输血科常见问题1 ppt课件
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❖ 凝聚胺技术首先利用底离子溶液（LIM），降低介质的离子强度，减少 红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。
❖ 其后，加入凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物，肝 素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电 荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非 特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending），Resuspending 具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性 凝聚散开，试验结果为阴性，但如果红细胞被应的抗体致敏，则会被凝 聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
抗人球打蛋白卡中，放专用离心5分钟，红细 胞在上层或中层是阳性。
❖ 如出现正反鉴定不一致，必须重新鉴定，并用手工试管法进行正反血型 鉴定，以试管法为准，如仍然不一致，马上反馈给主任处理。
凝聚胺原理
❖ 红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬 浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩 散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位， Zeta电位决定红细胞之间的 排斥作用。
输血科（血库）实验室及输血 中常见问题
孙利
基础概念
❖ 抗原－是能与特异性抗体或免疫细胞在体内、外发生反应的物质，并常 常可引起特异性免疫应答。
❖ 抗体－是指体内免疫系统所产生的蛋白质，为对某种抗原引起反应所形 成，且能与该抗原或相近的抗原发生特异性反应。
❖ 不完全抗体－在生理盐水中与相应的红细胞不产生可见反应(不凝集),需 通过其它介质(胶体、酶、抗人球蛋白血清等）才能出现可见的抗体。
ＡＢＯ血型鉴定及影响因素
❖ 凝胶微柱法 专用仪器试剂
标准化 微机化
❖ 质量控制
❖ 正反定型结果不一致
❖ 技术失误
阳性
假阴性 假
❖ 血清问题
❖ 被检者红细胞问题 免球
致敏 遗传或获得性表面异常多 凝集
血型鉴定影响因素
异常基因 亚型中弱抗原
Leabharlann Baidu
❖ 近期输血
呈混合外观凝集
❖ 嵌和体血型
❖ 疾病因素导致抗原减弱
❖ 正反定性不一致的解决办法： ❖ 重复试验 ❖ 洗涤被测红细胞 ❖ 换试剂或方法测 ❖ 用相关亚型试剂 ❖ 相关试验加以鉴别 吸收试验
放散试验
Ｒh血型鉴定
❖ 卫生部要求： ❖ 鉴定ＲhＤ阴阳性
❖ 试管法 抗Ｄ血清２滴＋被检2-3％红细胞悬液２ 滴混匀 1500转/分 离心2分钟 凝集为阳性。阴 性：要求37℃水浴15分钟，离心检测。
❖ 卡式凝胶微柱 ❖ 弱D者：受血者划定Ｒh阴性，供血者划定Ｒh阳性。
注意
❖ 在交叉配血中，如发现某孔弱凝集（凝胶层中有拖带），必需复检， （包刮：供、受两者血型鉴定，原方法、凝聚胺交叉配血法、）。确认 安全，才可发出。
❖ 如，在卡式交叉配血中出现，次侧不合，首先复检受、供血者的血型， ABO和RHD血型相同，应加做抗人球蛋白试验，如患者阳性，与临床联 系，说明，患者血球上有不完全抗体，建议临床改输洗涤红细胞，并马 上向市血站约出洗涤红细胞。
(前2孔是正定型，第3孔是D，第4孔是对照，第5、6是反定型）放专用的离心机 离心5分钟，沉底部的是阴性，在上层或中层算阳性。 ❖ 注意观察： ❖ 1、正反结果是否一致， ❖ 2、D孔红细胞是否沉降，在上层或中层结果是阳性,红细胞沉底部阴性者（需进 一步用手工法，单克隆抗D试剂确定，操作方法：2-3%红细胞悬液+2滴单克隆 抗D试剂，放置37℃水域15分钟，用1500转/分，离心3分钟，在显微镜下看结果， 凝集为阳性，无凝集为阴性。）
❖ ABO同种抗体缺乏或减弱 低（无）丙种球蛋白血症
❖ 免疫性ABO抗体
