Fanconi贫血的细胞遗传学研究

Fanconi贫血的细胞遗传学研究

宁夏医学院(银川,750004)　焦海燕　彭　亮　徐　方　陈银涛　墙克信

摘　要　作者对5例F anco ni贫血患者的外周血淋巴细胞染色体的自发畸变及M M C诱变后的染色体畸变进行了观察,发现其自发染色体畸变可见裂隙、断裂、内复制、SCE频率增高等,经M M C诱变后染色体畸变率明显升高,出现三射体、四射体等异常结构,SCE频率骤增。作者认为F A的细胞遗传学研究为F A的临床诊断提供了重要的指标。

关键词　F anco ni贫血　染色体畸变　染色体诱变　临床诊断

Fa nco ni贫血(F anco ni's anemia,F A)是一种以进行性骨髓衰竭为主要特征的常染色体隐性遗传病,临床表现为除全血细胞减、染色体断裂频率增加外,常伴有生长发育迟缓、智能低下、皮肤色素沉着(咖啡色素斑),桡骨和拇指发育不良等先天畸形[1]。国外报道可采用烷化剂丝裂霉素C (mito mgcinc,M M C),替派(T EPA)[2]二环氧丁烷(1,2,3,4-Diepox ybutane,D EB)[3]等方法从细胞遗传学鉴别F A。国内自1963年严文伟[4]首次报道1例后尚有零星报告,但进行细胞遗传学研究者甚少。我们对5例FA患者的外周血淋巴细胞染色体进行了研究,报告如下。

对象与方法

1.对象　1995年3-6月在宁夏医学院附属医院儿科住院确诊为FA的5例患者,其中男2例,女3例。年龄5-12岁,平均年龄8岁,出现症状至确诊时间为1-12岁,其中2例为同胞兄妹,均合并糖尿病,其父母近亲结婚。另1例双亲也为近亲结婚。

2.实验方法

(1)F A患者外周血淋巴细胞染色体观察　取FA患者外周血0.2ml加于4mlR PM I1640培养液中培养72小时。在收集细胞前4小时加入秋水仙素(最终浓度为40L g/ml),按常规方法[5]制片,每例分析100个中期细胞,观察染色体畸变情况。

(2)M M C对F A患者外周血淋巴细胞染色体的诱变　取F A患者外周血0.2ml加于4mlRP M I1640培养液中,24小时后加入M M C (日本产,最终浓度为80L g/m l)继续培养48小时。收集细胞前4小时加入秋水仙素,常规制片,观察染色体畸变情况。

(3)FA患者外周血淋巴细胞SCE(sist er chro matid ex chang e,SCE)及经M M C诱变后外周血淋巴细胞染色体SCE的观察。　取FA患者外周血0.2ml加于4mlRP M I1640培养液中培养24小时后分2组分别加入Budr及Budr和M M C (最终浓度分别为M M C80L g/ml,Budr:10L g/ ml)。避光培养48小时后按常规方法制片。SCE 显色后分析染色体畸变情况。分析时在油镜下选择染色体分散良好,数目完整,姐妹染色单体色差清晰的第2周期(M2期)细胞作SCE计数。凡染色体末端或着丝粒区的交换计一次。染色体臂内中间节段的交换计为2次。计算出每个M2期细胞的SCE数,共计数30个细胞,求其平均值即为SCE频率。

结 果

1.F A患者外周血淋巴细胞染色体自发畸变

F A患者外周血淋巴细胞染色体自发畸变情况见下表及照片。

2.F A患者外周血淋巴细胞经M M C诱变后畸变,经低浓度(80ng/ml)M M C诱变后,所做3例FA患者的外周血淋巴细胞均出现明显畸变。染色单体断裂频率最高增至57次/细胞,并出现核内复制、双着丝粒、三射体、四射体等异常结构, SCE频率增至140次/细胞。(见照片)

讨 论

F A表现为全血细胞减少伴骨髓增生低下及

多种先天畸形。FA病因未明,多数病例有家族史。双亲近亲结婚发病率高。本组5例患者中,3例患儿双亲近亲结婚,提示禁止近亲婚配是降低本病发生的主要手段。

表F A患者染色体畸变与SCE改变

患者编号性别年龄

双亲

近亲

自发性染色体畸变

裂隙断裂其他SC E(次/细胞)

1男10.5+--缺失(0.10)11.60

2女6+--——11.00

3女 6.5+0.530.40核内复制、双着丝粒10.00

4女12--0.27——未做

5男7--4n

未做

图　Fanconi贫血染色体

¹单体断裂,º内复制,»三射体、双着粒,¼M M C诱发SCE,½自发S CE,¾M M C诱发S CE

F A的病理特征是自发性染色体断裂增加及对多种染色体断裂因子敏感。Schreder等报告FA 患者的外周血淋巴细胞染色体畸变较正常人群显著增高。呈现断裂、单体互换、核内复制等[6],但也有认为染色体正常者[7]。本组病例亦有3例患儿染色体有断裂、裂隙、核内复制及双着丝粒等结构畸变。2例患儿染色体正常。已有实验证实F A细胞有A、B二个互补群,并据此推测FA细胞存在2个或多个基因位点[8]。F A患者染色体畸变与否可能与他们所属的互补群不同有关。但F A患者的染色体均对染色体断裂因子敏感。因此,染色体断裂因子诱变实验是确诊FA的重要指标。

