山胡椒提取物的抑菌活性及其稳定性_游玉明 (1)
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pH 对提取物抑菌活性的影响见图 2。由图 2 可
2013 年第 39 卷第 5 期（ 总第 305 期） 117
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
A. 75% 乙醇提取物； B. 乙酸乙酯提取物 图 1 热处理对山胡椒提取物抑菌稳定性的影响
Fig 1 Effect of heat treatment on antimicrobial activity of extract from Litsea cubeba
采用滤纸片法［11］。将灭菌后的滤纸片 （ 直径 6 mm） 分别放入 3 种山胡椒提取物中浸泡 30 min，取出 晾干，备用。吸取 100 μL 菌悬液（ 106 ～ 107 个 / mL） 于相应的固体培养基上涂布均匀，用无菌镊子取含山 胡椒提取物的滤纸片贴在固体平板上，每皿贴 3 片， 同时作对照。细菌 37℃ 培养 24 h，酵母菌 28℃ 培养 48 h 后观察，测定滤纸片的抑菌圈直径，结果取 3 次 实验的平均值。
山胡椒（ Litsea cubeba） ，又称山苍子、木姜子、山 鸡椒，为樟科（ Lauraceae） 木姜子属多年生落叶小乔 木，广泛分布于亚洲热带，亚热带及澳洲等地，在我国 多分布于长江流域以南各省［1 － 2］。据研究山胡椒果 实中含有丰富的挥发油、生物碱、黄酮类、γ-丁内酯类 及半萜类化合物，具有广谱抗菌、温中理气、消肿止痛 等多方面功效，是我国卫生部公布的药食兼用植物材 料，有较高的食用及药用价值［3 － 5］。目前，国内外对 山胡椒的研究主要集中在山胡椒精油的提取、化学成 分分析及其生物活性等方面［6 － 9］，而对山胡椒提取物 抑菌活性方面的研究鲜有报道。现代食品工业中使 用的防腐剂大多是化学防腐剂，由于化学防腐剂的安 全性问题，开发植物天然防腐剂是目前食品防腐研究 的热点。因此，本实验探讨了山胡椒提取物对常见食 品腐败菌的抑制作用及其影响因素，以期为山胡椒的 综合利用及新型安全天然食品防腐剂的开发提供参 考。
116 2013 Vol. 39 No. 5 （ Total 305）
生产与科研经验
1. 3. 3 最低抑菌浓度( MIC) 的确定 采用两倍稀释 法［12］。分 别 以 75% 乙 醇 和 乙 酸
乙酯为溶剂，将山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物 分别配制成一系列浓度梯度的溶液，加入已融化好的 培养基中，混合均匀，使培养液中提取物质量浓度分 别为 1、1 /2、1 /4、1 /8、1 /16。待培养基凝固后，分别 接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌 及酿酒酵母，培养后观察。以肉眼无可见菌落生长的 最小质量浓度为其 MIC，以相应溶剂作对照。 1. 3. 4 山胡椒提取物的抑菌稳定性 1. 3. 4. 1 热处理对提取物抑菌稳定性的影响
取 10 mL 山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物于 25 mL 具塞比色管中，置于 20 W 的紫外灯下 30 cm 处分别照射 10、30、60 min，用滤纸片法测定样品抑 菌圈直径，实验重复 3 次。
2 结果与分析
2. 1 山胡椒不同溶剂提取物的抑菌效果 由表 1 可以看出，山胡椒不同溶剂提取物对供试
金黄色 枯草芽 Hale Waihona Puke Baidu光假单 酿酒酵母
葡萄球菌 孢杆菌 孢杆菌