减低 新生儿、妊辰
❖ 自身（同种）抗N
血液透析病人
❖ HLA抗体 经产妇、移植病人、多次输血者
❖ ABO同种抗体的缺乏或减弱
<3岁新生儿 ﹥70岁老年人
抗人球蛋白试验
❖ 测定: 不完全抗体 ❖ 卡式凝胶微柱法 ❖ 又分为 ❖ 间接法 测患者血清中不完全抗体 ❖ 直接法 测患者红细胞上有无不完全抗体 ❖ 配受检者1%红细胞悬液，取50微升，加入到
胞凝块散开为阴性反应，示血交叉配型相合；若红细胞仍凝集成块为阳性反应，示血交叉 配型不合。
交叉配血注意点
❖ 标本是关键 核对 采集 ❖ 操作 规范 ❖ 决不放过疑点 弱凝集 溶血现象 ❖ 输血基本原则：ABO、Rh“Ｄ”血型相同，配血
相合可输
❖ 标本保存 7天以上
主要起血清学问题的一些临床疾病
❖ 多发性骨髓瘤
凝聚胺法
❖ 1、取3支试管分别标记（主、次、混） ❖ 2、5%红细胞制备：取25ul样本压积红细胞悬浮于500ul生理盐水中。 ❖ 3、主侧：受血者血浆2滴+5%供血者红细胞1滴。 ❖ 4、次侧：供血者血浆2滴+5%受血者红细胞1滴。 ❖ 5、将主侧管和次侧管所加的所有成分都加入混合管中。 ❖ 6、主侧管、次侧管、混合管中各加入低离子介质溶液600ul,混合均匀，室温放置1分钟。 ❖ 7、再分别向3管中加入凝聚胺溶液2滴混合均匀，室温放置15秒钟。 ❖ 8、置离心机内3400rpm/15秒，倒去上清液，使管底保留约0.1ml的液体。 ❖ 9、目测管内有无红细胞凝集块，若没有凝块，则必须重做。 ❖ 10、向红细胞已发生凝集的试管内加入2滴复悬液，轻轻混匀，显微镜下观察结果（红细
白血病 MDS
❖ 血型特异物质过高 卵巢囊肿 血型物质高
❖ 获得性B 由革兰阴性杆菌的作用 红C有类B
❖ 多凝集、全凝集 细菌感染
血型鉴定影响因素
❖ 血浆置换 ❖ 异常血浆蛋白 ❖ 不规则抗体存在 ❖ 低丙种球蛋白血症 不凝集 弱凝集 ❖ 药物等因素 右旋糖酐 激素 青霉素 ❖ 年龄因素
ＡＢＯ血型鉴定
❖ 不规则抗体 是指抗A和抗B以外的血型抗体
基础概念
❖ 血型物质：每个人专有的血型抗原物质。主要存在于红
细胞，广泛存在于其他组织和体液中。
❖ 两种形式 醇溶性 水溶性
❖ 意义
型
鉴定血型
鉴定抗体性质 可测脏器和组织血
ＡＢＯ血型鉴定
❖ 卡式微量凝胶法 (具体操作见操作规程) ❖ 操作要点：被检者1%红细胞悬液，前四孔加50微升，后两孔加血浆50微升，
❖ 其后，加入凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物，肝 素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电 荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非 特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending），Resuspending 具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性 凝聚散开，试验结果为阴性，但如果红细胞被应的抗体致敏，则会被凝 聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
抗人球打蛋白卡中，放专用离心5分钟，红细 胞在上层或中层是阳性。
❖ 如出现正反鉴定不一致，必须重新鉴定，并用手工试管法进行正反血型 鉴定，以试管法为准，如仍然不一致，马上反馈给主任处理。
凝聚胺原理
❖ 红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬 浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩 散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位， Zeta电位决定红细胞之间的 排斥作用。
输血科（血库）实验室及输血 中常见问题
孙利
基础概念
❖ 抗原－是能与特异性抗体或免疫细胞在体内、外发生反应的物质，并常 常可引起特异性免疫应答。
❖ 抗体－是指体内免疫系统所产生的蛋白质，为对某种抗原引起反应所形 成，且能与该抗原或相近的抗原发生特异性反应。
❖ 不完全抗体－在生理盐水中与相应的红细胞不产生可见反应(不凝集),需 通过其它介质(胶体、酶、抗人球蛋白血清等）才能出现可见的抗体。
