分光光度法的定量分析

A
a b 1
A A E ca E cb
a 1 b 1 a 1 b 1
A
a b 2
A A E ca E cb
a 2 b 2 a 2 b 2
b 2 b 2 a b b 2 1 a b 2 1
A E －A E ca E E －E E
2、对比吸光度（或吸光系数）
A1/A2=E1/E2
相同条件下，同一物质吸光度比值是吸光系数的比值。 3、对比吸收光谱的一致性 将试样与已知标准样品用同一溶剂配制成相同浓度的溶液，在同 一条件下分别扫描吸收光谱，核对其一致性。
（二）纯度检查 1、杂质检查：有杂质时，吸收光谱变形。 2、杂质限量检查：①以某一波长吸光度值表示； ②以峰谷吸光度比值表示。
a b Aa b A1a b－A2 a b ( A1a－A2 ) ( A1b－A2 )
Aa Ab
a Ab ( A1a A2 )
E cb L E cb L
b 1 b 2 b ( E1b L E2 L) cb
A k cb
在含有多种组分的溶液中，如果要测定多个组分，可以根据情 况的不同，采用不同的方法来进行测定。 测量依据——吸光度的加和性：
A = A1 + A2 + ....... + An
(1) (2) (3)
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(1)图计算法----两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）
a 图中，a,b 组份最大吸收波长λmax不重迭，相互不干扰，可以按 两个单一组份处理。 (2) 图计算法---两组分吸收光谱部分重叠 ①a、b两组分的吸收光谱部分重叠，此时λ1处按单组分测定a 组分浓度，b组分此处无干扰。 ②在λ2处测得混合溶液的总吸光度A2a+b,根据加和性计算cb，假 设液层厚度为1cm,则： A2a+b=A2a+A2b=E2a ·ca+ E2b ·cb
同一物质有相同吸收光谱图，反之不一定是同一物质。
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1、对比吸收光谱特征数据：λmax、 λmin、 λsh ①不同基团化合物可能有相同的λmax值，但εmax有明显差别； ②有相同吸光基团同系物，其λmax、 εmax值接近 ，但分子量不同 1% ，E 1cm差别大。
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a b 1 a 1
A E －A E cb E E －E E
a 1 b 2
a b 2 a 1
a b a 1 2 a b 2 1
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2. 等吸收双波长法a +b a b A1 = A1 + A1 a +b a b A2 = A2 + A2
是蒸馏水)作参比液；
2. 试样参比液 如果试样中的其他组分也有吸收， 但不与显色剂 反应，则当显色剂无吸收时，可用试样溶液作参比溶液。
3. 试剂参比液
如果显色剂或其他试剂略有吸收，可用不含待测 组分的试剂溶液作参比溶液。
4. 平等操作参比液 用不含待测组分的溶液，在相同条件下与待 测试样同时进行处理，此为平行操作参比溶液。
则试样溶液的浓度cX为：
Ax cx cs As
c原样 cx 稀释倍数
3、吸光系数法： 根据朗-比定律，从已知的吸光系数K和液层厚度L，根据测得 的吸光度值，求出溶液浓度和含量。
此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法。
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（二）多组分的定量分析法
a b a A2 E2 ca cb b E2
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(3) 图计算法----两组分吸收光谱完全重叠--混合样品测定
(3)图中，a,b 吸收光谱双向重迭，互相干扰，在最大波长处互相 吸收。处理方法如下：
1. 解线性方程组法
a b a b ⇒ 测定 E 和 E ； A 过程： 1 1 1 1 a b a b 2 ⇒测定E2 和E2 ；A2
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二、 定量分析
分光光度法被广泛的应用在各个领域，环境、医药、石油等测 定无机、有机微量成份。由于操作简单，仪器廉价，一般说是 常用的首选方法。
原理:根据朗伯-比尔定律，选择合适λ测A，求出浓度。
（一）单组分的定量分析 1、标准曲线（工作曲线）法： 配制一系列不同浓度的标准溶液，在同一条件下分别测定吸光度， 然后以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制A-C关系曲线。 ●符合朗-伯定律，则得到一条通过原点的直线。 ●根据测得样品吸光度，从标准曲线中求得样品溶液浓度，最后 计算含量。
M 十 R ＝ MR （被测物）（显色剂）（有色配合物）
(1) 定量反应、选择性要好； 干扰少。 (2) 灵敏度要高，摩尔吸光系数ε大。 (3) 有色化合物的组成要恒定，化学性质要稳定。 (4) 有色化合物与显色剂的最大吸收波长之差≥60nm。 (5) 显色反应的条件要易于控制。
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参比
Abs
0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0
标准样品
待测样品
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4 6 8 Concentration (ug/mL)
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2019/4/12882、标准对照法
以该物质吸收光谱图中max为入射光，配制一个与被测溶液浓 度相近的标准溶液cS，测其AS，再将样品溶液推入光路，测其AX，
项目二 紫外-可见分光光 度法
分析条件选择 定性与定量分析 应用
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任务三 分析条件的选择
一、 测量条件的选择 1.吸光度的范围： T ∈ 20%~65%，A∈0.2～0.7之间 2.测定波长的选择： 吸收最大的波长为入射光，干扰最小 三、显色反应条件的选择 显色反应：将试样组分转变成有较强吸收的有色化合物的反应。 显色剂：与被测组分化合生成有色物质的试剂。 1. 显色反应的条件：
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任务四 定性与定量分析
紫外-可见分光光度法主要用于有机物分析。 定性分析：比较吸收光谱特征可以对纯物质进行鉴定及杂质检查； 定量分析：利用光吸收定律进行分析
一、 定性分析 （一）定性鉴别：
对比法：比较样品化合物的吸收光谱特征与标准化合物的吸收 光谱特征；或与文献所载的化合物的标准谱图进行核对。
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1. 显色剂用量： 用量通过实验来确定
只能用于定性
2. 溶液酸度
A
T2(℃) T1(℃)
3. 显色温度及 显色时间
t(min)
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三、参比溶液（空白溶液）的选择 用于调节100%T，若选择不适当，对测量读数的影响较大。 主要是消除溶液中其他组分对光的吸收等带来的影响。 1. 溶剂参比液 当试液、试剂、显色剂均无色时，用溶剂(通常
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注：须满足两个基本条件 • 选定的两个波长下干扰组分具有 等吸收点 • 选定的两个波长下待测物的吸光 度差值应足够大
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（三）示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量 较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。 即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准 溶液作参比溶液。 设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cs < cx)。则： Ax= E ·L ·cx As = E ·L ·cs Δ Ａ＝Ａx －Ａs =E ·b(cx－cs ）=E ·L ·Δ c 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液吸光度差Δ Ａ。 示差法测得的吸光度与Δc呈直线关系。由标准曲线上查得相应 的Δc值，则待测溶液浓度cx ： cx = cs + Δc