人类X染色质的制备与观察
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3．实验结果
3.1 绘图
巴氏小体
细胞体
核体
图一 女生口腔黏膜细胞装片 （10×40）
巴氏小体 巴氏小体
细胞体
核体
图二 女生毛囊细胞装片 （10×40）
图三 男生口腔黏膜细胞装片 （10×40）
未观察到巴氏小体
3.2 结果分析 在制片观察过程中发现，利用男生口腔黏膜细胞制作的装片中的细胞核内物质均匀，但
在实验中通常用口腔粘膜、头发根鞘、外周血细胞等制备 X 染色质。由于取材方便， 方法简单，X 染色质检测广泛应用于性别畸形的诊断中。检查羊水细胞的 X 染色质，还可在 产前诊断胎儿性别。利用 X 染色质的鉴别技术，可以对性染色体畸形、胎儿早期诊断等提供
有益的参考。
2．实验材料
2.1 实验器材和药品： 2.1.1 器材：显微镜，解剖针，盖玻片，载玻片，吸水纸，牙签。 2.1.2 药品：硫瑾染液、1mol/L HCl，蒸馏水。 2.1.3 实验材料：口腔黏膜细胞，毛囊细胞。 2.2 实验过程： 2.2.1 获取实验材料：
道癌细胞。
参考文献
[1] 张贵友等，《普通遗传学实验指导》 清华大学出版社 2003 [2] http://baike.baidu.com/view/344927.htm
Fra Baidu bibliotek
口腔黏膜细胞 取一干净的载玻片，用记号笔在即将涂细胞的一面作个标记。先用水将 口漱净，尽可能除去口中的杂物。然后用牙签钝头在口腔一侧用力刮取，弃去第一次得到的 刮取物，在同一部位继续刮取（这样就可取得深层的表皮细胞），将刮得的细胞涂抹在干净 载玻片上，反复几将从，使玻片上的材料尽量厚些。
毛囊细胞 拔取一根毛根比较大的毛发（头发或其他部位，如手臂上的毛发均可；如可 能，尽量选用白色或浅颜色的毛发，这样在制片中就可减少色素的干扰）。在一张干净的载 玻片中央滴一滴 45%的醋酸，将毛根浸渍其中。静置约 5 分钟，待毛根稍软后用镊子尖或解 剖针尖将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下（用力太大，则可能将毛发上的色素细胞一起刮下， 影响制片效果）。弃去毛干。用解剖针将载玻片上的组织细胞均匀摊平。摊平的材料在空气 中晾干。 2.2.2 染色：
人类 X 染色质的制备与观察
余振洋（高山山、潘红芳）、09 级生技 1 班、200900140156、2011/10/15
摘要 巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的 X 染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋 化），形成直径约 1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。本实验取学生口腔粘膜、头发根鞘细胞制备 X 染色 质，通过染色、压片等方法观察到了 Barr 小体在细胞核内的分布及形态等特征。 关键词 口腔黏膜细胞;头发根鞘细胞；Barr 小体。
20 世纪 60 年代前后，根据对性染色体异常病人的 X 染色体与 X 染色质数目的关系的研 究发现，X 染色质数等于一个个体的 X 染色体数减 1。进一步的研究表明，一个 X 染色质是 一条异染色质化的 X 染色，在间期其 DNA 的复制要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。 在一个个体中，究竟是来自父本还是来自母本的 X 染色体失活，则是随机的，这种随机失活 是生物体内的剂量补偿机制（Lyon，M.，1962）。从上述我们可以看出 X 染色质是一种包含 结构基因的异染色质，这种异染色质通常称为兼性异染色质（facultative chromatin）。
4．讨论
4.1 注意事项 （1）：刮口腔上皮细胞前要漱口；刮取毛囊组织时不宜用力过大，否则可能将毛发上的色素 细胞一起刮下，影响制片效果。 （2）染色时间不要太长，否则核质着色深，X 染色质体不易区分； （3）毛囊细胞要充分解离，压片前可先用解剖针敲片，使细胞解离。 4.2 扩展讨论 4.2.1 在数巴氏小体时常常无法确认那是不是细菌，此时可以调动细准焦螺旋，一般巴氏小 体形状不会变化，而细菌或其他杂质一般会有变化；另外，巴氏小体和核应该处于同一焦平 面，这一点也有助于确认一个黑点是不是巴氏小体。 4.2.2 就算是女性，巴氏小体也不是每个细胞都能看到，因为观察角度不同，可能会被遮掩 或者受细菌的干扰，也就是说，阴性细胞也是可能有巴氏小体的，“阴性”只表示在检测限 制下无法看到。男性也会有巴氏小体，因为男性细胞中的 X 染色体具有很低概率可进入异染 色质状态，从而成为被观测到的“巴氏小体”，这类细胞通常是暂时活动减弱或进入休眠的 细胞。 4.2.3 在优生学中，对于鉴别性别和预防性连锁疾病的发生有重要价值。如：有助于 Turner 综合征之诊断，通常其 X 染色质为 0%；若是 45，X/46，XX 嵌合体则仍可查到 X 染色质，但 数少，<15%。反之，如是 47，XXX、48，XXXX 或 49，XXXXX 则可在同一核内见到 2、3 或 4 个 X 染色质，并且阳性率也大大超出 15～30%，故有助于推断 X 染色体之数目，进而有助于 相关遗传病之诊断。 4.2.4 癌细胞核异常是癌细胞主要形态学特征之一，其中变化之一是女性性染色质小体异 常。出现 2 个或 2 个以上巴氏小体称为染色体异常，多见于癌细胞，特别是乳腺癌，宫颈阴
