第六章 水产品中农药、兽药残留的检测

由于它们在物理化学性质上均具有较高的化学稳
定性和极低的水溶性、在正常环境中不易分解、有很 强的亲脂性、易通过食物链在生物体脂肪中富集和积 累，可导致残留污染严重、害虫的抗性增加。
水产品中有机氯农药残留量的测定原理
• 试样经提取、净化、浓缩、定容，用毛细管柱 气相色谱分离，电子捕获检测器检测，以保留 时间定性，外标法定量。出峰顺序：α-HCH、βHCH、γ-HCH、五氯硝基苯、δ-HCH、七氯、艾 氏剂、除蜻酯、环氧七氯、杀瞒酯、狄氏剂、 pp’-DDE、pp’-DDD、op’-DDT、pp’-DDT、胺 菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、α-氰戊菊酯、澳氰菊 酯。
多氯联苯可以通过水体中生物食物链的富集作 用，其在鱼类体内浓度累积到几万甚至几十万倍。 多氯苯同时损害人类的免疫系统并被列为可能的致 癌物质，其毒性主要表现为：影响皮肤、神经、肝 脏，破坏钙的代谢，导致骨骼、牙齿的损害，并有 慢性致癌和致遗传变异等的可能性。
含PCBs分析物的现有前处理方法
（1）液-液萃取法 又叫溶剂萃取法，该方法要求的设备简单，操作快速 ，尤其是分离效果较好，但工作量大，且所用溶剂常 是易挥发、易燃和有毒性，在实际应用中受到限制。 （2）固相萃取法 该法是较新也是当今最为广泛应用的萃取方法之一。 其主要是利用萃取剂的固体吸附作用从样品中萃取分 析物。在用固相萃取法处理含PCBs基质时，聚亚安酯 作萃取剂的研究最为广泛。该法操作较简单，灵敏度 、回收率较高，缺点是易发生堵漏、沟流等现象，所 需样品量大。
进样口温度：270℃。
检测器：电子捕获检测器（ECD），300℃。 载气流速：氮气（N2）：1 mL/min；尾吹： 50mL/min。
测定方法
（1）提取 称取试样20g（精确到0.0lg）于100mL 具塞三角瓶中，加水6mL,丙酮40mL,振摇 30min，加氯化钠6g，充分摇匀，再加30mL 石油醚，振摇30min。取35 mL上清液，经无 水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL ，加2mL乙酸乙酯－环己烷（1＋1）溶液再 浓缩，如此重复3次，浓缩至约1mL。
（2）净化
将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯环己烷（1 +1）溶液洗脱，弃去0mL ～ 35mL流分，收集35mL ～ 70mL流 分。将其旋转蒸发浓缩至约1mL，再 经凝胶柱净化收集35mL～70mL流分 ，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，以石 油醚定容至1 mL，留待GC分析。
结果计算
m1 V2 1000 X m V1 1000
第六章 水产品中农药、兽 药残留的检验
1.1 农药、农药残留
农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林 业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植
物、昆虫生长的化学合成或来源于食物、其他天然物
质的一种物质或者几种物质的混合物及其制剂。
按用途可将农药分为杀（昆）虫剂、杀（真）菌
剂、除草剂、杀蜻剂、杀鼠剂和植物生长调节剂等类 型。其中最多的是杀虫剂、杀菌剂和除草剂三大类。 按化学组成及结构可将农药分为有机磷、氨基甲 酸酯、拟除虫菊酯、有机氯、有机砷、有机汞等类型
质谱检测器（MS ） MS具有很强的结构鉴定能力，与GC结合，充 分利用各自的优点可以实现高效、快速的分离鉴定 。MS法是一种先将分子离解成不同带电荷的离子 ，然后对离子质量的强度进行检测，从而获得分子 结构信息的方法。
薄层层析法（TLC）
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC应用于PCBs的分析相对较少，且主要是
标准溶液的配制
准确称取各有机磷农药标准品 ，用乙酸乙酯溶解、定容成一定浓 度的储备液。测定前，用乙酸乙酯 稀释配制混合标准应用液。
色谱条件
色谱柱：涂以SE-54 0. 25μm×30m×0. 32mm（内径 ）石英弹性毛细管柱。
