细菌菌落总数计算方法
实验十细菌菌落总数(CFU)的测定(精)
操作步骤图示
1ml
振荡 10min 1ml 1ml 1ml
水样
9ml 10-1 1ml 20ml
9ml 10-2 1ml 20ml
9ml 10-3 1ml 20ml
倒培养基
2×
五、菌落计数及报告方法
（一）平板菌落数的选择 1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的3个平板（或 2个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为 1ml水样中的细菌总数。 2、 计数时应选择菌落数在30~300/皿之间的稀释倍数 进行计数，若同—个稀释度中一个平皿有较大片状菌落 生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计 数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半 时，而另—半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2 倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同 一稀释度的平均菌数，供下—步计算时用。
实验十 细菌菌落总数 （CFU）的测定
一、实验目的和要求
1、学会细菌菌落总数的测定。 2、了解水质与细菌菌落数之间的相关 性。
二、实验原理
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用 适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。 然而，在实际工作中不易做到，所以通常用 一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生 性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程 度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度 成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污 染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说 明水体被污染得越严重。
4、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应 按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30～300 之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之。 6、菌落计数的报告，菌落在100以内时按实有数 报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位 有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为 了缩短数字后面的零数,也可用10的指数来表示， 在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水 样的稀释倍数。
4789.2-2016菌落总数测定专题培训教材
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标准修订起草单位和主要起草人
GB 4789.2－2016修订
主要起草单位 中国检验检疫科学研究院
参加起草单位 国家食品安全风险评估中心 福建出入境检验检疫局
江苏出入境检验检疫局 安徽出入境检验检疫局 内蒙古疾病预防控制中心 江苏省农业科学研究院 南昌大学
修改培养基和试剂； 删除第二法PetrifilmTM测 试片法。 修改菌落总数的定义
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GB/T 4789.2－2008
2.1 菌落总数 食品检样经过处理，在一定条 件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、 pH、需养性质等），所得1 mL（或1 g）检样 中形成菌落的总数。本标准规定的培养条件下 所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长 发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。
6.1.3 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释 液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反 复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
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防止移液过程污染
移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪，核查洗耳球无菌程度，避免 移液枪触及均质袋或试管内壁……
