精子DNA损伤与常规体外受精_胚胎移植结局关系研究_曾玖芝
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Ａ ＳＴＵＤＹ ＯＮ ＣＯＲＲＥＬＡＴＩＯＮ ＢＥＴＷＥＥＮ ＳＰＥＲＭ ＤＮＡ ＤＡＭＡＧＥ ＡＮＤ ＴＨＥ ＯＵＴＣＯＭＥＳ ＯＦ ＩＮ ＶＩＴＲＯ ＦＥＲＴＩＬＩＺＡＴＩＯＮ—ＥＭＢＲＹＯ ＴＲＡＮＳＦＥＲ
Ｚｅｎｇ Ｊｉｕｚｈｉ，Ｙｕａｎ Ｈｕａ，Ｇｏｎｇ Ｙａｎ，Ｌｉａｎｇ Ｍｅｉｙｕ，Ｍａ Ｒｏｎｇｎｉｎｇ，Ｘｉｏｎｇ Ｄｏｎｇｓｈｅｎｇ．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｐｒｏ－ ｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｏｒ Ｗｏｍｅｎ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００４１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔ－ ｃｏｍｅｓ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ－ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ（ＩＶＦ－ＥＴ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＩＶＦ ｃｙｃｌｅｓ ｆｒｏｍ １６９ｃｏｕｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ．ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ （ＤＦＩ）ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ｓｐｅｒｍ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ＤＦＩ＜１５％，３０％ ＞ＤＦＩ≥１５％ ａｎｄ ＤＦＩ≥３０％ ｇｒｏｕｐｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＤＦＩ ｖａｌｕｅｓ．Ｔｈｅ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ＩＶＦ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＤＦＩ ａｎｄ ｔｈｅ ＩＶＦ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａ－ ｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｏｗｅｒ ｉｎ ＤＦＩ≥３０％ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｃｌｅａｖａｇｅ ｒａｔｅ，ｕｓｅｆｕｌ ｅｍｂｒｙｏｓ ｒａｔｅ， ｇｏｏｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｅｍｂｒｙｏｓ ｒａｔｅ，ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｒａｔｅ ａｎｄ ａｂｏｒｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ． ＤＦＩ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｐ ＜０．０５）．Ｔｈｅ ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｒｅｃｅｉｖｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｕｒｖｅ（ＡＵＣ）ｗａｓ ０．６６９ （９５％ ＣＩ＝０．５３４～０．８０３）ｆｏｒ ３０．７０％ ｏｆ ＳＤＦ． Ｔｈｅ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ３０．７０％ ｗａｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ａｓ ｃｕｔ－ｏｆｆ ｖａｌｕｅ ｔｏ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ ａｂｎｏｒｍａｌ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｒａｔｅ．Ｂｙ ｔｈｉｓ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗａｓ ９３．１０％ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ４１．６７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｈａｓ ａｎ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ＩＶＦ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｅｄｉｃｔ ＩＶＦ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｓｐｅｒｍ；ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ；ｏｕｔｃｏｍｅ
