试剂
• 实验器材
试管、微量可调式移液器、721E分光光度计、水浴锅
• 试剂
1. 血清 2. 试剂1(R1): 磷酸盐缓冲液、4-氨基安替比林、苯酚 3. 试剂2(R2): GOD、POD 4. 工作试剂：试剂1和试剂2按照10:1混合 5. 葡萄糖标准溶液(5.55 mmol/L)
Schiff碱 (青色)
葡萄糖在酸性条件下加热可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺缩 合成青色的Schiff碱。Schiff碱的颜色深浅与样品中葡萄糖的含量成正比。 评价：操作简便，特异性较高。
A E1 B E2 C
（三）酶法
• 单酶反应法：A
B
– 直接测定底物的含量，由酶的变化量来测定底物量
本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，为葡萄糖测定参考方法，但试剂较贵。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
• 酶偶联反应法：A
B
C
– 常以脱氢酶或者过氧化物酶作指示酶
1. 己糖激酶法 (Hexokinase, HK)
葡萄糖 + ATP HK 葡萄糖-6-磷酸 + ADP 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+ 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 6-磷酸葡萄糖酸内酯 + NADPH
✓ NADPH在340 nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。
实验步骤
B
S
T
工作液
1.00 mL 1.0 mL 1.0 mL
dH2O
10 uL
-
葡萄糖标准液
-
10 uL
血清
-
-
混匀， 37C， 15 mins
10 uL
dH2O
0.50 mL 0.50 mL 0.50 mL
混匀，以B管调零，在510nm波长处读取S管和T管的吸光度.
✓ 计算:
葡萄糖 (mmol/L) =
➢ 妊娠糖尿病GDM (Gestational diabetes mellitus)
一般在妊娠后期(孕期的第28周左右)发生，占妊娠妇女的2-3%。 发病与妊娠期进食过多以及胎盘分泌的激素抵抗胰岛素的作用有 关。大部分病人分娩后可恢复正常。
➢口服葡萄糖耐量试验OGTT (Oral glucose tolerance test)