3.7 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻 度）、10mL（具0.1mL 刻度）或微 量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 9. 无菌培养皿：直径90 mm。 10. pH计或pH比色管或精密pH试 纸。 3.11 放大镜或/和菌落计数器。
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4 培养基和试剂
4.1
GB 4789.2－2010
菌落总数
大肠杆菌实验结果与分析
2、实验结果与分析2.1、细菌总数检测结果2.1.2、细菌总数的计算与报告根据菌落总数的计算方法：1、若只有一个稀释度平板上的菌落术在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平均菌落数载适宜计数范围内时，按下式计算：N=∑c/[(n1+0.1n2)d]式中：N—样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2—第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）为1.75x107；在浓度10—6(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为1.60x107；在浓度10—7(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为2.01x107。
分析数据可知，在浓度10—7(g/ml)的时候，细菌总数远大于其他两个梯度，这与常理不符。
那么有可能是实验过程中的错误导致，可能是稀释不够、密封不紧、没有进行无菌操作等因素有关。
2.2、大肠菌群检测结果2.1.1、初发酵各浓度梯度阳性管数统计附：检验原始记录检验原始记录检测记录与结果培养基配制：样品配制：1、 固体样品，无菌称取25g 样品加225ml 生理盐水，均质。
2、 液体样品，需稀释的，吸取25ml 于225生理盐水，混匀。
菌落总数：检验依据：GB/T4789.2-2008大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003注：“P ”表示阳性结果，“N ”表示阴性结果检验起止时间：2011年09月25日至2011年09月27日检测人:复核人：。
老师整理的实验报告 水处理微生物学标准实验报告10 实验十 细菌菌落总数(CFU)的测定
南昌大学实验报告学生姓名：学号：专业班级：实验类型：√验证□综合□设计□创新实验日期：实验成绩：实验十细菌菌落总数（CFU）的测定一、实验目的：1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2．了解培养基平板菌落计数原则二、实验基本原理：细菌菌落总数（CFU）是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。
它是有机污染程度的指标，也是卫生指标。
在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水有机污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。
但还应当指出的是，水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。
因此，结合大肠菌群数以判断水的污染的安全程度就更全面。
我国现行生活饮用水的卫生标准（GB5749－2006）规定：细菌菌落总数在1ml自来水中不得超过80个。
细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们的培养基才能将它们培养出来。
然而在实验工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机污染程度。
三、主要仪器设备及耗材：电热干燥箱，高压蒸汽灭菌锅，电热培养箱，恒温水浴，冰箱，菌落计数器，放大镜，肉膏蛋白胨脂培养基，灭菌水，灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。
四、实验步骤：1．水样的采取供细菌学检验用的水样，必须按无菌操作的基本要求进行采样，并保证在运送，贮存过程中不受污染。
为了要正确反映水质在采样时的真实情况，水样在采取后应立即送检，一般从取样到检验不应超过4小时。
条件不允许立即检验时，应存于冰箱，但也不应超过24小时，并应在检验报告单上注明。
（1）生活饮用水（自来水）先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，用灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
（2）池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，立即返回实验室检查，否则需放入冰箱中保存。
大肠杆菌及菌落总数
所谓细菌总数是指1mL或1g检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计算的是平板上形成的菌落(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。