1 /16
1 /16
1 /32
1 /4
1 /16
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1 /32
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2. 3 山胡椒提取物的抑菌稳定性 2. 3. 1 热处理对提取物抑菌稳定性的影响
热处理对提取物抑菌活性的影响见图 1。由图 1 可知，山胡椒提取物经不同温度热处理后仍保持较强 的抑菌活性，在处理温度不超过 100℃ 时，与空白对 照相比均没有显著性差异（ P ＞ 0. 05） ，即使在 121℃ 处理 30 min 后，除 75% 乙醇提取物对荧光假单胞菌 和乙酸乙酯提取物对酿酒酵母的抑菌性显著性（ P ＜ 0. 05） 下降之外，对其他供试菌仍具有较高的活性， 说明了山胡椒中的抑菌成分具有较好的热稳定性，与 顾仁勇等［2］对山胡椒精油抑菌稳定性的研究结论一 致。 2. 3. 2 pH 对提取物抑菌稳定性的影响
A. 75% 乙醇提取物； B. 乙酸乙酯提取物 图 2 pH 对山胡椒提取物抑菌稳定性的影响 Fig 2 Effect of pH on antimicrobial activity of
extract from Litsea cubeba
以看出，pH 值对山胡椒提取物抑菌活性有一定影响。 当 pH ＜ 7 时，随着 pH 值的增加，抑菌性呈现增加的 趋势，当 pH ＞ 7 时，山胡椒 75% 乙醇提取物对金黄色 葡萄球菌和酿酒酵母的抑菌性活性显著（ P ＜ 0. 05） 下降； 山胡椒乙酸乙酯提取物在 pH ＞ 9 之后对酿酒 酵母抑菌活性基本消失，而 2 种提取物对枯草芽孢杆 菌及荧光假单胞菌的抑制能力随 pH 值的升高而增 加，这可能是因为山胡椒提取物中存在黄酮类等部分 酸性抑菌成分 和 生 物 碱 等 碱 性 抑 菌 成 分［13］，与 溶 液 中的酸碱物质发生反应，丧失了对部分微生物的抑制 作用。因此总体来看，山胡椒提取物在 pH 值 5 ～ 7 时抑菌活性较强。 2. 3. 3 紫外照射对提取物抑菌稳定性的影响
DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2013.05.009
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
山胡椒提取物的抑菌活性及其稳定性*
游玉明，黄琳琳
（ 重庆文理学院林学与生命科学学院，重庆 永川，402160）
摘 要 为了解山胡椒提取物的抑菌活性和稳定性，通过抑菌实验和稳定性实验，研究了山胡椒水提物、75% 乙 醇提取物和乙酸乙酯提取物对 5 种常见食源性污染菌的抑制作用，并探讨了热处理、pH 值及紫外照射对山胡椒 75% 乙醇提取物及乙酸乙酯提取物抑菌稳定性的影响。结果表明，3 种提取物对供试菌的抑菌效果大小顺序 为： 乙酸乙酯提取物 ＞ 75% 乙醇提取物 ＞ 水提物。稳定性实验表明，山胡椒提取物的热稳定性良好； pH 值和紫 外照射对山胡椒提取物抑菌活性有一定影响，最适 pH 值为 5 ～ 7； 紫外照射不超过 10 min 时抑菌活性稳定，超过 30 min 后抑菌活性减弱，甚至消失。 关键词 山胡椒，提取物，抑菌活性，稳定性
度较大。
表 1 山胡椒不同溶剂提取物的抑菌效果 Table 1 Inhibition zone diameters of different
extracts from Litsea cubeba
提取物 金黄色
葡萄酒菌
水
6. 0
75% 乙醇 10. 0
乙酸乙酯 12. 0
阴性对照
抑菌圈直径 / mm
枯草芽 荧光假单 大肠杆菌