程序升温：60℃维持1 min：40℃/min升到110 ℃； 5℃/min升到235℃；40℃/min升到265℃ 进样口温度：270℃。
导致水产品药物残留的主要原因如下： （1）使用未经批准的药物或禁止使用的药物
（2）不正确使用或滥用药物
（3）未能遵守有关药物休药期
（4）水产品及其制品加工时受到药物污染或储藏 、运输方法不当造成药残
（5）生态、生产环境的污染
2.1有机氯农药的检测方法
有机氯农药（OCPs）是具有杀虫活性的氯代烃的 总称，其代表性的品种包括六六六、DDT及其类似物 和环戊二烯衍生物，它们均为神经毒性物质。
(1)色谱柱：DB-1701石英毛细管柱（或与之相当 的色谱柱），30m×0.32mm×0·25μm (2)载气：氮气，线速度24cm/s (3)进样口：温度235℃ ，无分流方式进样。
(4)温度程序：初始柱温100℃ ，维持1min；59℃ /min升至200℃，维持l0min；5℃/min升至240℃ ，维持15min，确保所有的样品已经流出 (5)检测器：温度300℃ ，补充气流量60mL
作为GC定性分析前以除去样品中的废物和油污的
一种净化方法。
HPLC的优点是分析速度快、方便，可用于日
常分析，不足是其常用的UV检测器灵敏度低、选
择性差。
超临界流体色谱法（SFC）
气相色谱法测定水产品中多氯联苯残留量 利用消化法破坏水产品中的蛋白质和脂
肪等杂质，用石油醚提取、浓硫酸磺化净化
，用毛细管气相色谱法测定。
(6)进样量：1μL
(7)检测器：63Ni电子捕获检测器。
测定步骤
（1）样品预处理
鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去头、 去壳、去附肢，取可食肌肉部分；蟹、甲鱼 等取可食肌肉部分；样品切为不大于 0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，放臵 冰箱备用。
（2）提取
将样品解冻，匀浆机匀浆后，称取样品5g（精 确到0. 001 g )，臵于100mL具塞三角烧瓶中，加入 50mL高氯酸与冰乙酸的混合溶液（体积比1︰1）， 于70℃恒温水浴中振荡约2h，至样品消化完全。将 溶液转移至250mL分液漏斗中，用l0mL石油醚洗涤 原烧瓶，洗涤液合并于分液漏斗中，再向分液漏斗 中加入30mL石油醚，振摇提取多氯联苯残留物， 静臵分层，将上层石油醚提取液转移于另一分液漏 斗中；再用20mL石油醚重复提取2次，将上层石油 醚提取液合并于同一分液漏斗中。
净化
将此浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯-环己 烷（1＋1）溶液洗脱，弃去0mL～35mL 流分，收集35mL ～ 70mL流分。将其旋 转蒸发浓缩至约1mL，再经凝胶柱净化收 集35 mL ～ 70mL流分，蒸发浓缩，用氮 气吹除溶剂，以石油醚定容至1mL，留待 GC分析。
水产品中多氯联苯的测定
多氯联苯（PCBs），又称氯化联苯，是由一 些氯臵换联苯分子中的氢原子而形成的化合物，在 工业上得到广泛应用。
高萃取回收率。Liang等曾在液-液萃取中加入HCI，
研究了不同酸性对PCDDs/ PCDFs/PCBs回收率的影响
，结果表明，前两者在碱性条件下的回收率高，而后
者则在酸性条件下的回收率高。
（5）蒸汽相萃取法（Bleidner法）
Schuphan等利用“Bleidner”蒸汽相萃取技术分析湖泊沉积物中 的PCBs和有机氯沉淀物，与传统的索氏抽提法相比较，结果表 明，该法无需干燥和一般的清洗步骤，因而可大大缩短分析时 间。但随着PCBs氯化度的增高，使用该法所得的回收率明显降 低（由PCB28的98%下降到PCB180的43%）。
（6)索氏抽提法
在分析非极性和中等极性痕量有机物方面得到广泛应用，在分 析PCBs方面的报道也有很多，如沉积物、土壤和动植物组织等
。该法的要点是溶剂的极性应与溶质的溶解度相符，并且萃取 前要用溶剂将基质完全浸湿，其不足之处在于干燥过程耗时长 ，另外萃取时硫也易从基质中萃取出来，影响检测器的测定， 延长分析时间。
原理
试样经高氯酸与冰乙酸的混合溶液消 化，破坏样品中蛋白质和脂肪等基体物质 ，进行初步净化，用石油醚提取多氯联苯 残留物，再用硫酸进一步净化，浓缩，用 具有电子捕获检测器的气相色谱仪测定， 外标法定量。
试剂
所有试剂在多氯联苯出峰处应无干扰峰，有机 溶剂最好选择优级纯或色谱纯试剂，分析纯试剂应 重蒸。