)实验器材(三 (1) 菌落总数的测定：1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏3.0 g 蛋白胨10.0g NaCl 5.0g 水1000mL pH7.4～7.6 将培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后到入烧杯。
也可放在称量杯中，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
在上述烧杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，加入琼脂，再在石棉上加热使其溶解。
将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用PH试纸测其PH，直至PH达7.6。
反之，用1mol/LHCL 进行调节。
无菌生理盐水：需用生理盐水浓度是0.9%：称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。
2)器材试剂：牛肉膏蛋白胨 NaCl 1moL/LNaOH 1moL/LHCL 灭菌水牛角匙试管培养皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平高压蒸气灭菌锅牛皮纸麻绳 pH5.5-9.0试纸（）棉花记号笔纱布吸管pH 灭菌平皿灭菌的具塞三角瓶量筒玻璃棒电热炉称量杯灭菌三角瓶灭菌试管灭菌吸管．高压蒸气灭菌：1.将内层锅去处，再向外层锅中加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。
食品中菌落总数和大肠菌群的检测
精选ppt
11
GB/T 4789.2-2010
• 本标准与GB/T 4789.2-2008相比主要修改如下： • ——修改了标准的中英文名称；(食品安全国家标准 • 食品微生物学检验 菌落总数测定/食品卫生微生物学检验
2011年食品企业质量检 验人员培训
2011.09.15
精选ppt
1
菌落总数与大肠菌群的测定
一、菌落总数测定法 二、大肠菌群的检测
太仓市产品质量监督检验所
主讲人：詹克航
精选ppt
2011.09.15
2
食品卫生标准中的微生物指标概论
目前，食品卫生标准中的微生物指标一般分为菌落 总数、大肠菌群和致病菌三项。
• 4.3 无菌生理盐水,见附录A中A.3 ：称取8.5g氯化钠溶 于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
• (4.4 1 mol/L 氢氧化钠（NaOH）：称取40g氢氧化钠溶于1000mL水中。 4.5 1 mol/L 盐酸（HCl）：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL 4.6 PetrifilmTM菌落总数测试片（aerobic count plate）和压板。)
精选ppt
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• 另一方面，它可以用来预测食品可能存 放的期限程度。如实验表明，菌数为 105cfu/cm2的鱼，在0℃下可保持6d，而 菌数为103cfu/cm2时，保存期可达12d。
• 但上述规则也有例外，有些食品成品的 菌落总数并不高，但由于已有细菌繁殖并 已产生了毒素，且毒素性状稳定，仍存留 于食品中；再有一些食品如酸泡菜和酸乳 等，本身就是通过微生物的作用而制成的， 且是活菌制品。
菌落总数国标
菌落总数国标一、菌落总数概述菌落总数是指单位样品中，菌落繁殖所形成的单个菌落总数。
其用于表示食品、饮料、营养品、化妆品等产品的表面和内部微生物污染程度，是检测产品质量卫生状况的重要参数之一。
国家标准对菌落总数的要求是，在指定条件下，每克或每毫升数目必须不超过15000CFU/g或CFU/mL，其中CFU即“colony forming unit”，表示菌落形成的单位。
菌落总数检测的原理是采用平板计数法，将经过稀释的样品涂布于含有营养物质的琼脂平板上，培养一定时间后，计算菌落数量。
根据检测结果，可以判断样品是否符合卫生标准，有无微生物污染等。
二、菌落总数的影响因素1. 食品和营养品的原材料和生产过程。
原材料可能受到微生物污染，从而影响最终产品的菌落总数；而生产过程中，加工环境和人员和设备会是微生物传播的可能来源。
2. 菌株自身性质和数量。
不同菌株形态、生长速度和耐受力都不同，因此不同的菌株会对结果产生不同的影响。
而数量的增加也会影响结果，菌落总数越高，检测结果越大。
3. 卫生条件。
设备和环境的清洁程度会影响微生物传播，因此必须在使用前进行充分消毒。
三、菌落总数的检测方法1. 选择培养基。
菌落总数检测需要选择适合种类和数量的培养基，平板计数法中比较常用的是总菌计数琼脂培养基。
2. 检测前准备。
对样品进行稀释或加倍稀释处理，并进行排气或震荡，保证样品均匀分布。
3. 接种方法。
将稀释后的样品涂布于琼脂平板中，避免空气污染和外源性污染，最后用精密计数器计数。
4. 结果统计。
计算每一块琼脂平板中的菌落数量，将数据进行统计分析，以得到菌落总数的检测结果。
四、菌落总数国家标准的制定根据《食品安全法》的规定，为了保障消费者的身体健康及生活质量，国家相关部门制定了大量的食品卫生标准和检测方法。
其中，针对菌落总数的检测标准主要是国家卫生部《食品卫生标准》和国家质量监督检验检疫总局的GB/T 4789.2-2010《食品微生物学检验》。