紫外照射对提取物抑菌稳定性的影响见图 3。 从图 3 可知，紫外线照射对山胡椒提取物抑菌活性有 较大的影响，但 2 种提取物中的抑菌成分对紫外线的 敏感性存在一定差异。75% 乙醇提取物在经紫外线 照射 30 min 后，对 4 种供试菌的抑菌能力基本保持 不变，但乙酸乙酯提取物仅在紫外照射 10 min 后能 保持较强的抑菌活性，当经紫外照射 30 min 后，与对 照相比其抑菌活性显著性（ P ＜ 0. 05） 下降； 2 种山胡 椒提取物抑菌能力经紫外照射 60 min 后均显著性下 降（ P ＜ 0. 05） ，对酿酒酵母基本失去了抑制能力。这 说明山胡椒抑菌物质中含有部分对紫外线敏感的抑
参照杨冬梅［10］的方法并做修改。将干燥的山胡 椒粉碎过 55 目筛，称取山胡椒粉 10 g，按 1 ∶ 10 的固 液比分别加 3 种提取溶剂（ 水、75% 乙醇溶液、乙酸 乙酯） 混合，在 40℃ 恒温摇床（ 140 r / min） 中浸提 4h， 抽滤得到提取液，于 55℃ 条 件 下 减 压 干 燥 至 膏 状。 实验前将 3 种提取物稀释成 2 g / mL（ 每 1 mL 溶液中 所含的有效成分来源于 2 g 山胡椒粉） 。 1. 3. 2 山胡椒提取物抑菌效果的测定
取 10 mL 山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物于 25 mL 具 塞 比 色 管 中，分 别 置 于 80、100℃ 水 浴 和 121℃ 湿热条件下处理 30 min，用滤纸片法测定样品 抑菌圈直径，实验重复 3 次。 1. 3. 4. 2 pH 对提取物抑菌稳定性的影响
用 0. 1 mol / L 的 NaOH 和 0. 1 mol / L 的 HCl 分别 将 75% 乙醇及乙酸乙酯提取液的 pH 值调为 3、5、7、 9、11，用滤纸片法测定样品抑菌圈直径，实验重复 3 次。 1. 3. 4. 3 紫外照射对提取物抑菌稳定性的影响
孢杆菌 孢杆菌
6. 0
6. 0
6. 0
9. 7
11. 1
6. 3
14. 3
12. 9
6. 5
6. 0（ 滤纸片直径）
酿酒酵母
6. 0 10. 0 10. 9
2. 2 山胡椒 75%乙醇及乙酸乙酯提取物的 MIC 根据实验结果选择研究山胡椒 75% 乙醇及乙酸
乙酯提取物的 MIC，采用 2 倍稀释法进行测定。由表 2 可知，山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物对不同供 试菌具有不同的抑菌效果，2 种提取物均对荧光假单 胞菌的抑制效果最好，MIC 为 1 /32 g / mL； 其次为金 黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，MIC 为 1 /16 g / mL； 而对酿酒酵母，乙酸乙酯提取物有较好的抑菌效果， 其 MIC 为 1 /16 g / mL。
表 2 山胡椒 75%乙醇及乙酸乙酯提取物 MIC Table 2 MICs of 60% ethanol and ethyl acetate
extracts from Litsea cubeba
供试菌
75% 乙醇 MIC / （ g·mL － 1 ） 乙酸乙酯 MIC / （ g·mL － 1 ）
1 材料与方法
1. 1 材料与试剂 山胡椒，采摘于重庆市开县赵家街道渔乐基地，
自然条 件 下 阴 干； 乙 酸 乙 酯、无 水 乙 醇 （ 均 为 分 析 纯） ，成都市科龙化工试剂厂。
供试菌种： 大肠杆菌（ Escherichia coli） 、金黄色葡
