示差分光光度法三

/nm
510nm
656nm
/nm
Co
3.64×104 1.24×103
Ni
510nm 5.52×104
656nm 1.75×104
解：已知b=1cm，由公式A=bc和吸光度的加和性， 可得联立方程组：
A510=
c c 510 Co Co
510 Ni Ni
A656=
c c 656 Co Co
结论： 示差法提高了准确度
2. 已知ST ＝ 0.01,样品Tx = 2.00％，标准TS = 5.00% 3、例题
采用专门设计的示差光度计，这就使其 应用受到了一定限制。
例题
1. 用一般光度法测 0.0010mol.L-1 锌标液和含锌的试 液，分别测得 As = 0.700 和 Ax =1.00，两溶液的透 光度相差多少？若用 0.0010mol.L-1锌标液作参比， 试液的A为多少？示差光度法与一般光度法相比， 读数标尺放大了多少倍？
三、光度滴定法
光度滴定法是依据滴定过程中溶液的吸光度的突变来确 定滴定终点的滴定分析方法。
↑ 例, 滴定反应M + R = MR 随着 R 的加入，[M] [MR] ↑ ,
滴定曲线随各物质的吸收性质的不同而不同。
四、络合物组成的测定
1. 摩尔比法 2.等摩尔连续变化法
1. 摩尔比法
图3-3 摩尔比法
二. 示差分光光度法
若采用示差法，可以提高测量的准确度。
(cx>cS 时，适宜高浓度的测 定)
方法 常规法
定量
误差
示差法
因 I0>IS 故 Tr>Tx 有
结 论：示差法提高了准确度
例题
1. 已知ST ＝ 0.01,样品Tx = 2.00％，标准TS = 10.0% 示差法
常规法误差 示差法误差
适应范围：此法适用于离解度较小，配位比高的配合物组成 的测定，当离解度较大时，因无明显转折点，不能准确测定。
2.等摩尔连续变化法
④ 以A cM 作图 cM cR
⑤曲线转折点所对应的cR/cM值，即为ｎ
适应范围：适用于配位比低，稳定 性高的配合物组成的测定。
此外还可以测定络合物的不稳定 常数。
吸光光度法的应用
一、微量组分的测量 二、示差分光光度法 三、光度滴定法 四、络合物组成的测定 五、酸碱离解常数的测定 六、双波长分光光度法
1.单组分的测定
A-c 标准曲线法
举例
例1 水中六价铬的测定
在酸性条件下，六价铬与二苯碳酰二肼反应生 成紫外红色络合物，λmax＝540 nm，
ε＝2.6×104~4.17×104 L·mol-1·cm-1。
wCo

m ms
100 %

9.70 10 6 50 10 3 0.376 25.00
58.93
100 %
=0.015%
50.00
wNi

m ms
100 %

2.06 10 6 50 10 3 58.69 0.376 25.00
100 %
50.00
=0.032%
例4 氨基酸与茚三酮反应生成红色络合物， 可用于氨基酸含量的测定。
2.双组分的测定
同时测定一种试样中的多种组分的基础：
是吸光度具有加合性，即总吸光度为各个组分 吸光度的总和。
设试液中含有两种吸光物 质X和Y，其吸收光谱互相重叠， 根据吸光度的加合性，得
ε为物质得特征参数，可通过配制标准测得 解联立方程，可求得cX, cY。
(Ax1 Ay1) （Ax2 Ay2）
656 Ni Ni
即
0.467 3.64 10 4 CCo 5.52 103 CNi
0.374 1.24 103CCo 1.75 10 4 CNi
解得
cCo =9.70×10-6 (mol·L-1) cNi =2.06×10-5(mol·L-1)
土壤样品中Co和Ni的含量计算如下：
国家标准（GB）采用二苯碳酰二 肼分光光度法测定六价铬。
例2 维生素B6注射液的测定
维生素B6在290 ± 1 nm处有最大吸收，药典采用
紫外可见分光光度法测定维生素B6注射液。测量
在0.1
mol·L-1HCl介质中进行，按
E1% 1cm
(290
1nm)

427
计
算维生素B6的含量。
例3 蛋白质在280 nm处有最大吸收，可 用于蛋白质的定量测定。
1
2
A
（
x
1


xFra Baidu bibliotek

2）bC
x
Y 的存在不干扰 X 的测定
单色器
光 源
检测器
单色器
切 光 器
狭 缝
吸 收 池
问题
光 源
单色器 单色器
切 光 器
狭 缝
吸 收 池
检测器
1. 双波长法与常规参比法比较，有什么特点？
2.如何借助于双波长法消除干扰？
六、双波长分光光度法
X
Y
A
A A1 A 2

A B

c
推导
将上各式整理得：
Ka

AHB A [ H ] A AB
pKa

pH
lg
A AB AHB A
六、双波长分光光度法
X
Y
A
A A1 A 2
(Ax1 Ay1) （Ax2 Ay2）
∵ Ay1 Ay2
∴ A Ax1 Ax2
当络合物很稳定时，曲线的转折 点明显，而络合物的稳定性稍差 时，可画切线外推找出转折点。
图3－4 连续变化法
五、酸碱离解常数的测定
1. 原 理
HB ⇌ H+ + B-
Ka

[H ][ B ] [ HB ]
2. 测定方法
下面以一元弱酸解离常数的测定为例介绍该方 法的应用。
配制三种分析浓度(c =[HB]+[B-])相等而pH不同
例题
1. 将0.376g土壤样品溶解后定容至50mL。取25mL试液进行处 理，以除去干扰元素，显色后定容至50mL，用1cm吸收池 在510nm处和656nm处分别测得吸光度为0.467和0.374，计 算土壤样品中钴和镍的质量分数。已知M(Co)=58.93， M(Ni)=63.55。
钴和镍的配合物有如下数据:
的溶液。
第一种溶液
A AHB AB HB[HB]B [B]
A HB
[H ]c [H ] Ka
B
Kac [H ] Ka
第二种溶液
AHB HB[HB] HBc
HB

AHB c
第三种溶液
A B
B[B] Bc
B