菌落总数
2017/12/25
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方法特色三 菌落计算公式
• 统计学依据：
– 平板菌落数越多，结果越具有代表性； （不考虑稀释倍数和培养基的营养状况等） – 取样量越大，结果越具有代表性； （同等取样条件、排除其他方面的干扰因素）
2017/落计算－例子
1:100（第一稀释度） 232，244 1:1000（第二稀释度）38，35
• 为了在食品中有效开展菌落总数测定，以保
障食品安全， 保障大众健康，防止细菌性食 源性疾病的发生，我国在1984年制定了 《食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》 （GB/T 4789.2-1988）标准，该标准的 颁布为菌落总数的规范测定起到了重要的作 用。
菌落总数测定标准修订意义
• 在以后的二十多年时间里，食品中菌落
片时，还有方格，如300～500
• 4、菌落分布特别均匀； • 5、平行平板菌落结果一致性比较好，与避免了热损伤有关； • 6、菌落蔓延或半透明菌膜现象很少发生； • 7、安全方面：不像玻璃平皿易碎、对人员造成潜在的伤害，另
外密封比较好，不容易直接接触菌落。
方法特色二 3MTM PetrifilmTM 纸片法缺点
•
6.2培养
• 6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，置 36±1℃培养48±2h。水产品30±1℃培 养72±3h。 • 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基 表面弥漫生成的菌落时，可在凝固后的琼 脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL）， 凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。
6.3菌落计数
• 1、某些有红色颗粒的，需要注意；粘稠的液体样
品，不易分散开；表面活性比较大，易流出；泡
沫比较丰富的样品等
• 2、颜色特别重的，如桔黄色，掩盖了菌落； • 3、抑菌剂浓度比较高时；辣根及辣根粉、大蒜及 洋葱制品； • 4、某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落 模糊的现象，大部分是芽胞杆菌。
icu医务人员手菌落总数标准
icu医务人员手菌落总数标准一、检测目的为了确保ICU医务人员手部的清洁与消毒，预防医院感染的发生，提高医疗质量与安全，特制定本标准。
二、检测方法本标准采用细菌菌落总数作为衡量医务人员手部清洁与消毒效果的主要指标。
细菌菌落总数是指一定条件下培养基上生长出来的细菌菌落的数量。
具体检测方法如下：1. 采样时间：在医务人员完成手部清洁与消毒后进行采样。
2. 采样方法：采用涂抹法进行采样。
将无菌棉拭子涂抹在医务人员的手部，包括手掌、手背、手指和指缝等部位，然后剪去棉拭子上的部分，将其投入无菌试管中。
3. 培养基：使用营养琼脂培养基，将其置于37℃恒温箱中培养24小时。
4. 计数方法：将培养基上的菌落进行计数，并计算每平方厘米的菌落总数。
三、检测标准根据相关规定，ICU医务人员手部细菌菌落总数应符合以下标准：1. 普通洁净区域：手部细菌菌落总数≤5cfu/cm²。
2. 洁净手术室：手部细菌菌落总数≤2cfu/cm²。
3. 重症监护病房（ICU）：手部细菌菌落总数≤3cfu/cm²。
四、细菌菌落总数定义细菌菌落总数是指一定条件下培养基上生长出来的细菌菌落的数量，是衡量物体表面卫生状况的重要指标。
在医疗领域，细菌菌落总数常用于评估医务人员手部清洁与消毒效果，以及环境卫生状况。
五、采样方法为了确保采样方法的准确性，可以采用以下步骤进行采样：1. 准备采样工具：包括无菌棉拭子、无菌试管、营养琼脂培养基等。
2. 选择采样时间：在医务人员完成手部清洁与消毒后进行采样，以确保手部卫生状况得到真实反映。
3. 采样部位：包括手掌、手背、手指和指缝等部位，要全面覆盖手部。
4. 采样方法：将无菌棉拭子涂抹在医务人员的手部，轻轻涂抹均匀，然后剪去棉拭子上的部分，将其投入无菌试管中。
要注意不要触碰试管口和棉拭子接触部位，避免污染。
5. 培养基接种：将采样后的棉拭子放入营养琼脂培养基中，充分混匀，然后将其置于37℃恒温箱中培养24小时。
细菌菌落总数计算方法
在一次次感染暴发的反思中认识 手卫生
医疗环境中的污染无处无时不在 所有的医疗护理服务均离不开手的服务 手的污染随时随地发生 不卫生的手可能是“罪恶”之手 手卫生不良的双重伤害——害人害己 试问：我们能不保持“纯净”的双手吗？
控制医院感染 最简单、最有效、最方便、最经济方法
洗手
19世纪中期出现的产褥热导致大批产妇死亡，医院曾因此被称为“死亡场所”、“产妇死亡之门”； 1847年塞姆尔韦斯通过对产褥热的研究，于1861年发表了“产褥热的病原学观点和预防”而成为医
手套带给护理人员一种安全感的假象：
戴手套时间过长，手套内的双手温湿，更有利于细菌的滋长， 且致病菌可能会经由手套缝隙或在脱手套时污染双手
实例6
这些实例你会觉得很熟悉
采血室人员
采血者戴着手套一个接着一个采血，保护自己
不保护患者。
他们认为可行的方法是：手套无污染的情况下不 脱手套直接用速干手消毒剂消毒手套，可以双向防护， 一旦手套有血污染立即更换。
2004年卫生部开始成立专家小组立项制定“医务人员手卫生