口腔黏膜细胞 在载玻片上滴加 1MHCl 解离 10 分钟，吸去 HCl，水洗 3 次，后用硫瑾 染色 10 分钟，漂洗，晾干。
毛囊细胞 在载玻片上滴加硫瑾染料染色 10 分钟，后进行压片，压片前可先用解剖针 敲片，使细胞分散。 2.2.3 镜检：
先用低倍镜进行观察，找到形态较清晰的细胞后再转用高倍镜进行观察。
1949 年，Barr 在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体。仔细研究发现这种小体 出现在多数雌猫神经元中，而在雄猫的神经元中则极少出现。他以更多的动物组织做了深入 的研究，结果发现食肉类、偶蹄类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同 样显示这种性别差异。Barr 称这种小体为核仁随体（现在我们通常称之为 Barr 小体，性染 色质小体，或 X 染色质。下文统称这种小体为 X 染色质），并推论这种小体是由性染色体的 异染色质衍化来的。
1． 引言
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的 X 染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染 色质高度螺旋化），形成直径约 1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。在正常女性体内位于间 期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约 1～1.5 um，呈现三角或椭圆形小体，数量为 x 染色体 数减一。巴氏小体是由于女性两个 X 染色体中的一个失活形成的。
基本观察不到巴氏小体。而用女生的口腔黏膜细胞或者毛囊细胞进行观察，则有一部分的装 片可以看到明显的巴氏小体，形状基本为卵形或短棒形（据统计资料，正常女性口腔粘膜细 胞中，X 染色质约 15%左右，平均 16.4%，不超过 30～35%，仅含 1 个 X 染色质。男性只有 0～ 3%，平均 0.7%）。女生口腔黏膜和毛囊装片中观察到的巴氏小体大多数位于核膜边缘，也有 极少数位于核中，这是因为在细胞周期的 S 期中，异染色质比真染色质更晚进行复制，由于 它的螺旋化与其他染色体不同步，而至使被推挤到核膜边缘。
3.1 绘图
巴氏小体
细胞体
核体
图一 女生口腔黏膜细胞装片 （10×40）
巴氏小体 巴氏小体
细胞体
核体
图二 女生毛囊细胞装片 （10×40）
图三 男生口腔黏膜细胞装片 （10×40）
未观察到巴氏小体
3.2 结果分析 在制片观察过程中发现，利用男生口腔黏膜细胞制作的装片中的细胞核内物质均匀，但
在实验中通常用口腔粘膜、头发根鞘、外周血细胞等制备 X 染色质。由于取材方便， 方法简单，X 染色质检测广泛应用于性别畸形的诊断中。检查羊水细胞的 X 染色质，还可在 产前诊断胎儿性别。利用 X 染色质的鉴别技术，可以对性染色体畸形、胎儿早期诊断等提供
有益的参考。
2．实验材料
2.1 实验器材和药品： 2.1.1 器材：显微镜，解剖针，盖玻片，载玻片，吸水纸，牙签。 2.1.2 药品：硫瑾染液、1mol/L HCl，蒸馏水。 2.1.3 实验材料：口腔黏膜细胞，毛囊细胞。 2.2 实验过程： 2.2.1 获取实验材料：
道癌细胞。
参考文献
[1] 张贵友等，《普通遗传学实验指导》 清华大学出版社 2003 [2] http://baike.baidu.com/view/344927.htm
Fra Baidu bibliotek
口腔黏膜细胞 取一干净的载玻片，用记号笔在即将涂细胞的一面作个标记。先用水将 口漱净，尽可能除去口中的杂物。然后用牙签钝头在口腔一侧用力刮取，弃去第一次得到的 刮取物，在同一部位继续刮取（这样就可取得深层的表皮细胞），将刮得的细胞涂抹在干净 载玻片上，反复几将从，使玻片上的材料尽量厚些。
毛囊细胞 拔取一根毛根比较大的毛发（头发或其他部位，如手臂上的毛发均可；如可 能，尽量选用白色或浅颜色的毛发，这样在制片中就可减少色素的干扰）。在一张干净的载 玻片中央滴一滴 45%的醋酸，将毛根浸渍其中。静置约 5 分钟，待毛根稍软后用镊子尖或解 剖针尖将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下（用力太大，则可能将毛发上的色素细胞一起刮下， 影响制片效果）。弃去毛干。用解剖针将载玻片上的组织细胞均匀摊平。摊平的材料在空气 中晾干。 2.2.2 染色：
人类 X 染色质的制备与观察
余振洋（高山山、潘红芳）、09 级生技 1 班、200900140156、2011/10/15