第一作者： 硕士，讲师（ 游玉明教授为通讯作者，E-mail： xuxiaojiaoyou@ 126. com） 。 * 重庆市教委科技项目（ No. KJ111202 ） ； 重庆文理学院学生科研 项目（ No. XZ20110042） 资助 收稿日期： 2012 － 12 － 18，改回日期： 2013 － 03 － 28
SW-CJ-2D 型超净工作台，苏州净化设备有限公 司； SPX-250B-II 型 生 化 培 养 箱，上 海 跃 进 医 疗 器 械 厂； LDZX-40AL 型 高 压 灭 菌 锅，上 海 申 安 医 疗 器 械 厂； RE-301 型旋转蒸发仪，巩义予华仪器有限公司。 1. 3 实验方法 1. 3. 1 山胡椒不同溶剂提取物的制备
菌抑菌能力不同，其中乙酸乙酯提取物对 5 种供试菌 的抑制效果最好，其对 5 种供试菌的抑制效果按照抑 菌圈直径 由 大 到 小 的 顺 序 为： 枯 草 芽 孢 杆 菌 （ 14. 3 mm） ＞ 荧光假单胞菌（ 12. 9 mm） ＞ 金黄色葡萄球菌 （ 12. 0 mm） ＞ 酿酒酵母（ 10. 9 mm） ＞ 大肠杆菌（ 6. 5 mm） 。其次是 75% 乙醇提取物，其对荧光假单胞菌 的抑菌效果最好，抑菌圈直径为 11. 1 mm，说明山胡 椒提取物对微生物的抑制作用具有选择性。而山胡 椒水提取在每 1 mL 溶液中所含有效成分来源于 2 g 山胡椒粉的浓度下，对 5 种微生物的抑菌圈直径均为 滤纸片直径（ 6. 0 mm） ，即均没有抑制效果。这可能 是因为山胡椒中的主要有效成分如精油、生物碱及萜 类等化合物为极性较弱的物质，在水中溶解度较小， 而在 75% 乙醇及乙酸乙酯这两种提取溶剂中的溶解
萄球菌（ Staphylococcus aureus） 、枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis） 、荧光假单孢菌（ P. Fluorescens） 、酿酒酵母 （ Saccharomycescerevisiae） ，由西南大学食品科学学院 实验中心提供。
营养琼脂培养基，用于细菌培养； 马铃薯培养基 （ PDA） ，用于酵母菌培养。 1. 2 仪器与设备
2013 年第 39 卷第 5 期（ 总第 305 期） 117
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
A. 75% 乙醇提取物； B. 乙酸乙酯提取物 图 1 热处理对山胡椒提取物抑菌稳定性的影响
Fig 1 Effect of heat treatment on antimicrobial activity of extract from Litsea cubeba
采用滤纸片法［11］。将灭菌后的滤纸片 （ 直径 6 mm） 分别放入 3 种山胡椒提取物中浸泡 30 min，取出 晾干，备用。吸取 100 μL 菌悬液（ 106 ～ 107 个 / mL） 于相应的固体培养基上涂布均匀，用无菌镊子取含山 胡椒提取物的滤纸片贴在固体平板上，每皿贴 3 片， 同时作对照。细菌 37℃ 培养 24 h，酵母菌 28℃ 培养 48 h 后观察，测定滤纸片的抑菌圈直径，结果取 3 次 实验的平均值。
山胡椒（ Litsea cubeba） ，又称山苍子、木姜子、山 鸡椒，为樟科（ Lauraceae） 木姜子属多年生落叶小乔 木，广泛分布于亚洲热带，亚热带及澳洲等地，在我国 多分布于长江流域以南各省［1 － 2］。据研究山胡椒果 实中含有丰富的挥发油、生物碱、黄酮类、γ-丁内酯类 及半萜类化合物，具有广谱抗菌、温中理气、消肿止痛 等多方面功效，是我国卫生部公布的药食兼用植物材 料，有较高的食用及药用价值［3 － 5］。目前，国内外对 山胡椒的研究主要集中在山胡椒精油的提取、化学成 分分析及其生物活性等方面［6 － 9］，而对山胡椒提取物 抑菌活性方面的研究鲜有报道。现代食品工业中使 用的防腐剂大多是化学防腐剂，由于化学防腐剂的安 全性问题，开发植物天然防腐剂是目前食品防腐研究 的热点。因此，本实验探讨了山胡椒提取物对常见食 品腐败菌的抑制作用及其影响因素，以期为山胡椒的 综合利用及新型安全天然食品防腐剂的开发提供参 考。