规范”，专家小组收集整理国际上有关手卫生的法规要求结合我国的实际情况，起草
并多次修改完成了“医务人员手卫生规范”。
2006年卫生部网上征求意见，但就在此时，卫生部加强了医政标准工作，
新成立了医院感染控制标准专业委员会，并将《医务人员手卫生规范》的制定纳入了本标 委会的重要工作内容。经过多次的专家讨论，不同层面、不同形式的征求意见，数十次的 反复认真修改，历时5年“医务人员手卫生规范”终于与大家见面了。
菌落总数超过1x106CFU/cm2 5x105 CFU/cm2 4x104 CFU/cm2 1x104 CFU/cm2
医务人员手部的菌落数量：
物体表面细菌菌落总数
物体表面细菌菌落总数随着人们对健康的重视程度不断提高，对物体表面细菌菌落总数的研究也越来越受到关注。
物体表面细菌菌落总数是指物体表面上的细菌数量，它是表征物体表面微生物污染程度的一项重要指标。
本文将从细菌菌落总数的概念、测量方法、影响因素以及控制措施等方面进行详细介绍。
1. 细菌菌落总数的概念细菌菌落总数是指单位面积内细菌的总数量。
它是反映物体表面细菌数量的一项重要指标，也是评价物体表面微生物污染程度的重要依据。
细菌菌落总数的测量单位是CFU/cm2（colony-formingunits/cm2），即单位面积内的菌落数量。
细菌菌落总数的测量可以反映物体表面微生物污染程度的高低，从而为制定相应的控制措施提供依据。
2. 细菌菌落总数的测量方法细菌菌落总数的测量方法有多种，包括平板计数法、膜过滤法、直接显微镜法、荧光染色法等。
其中平板计数法是目前应用最广泛的测量方法。
平板计数法是将待测样品均匀涂在含有营养物质的琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间，待菌落形成后进行计数。
该方法的优点是操作简便、测量精度高，适用于各种样品的测量。
但是该方法也存在一定的局限性，如无法测量活菌和胞外菌落等。
3. 影响细菌菌落总数的因素细菌菌落总数的大小受到多种因素的影响，主要包括以下几个方面：（1）环境温度和湿度：温度和湿度对微生物的生长和繁殖有着重要的影响。
一般来说，温度越高、湿度越大，微生物的生长速度越快，细菌菌落总数也会相应增加。
（2）物体表面的材质：不同材质的物体表面对微生物的附着能力不同，从而影响细菌菌落总数的大小。
例如，不锈钢表面的细菌附着能力较强，容易形成菌落。
（3）物体表面的清洁程度：物体表面的清洁程度对微生物的附着和生长也有着重要的影响。
如果物体表面没有得到彻底的清洁，微生物就会在其表面形成菌落。
（4）周围环境的微生物污染程度：周围环境的微生物污染程度也会对物体表面的微生物数量产生影响。
如果周围环境的微生物数量较多，物体表面微生物的数量也会相应增加。
实验1.细菌总菌落数的测定
六、说明
为了保证实验结果能准确反映被检样品的真实情 况，检验时必须注意以下一些要求和规定： （1）检验中所用的所有器具都必须洗净、烘干、灭 菌，即不能存在活菌，也不能残留有抑菌物质。 （2） 应注意采样的代表性，如系固体样品，取样 时不应集中在一点，宜多采几个部位。固体检样 在加入稀释液后，最好置于均质器中，以800～ 在加入稀释液后，最好置于均质器中，以800～ 1000r/min的速度处理1min，以获得均匀的稀释 1000r/min的速度处理1min，以获得均匀的稀释 液。
（3）为减少样品在稀释时造成的误差，在连续递次稀释时， 每个稀释液应充分振荡，使其均匀（最好采用漩涡混合 器），同时每变化1个稀释倍数应更换1 器），同时每变化1个稀释倍数应更换1支吸管。在进行 连续稀释时，应使吸管内的液体沿壁流入生理盐水中， 勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部附着的检液 溶于其内，造成误差。 （4）样品稀释液大多采用生理盐水，有时也用磷酸缓冲液 或0.1﹪的蛋白胨水。如果检样的含盐较高（如酱制品）， 0.1﹪ 稀释液也可采用无菌蒸馏水。用做样品稀释的液体，每 批都要做空白催找，以判断培养基、培养皿、吸管及空 气可能存在的污染。
（5）为了控制培养基的硬度适合细菌的生长，琼脂 含量选为1.5﹪ 含量选为1.5﹪。为了便于操作，有时在灭菌前， 就把培养基分装到不同的试管内，一般1 就把培养基分装到不同的试管内，一般1支试管 内的分装量是15ml营养琼脂底部带有沉淀的部 内的分装量是15ml营养琼脂底部带有沉淀的部 分应弃去，以免与菌落混淆而影响观察计数。 （6）为使菌落能在平板上均匀分布，将检液加入平 皿后，应在20min内倾入培养基并旋转混匀。可 皿后，应在20min内倾入培养基并旋转混匀。可 将平皿放在平面上，先前后左右地摆动，然后 按顺、逆时针的方向转动。混合时应多加小心， 不要使其溅到皿边和皿盖上。
微生物菌落总数的测定—菌落总数的计数方法
混合均匀。
•
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温
箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
•
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生
长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼
脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
