薄层色谱法要点
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• 则加入一定量极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等，
• 如果Rf值太大，
• 则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)， 以降低极性。
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
• 流动相选择时需考虑溶剂的下列情况
– 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂， 有时需重蒸除去乙醇。
– k ∞ 9 4 2 1 0.5 0 – Rf 0 0.1 0.2 0.33 0.5 0.67 1
– 3.分离度
– R=
2(Ls.2-Ls.1) W1+W2
– 因Ls=Rf L0，同时对相邻的两个斑点，假定 W1=W2=W
–
则R=
L0
Rf.2-
W
Rf.1
= L0
W
×⊿Rf
– 与n=16[Ls/W] 2式合并，得：
• 二、特点:（薄层色谱与高效液相色谱的差 别）
1.固定相和流动相
• TLC——流动相流动靠毛细作用力，流动相 选择较少受限制，固定相不用再生。
• HPLC是在封闭的系统内，流动相流量靠泵 控制，溶剂选择受检测器限制，固定相需再 生。
2.样品处理 • TLC要求没有HPLC严格。
3.色谱分离
• TLC可同时分离多个样品，并可采用相同或不 同溶剂进行同向或双向多次展开，通常采用正 相色谱，色谱后衍生化方便。
概述
一、发展历史
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种 天然药物。
1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，促 进了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高， 结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，各步操 作实现了仪器化，并实现了计算机化。
L0
Lr
原
W
点
RS
Ls
样品
原 点
参 比
前
沿
– 注意： – 同一物质在不同展开方式中得到的比移值是不相同的。 – 在同样溶剂的重复n次的多次展开后的比移值
(Rf)n=1-(1-Rf)n
• 2. 相对比移值（Rx）
– 在难以确定溶剂前沿的位置时，需要引入相对比移值 （Rx） Rx=Ls/Lr
– 二、分离效能参数
常用硅胶规格：
–硅胶H，不含黏合剂 –硅胶G，含煅石膏（硫酸钙） –硅胶S，用5%淀粉作黏合剂 –硅胶，用羧甲基纤维素（CMC）作黏合剂 –硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，
即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强 烈黄绿色荧光背景。
• 氧化铝
碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合 物，如生物碱、脂溶性维生素等；
一般，被分离组的极性强，选择吸附 能力弱的吸附剂；反之，选吸附能力较强 者。
种类：
• 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 • 氧化铝—有碱性、中性、酸性 • 硅藻土—为化学中性吸附剂 • 纤维素—天然多糖类 • 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形
成氢键的物质有特别的选择性
• 硅胶：化学分子式为mSiO2·nH2O,多孔性 微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。
• 1.理论塔板数 • n=16[Ls/W] 2 ，考虑静态扩散对起始斑点半
峰宽的影响引入真实塔板数（n真实 ） • n真实 =5.54[Ls/（b0.5 - b0 ）] 2 • b0.5为样品斑点半峰宽， b0样品起始斑点半峰
宽 • 塔板高度h真实= Ls/ n真实
– 2.容量因子（k） – k=ts/ tm（物质在两相中滞留时间之比） – 又k=K（Vs/ Vm） – Rf=Vm/（Vm+KVs）=1/（1+k）
• Rf与R之间存在着如图所示关系：
R
Rf=0.3,R最高
1.00
Rf在0.2-0.5,R变化不大
0.75
Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
0.5
0.25
0 0.1 0.3
Rf
0.5 0.7 0.9 1
流动相与固定相
• 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留 和分离选择性决定于三个因素：
流动相
溶 解 能 力
• TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特 别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变 化的物质的分离。