116 2013 Vol. 39 No. 5 （ Total 305）
生产与科研经验
1. 3. 3 最低抑菌浓度( MIC) 的确定 采用两倍稀释 法［12］。分 别 以 75% 乙 醇 和 乙 酸
乙酯为溶剂，将山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物 分别配制成一系列浓度梯度的溶液，加入已融化好的 培养基中，混合均匀，使培养液中提取物质量浓度分 别为 1、1 /2、1 /4、1 /8、1 /16。待培养基凝固后，分别 接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、荧光假单胞菌 及酿酒酵母，培养后观察。以肉眼无可见菌落生长的 最小质量浓度为其 MIC，以相应溶剂作对照。 1. 3. 4 山胡椒提取物的抑菌稳定性 1. 3. 4. 1 热处理对提取物抑菌稳定性的影响
取 10 mL 山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物于 25 mL 具塞比色管中，置于 20 W 的紫外灯下 30 cm 处分别照射 10、30、60 min，用滤纸片法测定样品抑 菌圈直径，实验重复 3 次。
2 结果与分析
2. 1 山胡椒不同溶剂提取物的抑菌效果 由表 1 可以看出，山胡椒不同溶剂提取物对供试
金黄色 枯草芽 Hale Waihona Puke Baidu光假单 酿酒酵母
葡萄球菌 孢杆菌 孢杆菌
1 /16
1 /16
1 /32
1 /4
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2. 3 山胡椒提取物的抑菌稳定性 2. 3. 1 热处理对提取物抑菌稳定性的影响
热处理对提取物抑菌活性的影响见图 1。由图 1 可知，山胡椒提取物经不同温度热处理后仍保持较强 的抑菌活性，在处理温度不超过 100℃ 时，与空白对 照相比均没有显著性差异（ P ＞ 0. 05） ，即使在 121℃ 处理 30 min 后，除 75% 乙醇提取物对荧光假单胞菌 和乙酸乙酯提取物对酿酒酵母的抑菌性显著性（ P ＜ 0. 05） 下降之外，对其他供试菌仍具有较高的活性， 说明了山胡椒中的抑菌成分具有较好的热稳定性，与 顾仁勇等［2］对山胡椒精油抑菌稳定性的研究结论一 致。 2. 3. 2 pH 对提取物抑菌稳定性的影响
A. 75% 乙醇提取物； B. 乙酸乙酯提取物 图 2 pH 对山胡椒提取物抑菌稳定性的影响 Fig 2 Effect of pH on antimicrobial activity of
extract from Litsea cubeba
以看出，pH 值对山胡椒提取物抑菌活性有一定影响。 当 pH ＜ 7 时，随着 pH 值的增加，抑菌性呈现增加的 趋势，当 pH ＞ 7 时，山胡椒 75% 乙醇提取物对金黄色 葡萄球菌和酿酒酵母的抑菌性活性显著（ P ＜ 0. 05） 下降； 山胡椒乙酸乙酯提取物在 pH ＞ 9 之后对酿酒 酵母抑菌活性基本消失，而 2 种提取物对枯草芽孢杆 菌及荧光假单胞菌的抑制能力随 pH 值的升高而增 加，这可能是因为山胡椒提取物中存在黄酮类等部分 酸性抑菌成分 和 生 物 碱 等 碱 性 抑 菌 成 分［13］，与 溶 液 中的酸碱物质发生反应，丧失了对部分微生物的抑制 作用。因此总体来看，山胡椒提取物在 pH 值 5 ～ 7 时抑菌活性较强。 2. 3. 3 紫外照射对提取物抑菌稳定性的影响
DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2013.05.009
食品与发酵工业 FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES
山胡椒提取物的抑菌活性及其稳定性*
游玉明，黄琳琳
（ 重庆文理学院林学与生命科学学院，重庆 永川，402160）
摘 要 为了解山胡椒提取物的抑菌活性和稳定性，通过抑菌实验和稳定性实验，研究了山胡椒水提物、75% 乙 醇提取物和乙酸乙酯提取物对 5 种常见食源性污染菌的抑制作用，并探讨了热处理、pH 值及紫外照射对山胡椒 75% 乙醇提取物及乙酸乙酯提取物抑菌稳定性的影响。结果表明，3 种提取物对供试菌的抑菌效果大小顺序 为： 乙酸乙酯提取物 ＞ 75% 乙醇提取物 ＞ 水提物。稳定性实验表明，山胡椒提取物的热稳定性良好； pH 值和紫 外照射对山胡椒提取物抑菌活性有一定影响，最适 pH 值为 5 ～ 7； 紫外照射不超过 10 min 时抑菌活性稳定，超过 30 min 后抑菌活性减弱，甚至消失。 关键词 山胡椒，提取物，抑菌活性，稳定性
度较大。
表 1 山胡椒不同溶剂提取物的抑菌效果 Table 1 Inhibition zone diameters of different
extracts from Litsea cubeba
提取物 金黄色
葡萄酒菌
水
6. 0
75% 乙醇 10. 0
乙酸乙酯 12. 0
阴性对照
抑菌圈直径 / mm
枯草芽 荧光假单 大肠杆菌
紫外照射对提取物抑菌稳定性的影响见图 3。 从图 3 可知，紫外线照射对山胡椒提取物抑菌活性有 较大的影响，但 2 种提取物中的抑菌成分对紫外线的 敏感性存在一定差异。75% 乙醇提取物在经紫外线 照射 30 min 后，对 4 种供试菌的抑菌能力基本保持 不变，但乙酸乙酯提取物仅在紫外照射 10 min 后能 保持较强的抑菌活性，当经紫外照射 30 min 后，与对 照相比其抑菌活性显著性（ P ＜ 0. 05） 下降； 2 种山胡 椒提取物抑菌能力经紫外照射 60 min 后均显著性下 降（ P ＜ 0. 05） ，对酿酒酵母基本失去了抑制能力。这 说明山胡椒抑菌物质中含有部分对紫外线敏感的抑
参照杨冬梅［10］的方法并做修改。将干燥的山胡 椒粉碎过 55 目筛，称取山胡椒粉 10 g，按 1 ∶ 10 的固 液比分别加 3 种提取溶剂（ 水、75% 乙醇溶液、乙酸 乙酯） 混合，在 40℃ 恒温摇床（ 140 r / min） 中浸提 4h， 抽滤得到提取液，于 55℃ 条 件 下 减 压 干 燥 至 膏 状。 实验前将 3 种提取物稀释成 2 g / mL（ 每 1 mL 溶液中 所含的有效成分来源于 2 g 山胡椒粉） 。 1. 3. 2 山胡椒提取物抑菌效果的测定
取 10 mL 山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物于 25 mL 具 塞 比 色 管 中，分 别 置 于 80、100℃ 水 浴 和 121℃ 湿热条件下处理 30 min，用滤纸片法测定样品 抑菌圈直径，实验重复 3 次。 1. 3. 4. 2 pH 对提取物抑菌稳定性的影响
用 0. 1 mol / L 的 NaOH 和 0. 1 mol / L 的 HCl 分别 将 75% 乙醇及乙酸乙酯提取液的 pH 值调为 3、5、7、 9、11，用滤纸片法测定样品抑菌圈直径，实验重复 3 次。 1. 3. 4. 3 紫外照射对提取物抑菌稳定性的影响
孢杆菌 孢杆菌
6. 0
6. 0