• （二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要
菌落总数的测定
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
四、 流程
• 1、检样 • 2、做几个适当倍数的稀释液 • 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 • 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 • 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 • 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 • 7、 计算菌落总数 → 报告
10-4
3.1x106
• 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜
计数范围内时，应以两者比值决定。若其比值小 于2，应报告两者的平均数；若大于等于2，则报 告稀释度较小的菌落数。
试样 稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32
10-3，10-4
2.6x105
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空气中菌落总数测定方法
空气中菌落总数测定方法空气中菌落总数测定方法是评估环境中微生物污染程度的一种方法。
空气中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等，它们对人类健康和生物环境都具有一定影响。
因此，了解空气中微生物的总数是非常重要的。
下面将介绍几种常用的空气中菌落总数测定方法。
1.培养法：培养法是目前最广泛使用的一种空气中菌落总数测定方法。
该方法依赖于菌落在富营养培养基上的繁殖，通过计数培养基上的菌落形成单位（CFU）来估计空气中的微生物总数。
常用的培养基有厌氧培养基和好气培养基。
测定步骤大致为：收集空气样本→灭菌并将空气样本传递到培养基上→培养一定时间→用显微镜或裸眼观察菌落的形成（需要进行稀释）→根据菌落数量进行计数。
2.分光光度法：分光光度法是另一种常用的测定空气中菌落总数的方法。
该方法通过测量菌落中主要的色素如叶绿素等的吸光度来估计菌落的数量。
测定步骤包括：将收集到的空气样本溶解在适当的溶液中→将溶液置于分光光度计中测量吸光度→根据标准曲线计算样本中菌落的数量。
3.过滤法：过滤法是通过将空气样本通过微孔过滤膜将其中的微生物捕获，在过滤膜上的菌落形成后进行计数。
该方法适用于空气中微生物浓度较低的情况。
测定步骤为：用特制的采样器收集过滤膜→将过滤膜放置在培养基上进行培养→菌落形成后计数。
4.PCR法：PCR法是一种利用聚合酶链反应（PCR）技术进行空气中菌落总数测定的方法。
该方法通过提取空气中微生物的DNA并进行PCR扩增，通过计数扩增产物的数量来估计菌落的总数。
PCR法具有快速、灵敏和高效等特点。
综上所述，根据不同的实验条件和需要，可以选择适当的方法来测定空气中菌落的总数。
这些方法各有特点，可以相互验证，以获得准确的结果。
同时，不同方法的选择还需要根据实验室设备和人力资源等因素来考虑，以确保实验的有效进行。
食品中菌落总数的测定方法
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习与掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备:恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基与试剂:75%乙醇、0、85%生理盐水、琼脂培养基:胰蛋白胨5、0g、酵母浸膏2、5g、葡萄糖1、0g、琼脂15、0g、蒸馏水1000mL、pH 7、0±0、23、检样:利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序:检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养(1)以无菌操作,将检样包装打开,用吸管取25ml鲜牛奶,放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠),经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。
(2)用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下同),振摇试管混合均匀,做成1:100的稀释液。
(3)另取1ml的灭菌吸管,按上项操作顺序作10倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用1支1ml灭菌吸管。
(4)根据食品卫生检验标准要求与检样的菌落数量,选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2,分别在作10倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。
(5)稀释液移入平皿后,应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL,并转动平皿使与稀释检样混合均匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
