大孔吸附树脂纯化甘草提取物中甘草酸的研究

大孔吸附树脂纯化甘草提取物中甘草酸的研究
目的研究光果甘草中甘草酸的最佳大孔树脂纯化工艺。

方法以大孔吸附树脂纯化物中甘草酸的含量为考察指标，从24种大孔吸附树脂中筛选出纯化甘草粗提物中甘草酸的最佳大孔吸附树脂，并确定纯化甘草酸的最佳工艺条件。

结果AB-8大孔吸附树脂纯化甘草酸效果最佳，最佳工艺条件：上柱液浓度为0.11mg/mL，径高比为1：8，上样体积为所用树脂2BV，上样速度与洗脱速度均为2BV/h，用30%、50%的乙醇除杂，用80%乙醇富集甘草酸。

纯化后产品纯度为60.74%，收率为3.29%，转移率为76.33%。

结论采用AB-8大孔吸附树脂可较好地纯化甘草酸。

标签：甘草；甘草酸；AB-8大孔吸附树脂
药用甘草为豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fish.），胀果甘草（Glycyrrhiza inflata Batalin）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根茎[1]。

甘草为药食两用植物，甘草酸又称甘草皂苷，是甘草的主要活性成分之一，具有促肾上腺皮质激素作用，能减少尿量及钠排出，增加钾排出，血钠上升，血钙降低。

可用于解毒，抗炎[2]，镇咳，抗肿瘤，抗溃疡，抗菌等[3]。

近年来的药理研究发现，甘草酸类药物对防治病毒性肝炎、高血脂症和癌症等疾病有一定的疗效[3-4]，对艾滋病毒也有一定的抑制增殖作用[5]。

长期以来，我国是甘草主要出口国，但产品多为原草或浸膏等初加工产品，缺乏深加工。

研究有工业应用价值的甘草酸分离与精制技术具有重要意义。

本实验将考察24种大孔树脂，选择出最优树脂进行甘草酸的纯化实验，并确定纯化的最佳条件。

制定出稳定可靠，成本低廉的纯化工艺，以期对工业化生产有所帮助。

1 材料
LC-2010A高效液相色谱仪（日本岛津公司），FA10004N型万分之一分析天平（上海精密科学仪器有限公司），树脂（河北沧州宝恩吸附材料有限公司），甲醇色谱纯（天津市康科德科技有限公司），冰醋酸分析纯（天津市康科德科技有限公司），醋酸铵分析纯（天津市北方天医化学试剂场），光果甘草（购于河北安国药市长安中药材有限公司，经李天翔教授（天津中医药大学）鉴定），剪段约为3cm，砸至酥松，50℃干燥备用。

甘草酸单铵盐对照品（批号为110731-201115，购于天津市药品检验所，纯度>98%）。

2 方法与结果
2.1甘草酸含量测定
2.1.1色谱条件色譜柱为MERITECH-C18柱（4.6mm×200mm，5μm），流动相：甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67：32：1），柱温：30℃，流速：1ml/min，
检测波长：254nm，进样体积10μl[6]。

2.1.2对照品溶液制备精密称取甘草酸单铵盐对照品，置于5ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，制成0.2165mg/ml的标准溶液，冷藏备用。

2.1.3供试品溶液制备0.3%的氨水按液料比12：1与甘草饮片回流提取1.5h，提取2次，合并提取液，浓缩后干燥得粗提物样品。

精密称取甘草粗提取物样品0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25ml，称定重量，超声处理20min，取出，放冷，再称定重量，用流动相补足减失重量，摇匀，滤过，即得。

2.1.4标准曲线的制备[6] 精密吸取甘草酸单铵盐对照品液2、6、10、14、18、20μl 分别注入液相色谱仪，以峰面积（A）对质量数（M）进行线性回归计算。

以对照品质量数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，得回归方程为Y=9.6E+5x -10356，r2=0.9999。

结果表明，甘草酸在0.4330～
3.8970μg呈良好的线性关系（见图1）。

2.1.5精密度试验分别精密吸取供试品溶液10μl，重复进样5次，按”2.1”中的色谱条件测定，记录色谱，测得甘草酸峰面积，得RSD=1.41%。

表明甘草酸精密度良好。

2.1.6重复性试验取样品按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μl进样，记录色谱，测得甘草酸面积，得RSD=2.12%。

表明甘草酸重复性良好。

2.1.7稳定性试验取供试品溶液分别在0、2、4、6、8、10、24h进样，测定峰面积积分值，得RSD=1.12%。

结果表明甘草酸在24h内稳定性良好。

2.1.8加样回收率试验精密称取已知含量的甘草粗提物粉末约0.05 g，加入甘草酸对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，测定其含量，并计算回收率，结果见表1。

RSD=0.94%，表明此法加样回收率良好。

2.2 大孔吸附树脂纯化甘草酸工艺参数
2.2.1 大孔树脂的活化精密称取1g大孔树脂封于热封型茶袋中，放入足量无水乙醇中浸泡3h，蒸馏水洗至无醇味，置5%盐酸中浸泡2～3h后，蒸馏水洗至中性[7]，待用。

2.2.2大孔树脂的筛选精密称取1g经处理后的不同型号大孔树脂封于热风型茶袋中，置于15ml离心管中，加10mL甘草供试品溶液于离心管，振摇5h，取样，测定其中甘草酸浓度计算吸附率。

大孔树脂继续饱和至24h后弃去药液，加入10ml60%乙醇，振摇5h后，取样，测定其中甘草酸浓度，计算解析率。

综合吸附与解吸附情况，结果表明AB-8型大孔吸附树脂纯化甘草酸效果最佳。

吸附量为9.8900mg/g，吸附率为96.53%，解析率为62.92%（见表2）。

2.2.3最佳大孔树脂的吸附和解吸附情况考察精密称取5份1g经过处理的AB-8大孔树脂封于热风型茶袋中，置于15ml离心管中，加10ml甘草供试品溶液于离心管，振摇5h。

取样，测定其中甘草酸浓度，计算吸附率。

大孔树脂继续饱和至24h后弃去药液，加入10mL60%乙醇，振摇2h后，取样，测定其中甘草酸浓度，计算解析率。