6. 0
9. 7
11. 1
6. 3
14. 3
12. 9
6. 5
6. 0（ 滤纸片直径）
酿酒酵母
6. 0 10. 0 10. 9
2. 2 山胡椒 75%乙醇及乙酸乙酯提取物的 MIC 根据实验结果选择研究山胡椒 75% 乙醇及乙酸
乙酯提取物的 MIC，采用 2 倍稀释法进行测定。由表 2 可知，山胡椒 75% 乙醇及乙酸乙酯提取物对不同供 试菌具有不同的抑菌效果，2 种提取物均对荧光假单 胞菌的抑制效果最好，MIC 为 1 /32 g / mL； 其次为金 黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，MIC 为 1 /16 g / mL； 而对酿酒酵母，乙酸乙酯提取物有较好的抑菌效果， 其 MIC 为 1 /16 g / mL。
表 2 山胡椒 75%乙醇及乙酸乙酯提取物 MIC Table 2 MICs of 60% ethanol and ethyl acetate
extracts from Litsea cubeba
供试菌
75% 乙醇 MIC / （ g·mL － 1 ） 乙酸乙酯 MIC / （ g·mL － 1 ）
1 材料与方法
1. 1 材料与试剂 山胡椒，采摘于重庆市开县赵家街道渔乐基地，
自然条 件 下 阴 干； 乙 酸 乙 酯、无 水 乙 醇 （ 均 为 分 析 纯） ，成都市科龙化工试剂厂。
供试菌种： 大肠杆菌（ Escherichia coli） 、金黄色葡
第一作者： 硕士，讲师（ 游玉明教授为通讯作者，E-mail： xuxiaojiaoyou@ 126. com） 。 * 重庆市教委科技项目（ No. KJ111202 ） ； 重庆文理学院学生科研 项目（ No. XZ20110042） 资助 收稿日期： 2012 － 12 － 18，改回日期： 2013 － 03 － 28
SW-CJ-2D 型超净工作台，苏州净化设备有限公 司； SPX-250B-II 型 生 化 培 养 箱，上 海 跃 进 医 疗 器 械 厂； LDZX-40AL 型 高 压 灭 菌 锅，上 海 申 安 医 疗 器 械 厂； RE-301 型旋转蒸发仪，巩义予华仪器有限公司。 1. 3 实验方法 1. 3. 1 山胡椒不同溶剂提取物的制备
菌抑菌能力不同，其中乙酸乙酯提取物对 5 种供试菌 的抑制效果最好，其对 5 种供试菌的抑制效果按照抑 菌圈直径 由 大 到 小 的 顺 序 为： 枯 草 芽 孢 杆 菌 （ 14. 3 mm） ＞ 荧光假单胞菌（ 12. 9 mm） ＞ 金黄色葡萄球菌 （ 12. 0 mm） ＞ 酿酒酵母（ 10. 9 mm） ＞ 大肠杆菌（ 6. 5 mm） 。其次是 75% 乙醇提取物，其对荧光假单胞菌 的抑菌效果最好，抑菌圈直径为 11. 1 mm，说明山胡 椒提取物对微生物的抑制作用具有选择性。而山胡 椒水提取在每 1 mL 溶液中所含有效成分来源于 2 g 山胡椒粉的浓度下，对 5 种微生物的抑菌圈直径均为 滤纸片直径（ 6. 0 mm） ，即均没有抑制效果。这可能 是因为山胡椒中的主要有效成分如精油、生物碱及萜 类等化合物为极性较弱的物质，在水中溶解度较小， 而在 75% 乙醇及乙酸乙酯这两种提取溶剂中的溶解
萄球菌（ Staphylococcus aureus） 、枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis） 、荧光假单孢菌（ P. Fluorescens） 、酿酒酵母 （ Saccharomycescerevisiae） ，由西南大学食品科学学院 实验中心提供。
营养琼脂培养基，用于细菌培养； 马铃薯培养基 （ PDA） ，用于酵母菌培养。 1. 2 仪器与设备