(6)等琼脂凝固后,翻转平板,置36±1℃恒温箱内培养(48±2)h取出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得1mL样品所含菌落总数。
菌落总数cfu计算方法
菌落总数cfu计算方法【最新版3篇】篇1 目录1.菌落总数的概念2.CFU 的含义及其计算方法3.菌落总数测定方法及公式4.CFU 在不同领域的应用5.菌落总数的意义及局限性篇1正文菌落总数 cfu 计算方法是一种评估样品中微生物数量的方法。
菌落总数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等），每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
而 CFU（Colony Forming Unit，菌落形成单位）是计算细菌或霉菌数量的单位，表示在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落。
CFU 的计算方法是每毫升中菌落形成单位（cfu）同一稀释度三次重复的平均菌落数稀释倍数 5。
菌落总数就是指在需氧情况下，37 培养 48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数。
但需要注意的是，菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，因为某些微生物在特定条件下无法生长。
CFU 广泛应用于食品、医药、环保等领域的微生物检测。
例如，在食品行业中，菌落总数的检测方法可以根据国家标准 GB4789.2 进行，其检测结果需要参照对应的微生物限量标准。
然而，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，因此有时被称为杂菌数、需氧菌数等。
总之，菌落总数 cfu 计算方法是一种评估样品中微生物数量的有效方法，但其结果受到一定局限性，无法准确反映样品中所有微生物的种类和数量。
篇2 目录1.菌落总数的概念2.CFU 的含义及其计算方法3.菌落总数测定方法及公式4.CFU 在实际应用中的意义与局限性5.菌落总数与 CFU 的换算关系篇2正文菌落总数 cfu 计算方法是通过对样品中的微生物进行培养和计数，从而得出每克或每毫升样品中菌落形成的单位数量。
在食品、环境、医疗等领域的微生物检测中，菌落总数是一个重要的指标，可以反映样品中微生物的污染程度。
一、菌落总数的概念菌落总数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等），每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
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你知道吗？ 从2008年起，10月 15日是个____日吗?
10月 15日是“国际洗手日”
2005年世界卫生组织提出， 2008年正式设立 2008年是首个“国际洗手日”
＿＿2008年10月15日的＜健康报＞
2009年10月15日，某市小学生在课间通过“集体洗 手操”学习正确洗手方法。
我们的态度
EV71病毒蔓延的重要方式之一。
新华社记者 刘大伟摄 (本文来源：新华网 )
如果医生、护士不注意手卫生会发生什么呢？
答案： １：病人很容易发生医院感染 ２：自己很容易携带病菌、患病 ３：带给自己的家人、朋友．如果他 们免疫力低下时，马上就可能发病.
手易被细菌污染
正常人皮肤有细菌定植：
头皮上 腋窝为 腹部为 前臂为
旧金山市政大厅设置酒精擦手液
据世界卫生组织（WHO）报道：
目前腹泻和肺炎是导致儿童死亡的最主要 元凶，全球每年有170万人死于腹泻类疾病， 另有150万人死于下呼吸道疾病，绝大多数是 发展中国家儿童。其中有一半的儿童是因为没 有养成用肥皂 洗手 的良好习惯而导致死亡。
用肥皂洗手可以将腹泻致死率减半、急 性呼吸道感染致死率减少三分之一，也就是 说，良好的洗手习惯每年可以挽救百万儿童 生命，比任何疫苗或医疗干预都有用。
《医务人员手卫生规范》起草背景
2003年“传染性非典型肺炎（SARS）”在我国发生暴发流行，
SARS病例数占全球病例的92%，某些医院成为SARS的重要传染源，导致医院 感染的暴发，给患者、医院和社会造成巨大的经济损失，社会反响强烈；同时医 务人员在救治SARS病人的过程中发生大量的感染，感染比例高在SARS患者的救 治和医务人员防护工作中暴露出医疗机构手卫生问题突出，如手卫生意识差、知 识欠缺、设施不足及洗手与手消毒方法不规范等，使广大的医院管理者和医务人 员认识到了手卫生工作的重要性。
《医务人员手卫生规范》特点
1、科学性与先进性并举：
2、实用、可操作性强：
《医务人员手卫生规范》主要的意义和价值：
1、能使医疗机构更好地落实与执行国家现有法规： 2、提高“标准预防”的执行力： 3、“额外预防”的重要组成部分：在医院感染的防控工作中，除“标准预防” 外，还应根据疾病传播途径的不同，采取“额外预防”措施。 4、对医务人员的安全防护具有重要作用： 5、对控制医院感染、耐药菌的感染和流行以及防控医院感染暴发至关重要： 6、 “手卫生规范”的颁布与实施将产生很好的成本效益与成本效果。
普通老百姓都在提倡洗手，作为医务人
员更应该做好手卫生工作!