• 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样 和展开剂用量少，展开速度快。
• TLC经常被用于探索柱色谱分离条件和监测 柱色谱过程 。
• 在进行化学反应时，可利用薄层色谱观察原 料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
• HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相 色谱，色谱后衍生化受限制。
4.对污染物抗受力 • TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附 物质均无影响。
• HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸 附物质均有大的影响。
薄层色谱参数
– 一、保留参数
– 1. Rf值
• 用来表征斑点位置的基本参数是比移值，用Rf表示。 • Rf=Ls/L0
中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳 定的化合物；
酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 活度也与含水量有关。
流动相（展开剂）
要求：待测组分很好地溶解不与组分发生 化学反应； 组分斑点圆而集中，无拖尾现象； 注意 Rf的选择。
• 选择：“相似相溶”原则 同吸附柱色谱
极性强的溶剂洗脱能力强
竞争
吸附 剂
溶质 相互作用
固定相
要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表
面 积； 在展开剂中不溶； 与展开剂和式样组分不发生化学反应； 具有适当的吸附能力； 机械强度和稳定性。
选择：分离亲脂性化合物，选择氧化铝，硅 胶，乙酰化纤维素以及聚酰胺
分离亲水性化合物，选择纤维素和离 子交换纤维素及硅藻土。
什么是TLC？
薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC） 是将适宜的固定相喷涂（或喷雾）于玻璃板，
塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后 进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的 对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫 描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别， 检查或含量测定等。
常用溶剂的极性强弱顺序：
水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇 ＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲 烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳>环己 烷>石油醚。
• 展开剂
选择原则：根据被分 离物质的极性
Stahl简图：极性物 质—活度低（活性 级大）的吸附剂-极性展开剂
源自文库 • 展开剂
• 先用单一溶剂展开，
• 若Rf值太小，
• 如果Rf值太大，
• 则加入适量极性弱的溶剂(如环己烷、石油醚等)， 以降低极性。
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
• 流动相选择时需考虑溶剂的下列情况
– 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂， 有时需重蒸除去乙醇。
– k ∞ 9 4 2 1 0.5 0 – Rf 0 0.1 0.2 0.33 0.5 0.67 1
– 3.分离度
– R=
2(Ls.2-Ls.1) W1+W2
– 因Ls=Rf L0，同时对相邻的两个斑点，假定 W1=W2=W
–
则R=
L0
Rf.2-
W
Rf.1
= L0
W
×⊿Rf
– 与n=16[Ls/W] 2式合并，得：
• 二、特点:（薄层色谱与高效液相色谱的差 别）
1.固定相和流动相
• TLC——流动相流动靠毛细作用力，流动相 选择较少受限制，固定相不用再生。
• HPLC是在封闭的系统内，流动相流量靠泵 控制，溶剂选择受检测器限制，固定相需再 生。
2.样品处理 • TLC要求没有HPLC严格。
3.色谱分离
• TLC可同时分离多个样品，并可采用相同或不 同溶剂进行同向或双向多次展开，通常采用正 相色谱，色谱后衍生化方便。
概述
一、发展历史
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种 天然药物。
1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，促 进了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高， 结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，各步操 作实现了仪器化，并实现了计算机化。
L0
Lr
原