。
1.2 兽药、兽药残留
兽药是指用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有 目的地调节动物生理机能的物质（含药物饲料添加剂 ），主要包括：血清制品、疫苗、诊断制品、微生态 制品、中药材、中成药、化学药品、抗生素、生化药 品、放射性药品及外用杀虫剂、消毒剂等。
根据食品兽药残留立法委员会（CCRVDF)的
定义，兽药残留是指动物产品的任何可食部分所含
（3）超声波萃取法
该方法是分析固体基质最简单的技术之一，其原理是
在室温下用适当的有机溶剂和样品混合，超声萃取待
测物质。萃取效率除与溶剂的极性有关外，还受萃取
时间的影响。该法操作简单。 （4）酸碱处理萃取法 有实验表明，在萃取混合液中加入有反应性的酸、碱 或经酸碱处理过后的硅胶可明显地改善萃取效果，提
PCBs的现有检测方法
气相色谱法（GC）
气相色谱法是目前分析PCBs常用的有效 方法，一方面是因为它具有高分离能力、高灵 敏度和高分析速度等优点；另一方面是由于一 般样品中所含的PCBs大都是痕量级水平。
•所用的检测器主要有以下几类：
电子俘获检测器（ECD）
ECD是分析痕量电负性有机化合物最有效的检 测器，具有选择性较好、灵敏度高、检测限低、易 于操作和维修等特点。
药物的母体化合物及（或）其代谢物，以及与药物
有关的杂质的残留。所以药物残留既包括原药，也
包括药物在动物体内的代谢产物。此外，药物或其
代谢产物还能与内源大分子共价结合，形成结合残
留，它们对靶动物具有潜在毒性作用。
水产品中主要残留药物有哇诺酮类、抗生素类
、磺胺类和峡喃类以及某些激素等。
1.3水产品中农药和兽药污染的来源和途径
检测器：火焰光度检测器（FPD-P）。 载气流速：氮气（N2）：1 mL/min ;尾吹： 50mL/min；氢气：50mL/min；空气：500mL/min
测定方法
提取
称取试样20g（精确到0.01g）于100mL具塞三 角瓶中，加水6mL，丙酮40mL，振摇30mi云， 加氯化钠6g，充分摇匀，再加30mL石油醚，振 摇30min。取35 mL上清液，经无水硫酸钠滤于 旋转蒸发瓶中，浓缩至约1mL，加2mL乙酸乙酯 -环己烷（1＋1）溶液再浓缩，如此重复3次，浓 缩至约1mL 。
X——试样中各农药的含量，单位为mg/kg; m1——被测样液中各农药的含量，单位为ng; m——试样质量，单位为g; V1——试样进样体积，单位为μL； V2——试样最后定容体积，单位为mL。
2. 2水产品中有机磷农药残留量的测定
原理
试样经提取、净化、浓缩、定容，用毛细管柱 气相色谱分离，火焰光度检测器检测，以保留 时间定性，外标法定量。出峰顺序：甲胺磷、 敌敌畏、乙酰甲胺磷、久效磷、乐果、乙拌磷 、甲基对硫磷、杀蟆螟硫磷、甲基嘧啶磷、马 拉硫磷、倍硫磷、对硫磷、乙硫磷。
石油醚（沸程30～60℃，于全玻璃蒸馏器中重 蒸）；高氯酸；冰乙酸；浓硫酸；无水硫酸钠（经 550℃高温灼烧3小时，干燥器中贮存）；硫酸钠溶 液（20g/L)，以上试剂均为分析纯。多氯联苯标准 溶液：取10.0 ng/μL的多氯联苯标准溶液，用己烷 稀释成0. 2 nng/μL的标准使用液。
色谱条件
标准溶液的配制
分别准确称取所需的标准品，用少量 苯溶解，再用正己烷稀释成一定浓度的 储备液。根据各农药在仪器上的响应情 况，以正己烷配制混合标准应用液。
色谱条件
色谱柱：涂以OV-101 0. 25μm×30m×0.32mm（ 内径）石英弹性毛细管柱。
程序升温：60℃维持1 min；40℃/min升到170 ℃ ；2℃ /min升到235℃；40℃ /min升到280℃，维持 l0min。
本方法简便、快速，结果准确，适用于大批
量Baidu Nhomakorabea品分析。
测定多氯联苯中有代表性的六种：
PCB28-2,4,4′-Trchlorbiphenyl；
PCB52-2,2′,5,5’-Tetrachlorbiphenyl；
PCB101-2,2′,4,5,5′-Pentachlorbiphenyl； PCB138-2,2′,3,4,4′,5′-Hexachlorbiphenyl； PCB153-2,2′,4,4′,5,5′-Hexachlorbiphenyl； PCB 180-2,2′,3,4,4′,5,5′-Heptachlorhiplienyl。