新华网2009年10月15日电
今日是世界洗手日，今年的主题是“干净的
手能拯救生命”。联合国儿童基金会在去年
世界洗手日呼吁全世界重视用肥皂洗手对于保 障健康，特别是儿童健康的重要作用。
此外，用肥皂洗手还是防止甲型Ｈ1Ｎ1流感、
手套带给护理人员一种安全感的假象：
戴手套时间过长，手套内的双手温湿，更有利于细菌的滋长， 且致病菌可能会经由手套缝隙或在脱手套时污染双手
实例6
这些实例你会觉得很熟悉
采血室人员
采血者戴着手套一个接着一个采血，保护自己
不保护患者。
他们认为可行的方法是：手套无污染的情况下不 脱手套直接用速干手消毒剂消毒手套，可以双向防护， 一旦手套有血污染立即更换。
解读
《医务人员手卫生规范》
浦江第二医院院感科
2012年4月
其实——我们是 幸运 的
因为我们工作在快速发展、不断创新、友爱
和谐的浦江二院”，我们遇到了团结奋进的 好的医院领导班子，我们有希望、我们有美 好的的前景！我们每个人有幸在“浦江二院” 工作，让我们—— 感谢我们的领导！ 感谢我们的同事！ 感谢我们的患者！ 更感谢我们自己吧！——掌声！
2004年卫生部开始成立专家小组立项制定“医务人员手卫生
规范”，专家小组收集整理国际上有关手卫生的法规要求结合我国的实际情况，起草
并多次修改完成了“医务人员手卫生规范”。
2006年卫生部网上征求意见，但就在此时，卫生部加强了医政标准工作，
新成立了医院感染控制标准专业委员会，并将《医务人员手卫生规范》的制定纳入了本标 委会的重要工作内容。经过多次的专家讨论，不同层面、不同形式的征求意见，数十次的 反复认真修改，历时5年“医务人员手卫生规范”终于与大家见面了。
菌落总数超过1x106CFU/cm2 5x105 CFU/cm2 4x104 CFU/cm2 1x104 CFU/cm2
医务人员手部的菌落数量：
3.9×104-4.6×106 CFU/cm2 。
手易被细菌污染
某位护士的 手印 培养24 小时后
培养皿显示：
医务人员的手很容易受到暂居菌的污染。 每进行一个操作,可能增加100-1000个细菌
这样的方法是不合乎规范的，可 能更适合中国国情”。 你认为呢？
在一次次感染暴发的反思中认识 手卫生
2003年SARS在我国暴发流行，我国SARS病 例占全球的92%，某些医院成为SARS的重要传 染源，导致医院感染的暴发。
大部分确实是用白大褂 的背部擦干的！！！
白大褂是首选 甩手运动第二 重复毛巾是摆样子
这些实例你会觉得很熟悉
实例3
不能做到接诊一位患者一洗手的原因
其中一个原因就是“忙！”
其实，洗手的依从性护士比医生要好得
多。
这些实例你会觉得很熟悉
实例4
个别外科医生洗手速度
个别外科医生洗手的全过程，用一个字
手在NI中是如何起作用的？
这些实例你会觉得很熟悉
实例1某医生
Байду номын сангаас一边看病人，
一边接电话
实例2
这些实例你会觉得很熟悉
干手的方式
乍一看，这真是一个简单也没有技术含量的问题。 如果与同行进行讨论或者认真反思，才感到有些 复杂和难办。 使用甩手处理，全院都是“甩手掌柜的！”
问及答曰“甩干，搓干”。（我们属于干燥地域）
形容就是“快”。
这些实例你会觉得很熟悉 实例5 用带手套来取代洗手
手套是无菌的，所以摘除手套后不用洗手！
事实上，如果医护人员能仔细清洗双手，理论上没有绝对必 要用手套 因大部分的医护人员洗手都不是执行得很彻底，为预防手部的致 病菌散播而带手套。 虽然手套有提供屏障之效，但并不能保证绝对没有穿透性。 手套在隔绝细菌与病毒上的功能有限