ＡＢＯ血型鉴定及影响因素
❖ 凝胶微柱法 专用仪器试剂
标准化 微机化
❖ 质量控制
❖ 正反定型结果不一致
❖ 技术失误
阳性
假阴性 假
❖ 血清问题
❖ 被检者红细胞问题 免球
致敏 遗传或获得性表面异常多 凝集
血型鉴定影响因素
异常基因 亚型中弱抗原
Leabharlann Baidu
❖ 近期输血
呈混合外观凝集
❖ 嵌和体血型
❖ 疾病因素导致抗原减弱
❖ 正反定性不一致的解决办法： ❖ 重复试验 ❖ 洗涤被测红细胞 ❖ 换试剂或方法测 ❖ 用相关亚型试剂 ❖ 相关试验加以鉴别 吸收试验
放散试验
Ｒh血型鉴定
❖ 卫生部要求： ❖ 鉴定ＲhＤ阴阳性
❖ 试管法 抗Ｄ血清２滴＋被检2-3％红细胞悬液２ 滴混匀 1500转/分 离心2分钟 凝集为阳性。阴 性：要求37℃水浴15分钟，离心检测。
❖ 卡式凝胶微柱 ❖ 弱D者：受血者划定Ｒh阴性，供血者划定Ｒh阳性。
注意
❖ 在交叉配血中，如发现某孔弱凝集（凝胶层中有拖带），必需复检， （包刮：供、受两者血型鉴定，原方法、凝聚胺交叉配血法、）。确认 安全，才可发出。
❖ 如，在卡式交叉配血中出现，次侧不合，首先复检受、供血者的血型， ABO和RHD血型相同，应加做抗人球蛋白试验，如患者阳性，与临床联 系，说明，患者血球上有不完全抗体，建议临床改输洗涤红细胞，并马 上向市血站约出洗涤红细胞。
(前2孔是正定型，第3孔是D，第4孔是对照，第5、6是反定型）放专用的离心机 离心5分钟，沉底部的是阴性，在上层或中层算阳性。 ❖ 注意观察： ❖ 1、正反结果是否一致， ❖ 2、D孔红细胞是否沉降，在上层或中层结果是阳性,红细胞沉底部阴性者（需进 一步用手工法，单克隆抗D试剂确定，操作方法：2-3%红细胞悬液+2滴单克隆 抗D试剂，放置37℃水域15分钟，用1500转/分，离心3分钟，在显微镜下看结果， 凝集为阳性，无凝集为阴性。）
❖ ABO同种抗体缺乏或减弱 低（无）丙种球蛋白血症
❖ 免疫性ABO抗体
减低 新生儿、妊辰
❖ 自身（同种）抗N
血液透析病人
❖ HLA抗体 经产妇、移植病人、多次输血者
❖ ABO同种抗体的缺乏或减弱
<3岁新生儿 ﹥70岁老年人
抗人球蛋白试验
❖ 测定: 不完全抗体 ❖ 卡式凝胶微柱法 ❖ 又分为 ❖ 间接法 测患者血清中不完全抗体 ❖ 直接法 测患者红细胞上有无不完全抗体 ❖ 配受检者1%红细胞悬液，取50微升，加入到
胞凝块散开为阴性反应，示血交叉配型相合；若红细胞仍凝集成块为阳性反应，示血交叉 配型不合。
交叉配血注意点
❖ 标本是关键 核对 采集 ❖ 操作 规范 ❖ 决不放过疑点 弱凝集 溶血现象 ❖ 输血基本原则：ABO、Rh“Ｄ”血型相同，配血
相合可输
❖ 标本保存 7天以上
主要起血清学问题的一些临床疾病
❖ 多发性骨髓瘤
凝聚胺法
❖ 1、取3支试管分别标记（主、次、混） ❖ 2、5%红细胞制备：取25ul样本压积红细胞悬浮于500ul生理盐水中。 ❖ 3、主侧：受血者血浆2滴+5%供血者红细胞1滴。 ❖ 4、次侧：供血者血浆2滴+5%受血者红细胞1滴。 ❖ 5、将主侧管和次侧管所加的所有成分都加入混合管中。 ❖ 6、主侧管、次侧管、混合管中各加入低离子介质溶液600ul,混合均匀，室温放置1分钟。 ❖ 7、再分别向3管中加入凝聚胺溶液2滴混合均匀，室温放置15秒钟。 ❖ 8、置离心机内3400rpm/15秒，倒去上清液，使管底保留约0.1ml的液体。 ❖ 9、目测管内有无红细胞凝集块，若没有凝块，则必须重做。 ❖ 10、向红细胞已发生凝集的试管内加入2滴复悬液，轻轻混匀，显微镜下观察结果（红细
白血病 MDS
❖ 血型特异物质过高 卵巢囊肿 血型物质高
❖ 获得性B 由革兰阴性杆菌的作用 红C有类B
❖ 多凝集、全凝集 细菌感染
血型鉴定影响因素
❖ 血浆置换 ❖ 异常血浆蛋白 ❖ 不规则抗体存在 ❖ 低丙种球蛋白血症 不凝集 弱凝集 ❖ 药物等因素 右旋糖酐 激素 青霉素 ❖ 年龄因素
ＡＢＯ血型鉴定
❖ 不规则抗体 是指抗A和抗B以外的血型抗体
基础概念
❖ 血型物质：每个人专有的血型抗原物质。主要存在于红
细胞，广泛存在于其他组织和体液中。
❖ 两种形式 醇溶性 水溶性
❖ 意义
型
鉴定血型
鉴定抗体性质 可测脏器和组织血
ＡＢＯ血型鉴定
❖ 卡式微量凝胶法 (具体操作见操作规程) ❖ 操作要点：被检者1%红细胞悬液，前四孔加50微升，后两孔加血浆50微升，