摘要 巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的 X 染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋 化），形成直径约 1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。本实验取学生口腔粘膜、头发根鞘细胞制备 X 染色 质，通过染色、压片等方法观察到了 Barr 小体在细胞核内的分布及形态等特征。 关键词 口腔黏膜细胞;头发根鞘细胞；Barr 小体。
20 世纪 60 年代前后，根据对性染色体异常病人的 X 染色体与 X 染色质数目的关系的研 究发现，X 染色质数等于一个个体的 X 染色体数减 1。进一步的研究表明，一个 X 染色质是 一条异染色质化的 X 染色，在间期其 DNA 的复制要比其他的染色体晚（Morishima，1962）。 在一个个体中，究竟是来自父本还是来自母本的 X 染色体失活，则是随机的，这种随机失活 是生物体内的剂量补偿机制（Lyon，M.，1962）。从上述我们可以看出 X 染色质是一种包含 结构基因的异染色质，这种异染色质通常称为兼性异染色质（facultative chromatin）。
4．讨论
4.1 注意事项 （1）：刮口腔上皮细胞前要漱口；刮取毛囊组织时不宜用力过大，否则可能将毛发上的色素 细胞一起刮下，影响制片效果。 （2）染色时间不要太长，否则核质着色深，X 染色质体不易区分； （3）毛囊细胞要充分解离，压片前可先用解剖针敲片，使细胞解离。 4.2 扩展讨论 4.2.1 在数巴氏小体时常常无法确认那是不是细菌，此时可以调动细准焦螺旋，一般巴氏小 体形状不会变化，而细菌或其他杂质一般会有变化；另外，巴氏小体和核应该处于同一焦平 面，这一点也有助于确认一个黑点是不是巴氏小体。 4.2.2 就算是女性，巴氏小体也不是每个细胞都能看到，因为观察角度不同，可能会被遮掩 或者受细菌的干扰，也就是说，阴性细胞也是可能有巴氏小体的，“阴性”只表示在检测限 制下无法看到。男性也会有巴氏小体，因为男性细胞中的 X 染色体具有很低概率可进入异染 色质状态，从而成为被观测到的“巴氏小体”，这类细胞通常是暂时活动减弱或进入休眠的 细胞。 4.2.3 在优生学中，对于鉴别性别和预防性连锁疾病的发生有重要价值。如：有助于 Turner 综合征之诊断，通常其 X 染色质为 0%；若是 45，X/46，XX 嵌合体则仍可查到 X 染色质，但 数少，<15%。反之，如是 47，XXX、48，XXXX 或 49，XXXXX 则可在同一核内见到 2、3 或 4 个 X 染色质，并且阳性率也大大超出 15～30%，故有助于推断 X 染色体之数目，进而有助于 相关遗传病之诊断。 4.2.4 癌细胞核异常是癌细胞主要形态学特征之一，其中变化之一是女性性染色质小体异 常。出现 2 个或 2 个以上巴氏小体称为染色体异常，多见于癌细胞，特别是乳腺癌，宫颈阴
口腔黏膜细胞 在载玻片上滴加 1MHCl 解离 10 分钟，吸去 HCl，水洗 3 次，后用硫瑾 染色 10 分钟，漂洗，晾干。
毛囊细胞 在载玻片上滴加硫瑾染料染色 10 分钟，后进行压片，压片前可先用解剖针 敲片，使细胞分散。 2.2.3 镜检：
先用低倍镜进行观察，找到形态较清晰的细胞后再转用高倍镜进行观察。
1949 年，Barr 在猫神经元核仁附近发现一种染色很深的小体。仔细研究发现这种小体 出现在多数雌猫神经元中，而在雄猫的神经元中则极少出现。他以更多的动物组织做了深入 的研究，结果发现食肉类、偶蹄类、灵长类（包括人类）等动物的不同组织的体细胞中，同 样显示这种性别差异。Barr 称这种小体为核仁随体（现在我们通常称之为 Barr 小体，性染 色质小体，或 X 染色质。下文统称这种小体为 X 染色质），并推论这种小体是由性染色体的 异染色质衍化来的。
1． 引言
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的 X 染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染 色质高度螺旋化），形成直径约 1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。在正常女性体内位于间 期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约 1～1.5 um，呈现三角或椭圆形小体，数量为 x 染色体 数减一。巴氏小体是由于女性两个 X 染色体中的一个失活形成的。
基本观察不到巴氏小体。而用女生的口腔黏膜细胞或者毛囊细胞进行观察，则有一部分的装 片可以看到明显的巴氏小体，形状基本为卵形或短棒形（据统计资料，正常女性口腔粘膜细 胞中，X 染色质约 15%左右，平均 16.4%，不超过 30～35%，仅含 1 个 X 染色质。男性只有 0～ 3%，平均 0.7%）。女生口腔黏膜和毛囊装片中观察到的巴氏小体大多数位于核膜边缘，也有 极少数位于核中，这是因为在细胞周期的 S 期中，异染色质比真染色质更晚进行复制，由于 它的螺旋化与其他染色体不同步，而至使被推挤到核膜边缘。