由于F A在遗传上具有异质性,故其表型显示多样性。若忽视FA的细胞遗传学指标的检查,则易造成误诊,这也许是F A诊出率较低的原因之一。本研究提示F A的细胞遗传学研究对FA 的诊断具有重要的参考价值,是临床确诊F A不可缺少的依据。把细胞遗传学及分子生物学方法引入FA的研究,将推动F A病因探讨的进程,有助于F A治疗新方法的产生。(下转第38页)

74.4%,说明与生育异常有关。因此应对不明原因的自然流产及生育过智低儿畸形儿的夫妇进行染色体检查,这将有助于病因的探讨,对遗传咨询、产前诊断、优生优育提供正确的指导依据。

2.智低、畸形与染色体:本文对266例智低儿,畸形儿进行了染色体检查,检出异常染色体50例,占18.8%,其中涉及21号染色体所致智低儿35例,占70.0%,另有5例为染色体部分三体型的智低儿,均为携带者所生。因此,应加强对携带者的检查,一旦发现染色体异常的夫妇应做产前检查,以减少智低儿、畸形儿的出生(畸形儿、智低儿只有1/5为染色体疾病,而4/5可能与基因病、围产期出现胎儿宫内缺氧或新生儿窒息所致、缺血缺氧性脑病或儿童期某些疾病所致,因此应做好围产期保健与监护)。

3.原发闭经与染色体:本文对120例原发闭经患者进行了染色体检查,发现异常染色体29例,占2

4.2%,使她们得到了必要的药物治疗或手术治疗,其中5例46,XY的女性患者,在我院手术切除了性腺,防止了肿瘤的发生。

4.泌尿外科与染色体,两性畸形的患者,由于睾丸发育不全或肾上腺皮质功能障碍而使生殖器分化紊乱和性征幼稚,因此有必要进行染色体检查,本文检查50例患者,明确了诊断,并进行了有效的治疗和必要的手术。如有一尿道下裂的患者,出生后按女孩抚养,3岁后按男孩抚养,7岁时来我院泌尿科行修补术,术前做染色体检查,结果是46,X Y,即做子宫造影,结果有正常的子宫。手术切除增大的阴蒂,现已十几岁,已来月经。

5.额外小染色体,又称超数染色体,是指一类多于正常染色体数(2N)的小染色体。本文中,父子染色体核型是47,XY,+mar,表型均正常。根据So udek提出额外小染色体按其性质不同分为两类:一类是有活性的,携带者大多有临床症状;另一类无活性的,携带者大多正常,经给父亲的染色体做C带,银染证实mar有着丝粒及随体。除r DN A外无其它具有重要功能的基因,不会引起表型异常[3]。

6.本文中因死胎,死产(肉眼观胎儿无畸形)进行染色体检查226例占总检人数的11.02%,其中只有3例9号臂间倒位患者,无其染色体异常者(说明死胎与遗传因素相关性不大,而与母儿血型不合、脐带因素、胎盘因素、胎儿宫内感染等有关)。继发闭经者73例,占总检人数的3.56%,无1例染色体异常,由于这二组检出率偏低,影响了总的异常染色体检出率,在今后研究中更应从多方面深入探索其原因。

参　考　文　献

1.王素桂,等.1633例细胞遗传学研究.遗传与疾病,

1987,4(3):172.

2.阎淑清译.有关人类染色体,臂间倒位的研究和文献

回顾.国外医学遗传学分册,1988,1:44.

3.董兆文.人类的额外小染色体问题.国外医学遗传学

分册,1982,(5):229.

(上接第48页)

参　考　文　献

1.杜传书,刘祖洞.医学遗传学.第2版,人民卫生出版

社,1992:705.

2.Cer venka J,et al.M itomgcin C test for diagnostic dif-feren tiation of idiopath ic aplastic anemia.Pediatrics, 1981,67:119.

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4.严文伟,等.Fancon i氏综合征—附一例报告.中华内

科杂志,1963,11(3):179.5.Stern原著,吴　译,人类遗传学原理.科学出版社, 1979:556.

6.Schroeder T M,Kurth R:Spontaneou s chromos om e

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7.Frederick P Li,Potter Nu:Class ical Fan coni's anem ia in a family w ith h ypop latic anemia.J Pediatr,1978,92 (6)943-4.

8.Gordon-Sm ith EC.Fanconi anemia:constitutional

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