W
点
RS
Ls
样品
原 点
参 比
前
沿
– 注意： – 同一物质在不同展开方式中得到的比移值是不相同的。 – 在同样溶剂的重复n次的多次展开后的比移值
(Rf)n=1-(1-Rf)n
• 2. 相对比移值（Rx）
– 在难以确定溶剂前沿的位置时，需要引入相对比移值 （Rx） Rx=Ls/Lr
– 二、分离效能参数
常用硅胶规格：
–硅胶H，不含黏合剂 –硅胶G，含煅石膏（硫酸钙） –硅胶S，用5%淀粉作黏合剂 –硅胶，用羧甲基纤维素（CMC）作黏合剂 –硅胶GF254，含煅石膏和一种无机荧光剂，
即锰激活的硅酸锌，在254nm紫外光下呈强 烈黄绿色荧光背景。
• 氧化铝
碱性氧化铝(pH9.0)——分离中性或碱性化合 物，如生物碱、脂溶性维生素等；
一般，被分离组的极性强，选择吸附 能力弱的吸附剂；反之，选吸附能力较强 者。
种类：
• 硅胶—为使用最广泛的薄层材料 • 氧化铝—有碱性、中性、酸性 • 硅藻土—为化学中性吸附剂 • 纤维素—天然多糖类 • 聚酰胺—为特殊类型有机薄层材料，对能形
成氢键的物质有特别的选择性
• 硅胶：化学分子式为mSiO2·nH2O,多孔性 微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。
• 1.理论塔板数 • n=16[Ls/W] 2 ，考虑静态扩散对起始斑点半
峰宽的影响引入真实塔板数（n真实 ） • n真实 =5.54[Ls/（b0.5 - b0 ）] 2 • b0.5为样品斑点半峰宽， b0样品起始斑点半峰
宽 • 塔板高度h真实= Ls/ n真实
– 2.容量因子（k） – k=ts/ tm（物质在两相中滞留时间之比） – 又k=K（Vs/ Vm） – Rf=Vm/（Vm+KVs）=1/（1+k）
• Rf与R之间存在着如图所示关系：
R
Rf=0.3,R最高
1.00
Rf在0.2-0.5,R变化不大
0.75
Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
0.5
0.25
0 0.1 0.3
Rf
0.5 0.7 0.9 1
流动相与固定相
• 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留 和分离选择性决定于三个因素：
流动相
溶 解 能 力
• TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特 别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变 化的物质的分离。
• 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样 和展开剂用量少，展开速度快。
• TLC经常被用于探索柱色谱分离条件和监测 柱色谱过程 。
• 在进行化学反应时，可利用薄层色谱观察原 料斑点的逐步消失来判断反应是否完成。
• HPLC一次只能分离一个样品，通常采用反相 色谱，色谱后衍生化受限制。
4.对污染物抗受力 • TLC——颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸附 物质均无影响。
• HPLC—— 颗粒物质、腐蚀性物质、不可逆吸 附物质均有大的影响。
薄层色谱参数
– 一、保留参数
– 1. Rf值
• 用来表征斑点位置的基本参数是比移值，用Rf表示。 • Rf=Ls/L0
中性氧化铝(pH7.5)——分离酸性及对碱不稳 定的化合物；
酸性氧化铝(pH4.0)——酸性化合物的分离。 活度也与含水量有关。
流动相（展开剂）
要求：待测组分很好地溶解不与组分发生 化学反应； 组分斑点圆而集中，无拖尾现象； 注意 Rf的选择。
• 选择：“相似相溶”原则 同吸附柱色谱
极性强的溶剂洗脱能力强
竞争
吸附 剂
溶质 相互作用
固定相
要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表
面 积； 在展开剂中不溶； 与展开剂和式样组分不发生化学反应； 具有适当的吸附能力； 机械强度和稳定性。
选择：分离亲脂性化合物，选择氧化铝，硅 胶，乙酰化纤维素以及聚酰胺
分离亲水性化合物，选择纤维素和离 子交换纤维素及硅藻土。
什么是TLC？
薄层色谱法（thin layer chromatography,TLC） 是将适宜的固定相喷涂（或喷雾）于玻璃板，
塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后 进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的 对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫 描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别， 检查或含量测定等。
常用溶剂的极性强弱顺序：
水＞酸＞吡啶＞甲醇＞乙醇＞正丙醇 ＞丙酮＞乙酸乙酯＞乙醚＞氯仿＞二氯甲 烷＞甲苯＞苯＞三氯乙烷＞四氯化碳>环己 烷>石油醚。
• 展开剂
选择原则：根据被分 离物质的极性
Stahl简图：极性物 质—活度低（活性 级大）的吸附剂-极性展开剂
源自文库 • 展开剂
• 先用单一溶剂展开，
• 若Rf值太小，