定性免疫学检验的性能验证和质量控制PPT培训课件

分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
两种不同方法的不精密度曲线比较
如何获得 “临界点（C50）”
检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的临界 浓度，但需验证。
如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一系列 稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得50% 阳性和50%阴性结果的那个稀释度，这一稀释度的分 析物浓度即为临界点（C50）。
（一）不精密度的验证
纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检 测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性 检测方法的不精密度。 量值化定性试验：以COI（cut-off Index）或S/CO 比值作为分析方法的精密度评价指标。
纯定性测定不精密度的评估方法
定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（ 亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。
C5
C95 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳 性结果时该分析物的浓度。
C95
性能验证的样本准备
质控品：商用或自备，含阳性和阴性。 C50和C5（C50-20%）及C95（C50+20%）浓度样本： 用于重复性及最低检出限验证，不少于40次检测量。 临床样本或血清盘：用于准确性验证，不少于50份 阳性和阴性样本。
不精密度评价结果判断-4
用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致 结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
数值化定性免疫测定的精密度评价方法
有些定性免疫测定，如ELISA等，样本的测定结果 可以COI（cut-off Index）或S/CO比值来表示，检测 系统或试剂厂家会在其试剂说明书中给出试剂的批内 和批间变异，这对于对实验室评价试剂的精密度以及 评估其室内质控的批间变异结果有参考价值。
分为批内精密度评估和批间精密度评估
精密度评估的基本原则（1）
操作者必须熟悉检测系统工作原理，了解并掌握仪 器的操作步骤和各项注意事项，应在评估阶段维持仪 器的可靠和稳定。
用于评估试验的样本一般常采用临床实验室收集的 血清(浆)样本；当实验室收集的样本不稳定或不易得 到时，也可考虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商品 物质，如校准品或质控品。
不精密度评价结果判断-2
-20%～+20%浓度范围包含了C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样 本检测结果一致
不精密度评价结果判断-3
用该方法检测，C50+20%的样本检测结果一致，C50-20%的样本不一定能得到一致 结果；需要用低于C50更大百分率浓度的样本（如-30%）进行补充试验。
定性免疫学 检验的性能 验证和质量
控制
一、定性免疫试验的性能验证
CNAS-CL39：2012《医学实验室质量和能力认可准 则》在临床免疫学检验领域的应用说明：
检验方法和程序的分析性能验证内容应参考试剂 盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少应包 括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临床诊 断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比对） ，精密度（包括重复性和批间精密度）；并应明确检 验项目的预期用途，如筛查、诊断、确认。
纯定性试验不精密度评价步骤
制备评价用样本 制备3份样本：一份浓度为C50，一份为C50+20%
，一份为C50-20%。 每份样本的体积需保证40次或更多次重复检测的
需要。 评价方法
每份样本检测40次，确定每一份样本结果为阳性 和阴性的百分比。
不精密度评价结果判断-1
-20%～+20%浓度范围在C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样 本检测结果不一致；此结论错误率5% ，需使用更宽浓度范围的样本（如±30%） 进行另外的试验。
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
批间精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在10天以上时间 内单次重复进行至少20批检测，计算所得S/CO值的均 值和SD，计算批间CV%。 质量控制： 判 断 结 论 ： 应 ≤ 试 剂 说 明 书 所 标 明 的 批 间 变 异 。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。
（二）检出限的验证
性能验证相关概念
筛查试验 诊断试验 确认实验 C50 C5 C95
临界点（C50）浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。对特定试剂， C50一旦确定，是恒定不变的。
C50
C5 浓度的定义
一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的浓度。
精密度评估的基本原则（2）
评估精密度时，应至少评估两个浓度水平样本的精 密度。
所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少 有一个浓来自百度文库在医学决定水平左右，在定性测定，即为 接近临界水平的浓度。
批内精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内 重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD ，计算批内CV%。 质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。 判 断 结 论 ： 应 ≤ 试 剂 说 明 书 所 标 明 的 批 内 变 异 。 ELISA的批内变异CV%应≤10%。
检出限的验证方法
样本选择：评估试剂分析灵敏度所使用的样本，如 检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国 家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品 ，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质， 或与国际标准物质溯源的样本。