＊ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 （Ｎｏ．８１２００４５３） △ 通 信 作 者 ，Ｅ－ｍａｉｌ：Ｙｕａｎ－ｈｕａ２００８＠１６３．ｃｏｍ １ 广西医科大学第一附属医院生殖医学中心 南宁 ５３００２１ 收 稿 日 期 ：２０１５－０２－１０
外 受 精 — 胚 胎 移 植 （ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ， ＩＶＦ－ＥＴ）结局是否 有 关，是 否 有 助 于 预 测 ＩＶＦ 结 局、指 导 受 精方式 的 选 择，目 前 尚 有 争 议。 在 本 研 究 中，我 们 对 常 规 ＩＶＦ 患者的精液标 本 进 行 ＤＮＡ 碎 片 的 检 测，并 与ＩＶＦ 相 关 指标进行分析，探讨其与ＩＶＦ 结局的关系。
１６９ 对 患 者 获 临 床 妊 娠 ７２ 周 期 ，周 期 妊 娠 率 ４２．６％ 。 根 据 ＤＦＩ将 患 者 分 为 Ａ 组 （ＤＦＩ＜１５％）、Ｂ 组 （３０％ ＞ＤＦＩ≥ １５％）、Ｃ 组（ＤＦＩ≥３０％）。３ 组 间 女 方 年 龄、不 孕 时 间、获 卵 数、移植日内膜厚 度、平 均 移 植 胚 胎 个 数 差 异 均 无 统 计 学 意 义（Ｐ ＞０．０５），见表１。 ２．１ 不同 ＤＦＩ组间ＩＶＦ－ＥＴ 结局比较：Ｃ 组受精率及正常 受 精率均低于 Ａ 组和 Ｂ 组（Ｐ ＜０．０１，Ｐ ＜０．０５），其 余 指 标 组 间两两比较差异均无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表２。
作为男性生育 力 的 评 价 指 标 之 一，精 子 ＤＮＡ 损 伤 越 来 越受到重视。有研究发现男性生育 能 力 随 精 子 ＤＮＡ 碎 片 率 （ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ，ＤＦＩ）的 上 升 而 下 降，其 在 评 价 男 性 生 育 力 方 面 优 于 常 规 指 标 。 ［１，２］ 然 而 ，精 子 ＤＮＡ 损 伤 与 体
摘要 目的：探讨精子 ＤＮＡ 损伤对常规体外受精—胚胎移 植（ＩＶＦ－ＥＴ）胚 胎 质 量 结 局 及 临 床 结 局 的 影 响。 方 法：对 １６９ 例 行 常 规ＩＶＦ 治疗的夫妇用精子染色质扩散实验（ＳＣＤ）测定精子 ＤＮＡ 碎片率（ＤＦＩ），据 ＤＦＩ值将患者分为 ＤＦＩ＜１５％、３０％＞ＤＦＩ ≥１５％和 ＤＦＩ≥３０％ ３组，比较３组间受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优 质 胚 胎 率、着 床 率、临 床 妊 娠 率 和 流 产 率 并进行相关性分析。结果：精 子 ＤＦＩ≥３０％ 组 受 精 率、正 常 受 精 率 均 显 著 低 于 ＤＦＩ＜１５％ 组 和 ３０％ ＞ＤＦＩ≥１５％ 组 （Ｐ ＜ ０．０５），其余指标 ３ 组 间 比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 （Ｐ ＞０．０５）。 精 子 ＤＦＩ与ＩＶＦ－ＥＴ 受 精 率、正 常 受 精 率 呈 显 著 负 相 关 关 系 （ｒ ＝－０．２８４，－０．１８７，Ｐ ＜０．０５）。 精 子 ＤＦＩ预 测 受 精 异 常 的 ＲＯＣ 曲 线 下 面 积 为 ０．６６９（９５％ ＣＩ ０．５３４～０．８０３），截 断 值 ３０．７０％，敏感性４１．６７％，特异性９３．１０％。结论：精子 ＤＮＡ 损伤对ＩＶＦ－ＥＴ 中的受精情况有负面影响，可用于预测受精异常。 关键词 精子；ＤＮＡ 碎片指数；体外受精；结局 中 图 分 类 号 ：Ｒ６９８．２ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００５－９３０Ｘ（２０１５）０４－０５６４－０４ DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2015.04.010
析。计量 资 料 用 均 数 ± 标 准 差 （ｘ珚±ｓ）表 示，组 间 均 数 比 较
采
用
单
因
素
方
差
分
析
；计
数
资
料
以
率
表
示
，采
用
２
χ
检
验
；两
变
量间的 相 关 性 分 析 采 用 Ｐｅａｒｓｏｎ 相 关 分 析；指 标 预 测 采 用
ＲＯＣ 曲线分析。Ｐ ＜０．０５为差异有统计学意义。
２ 结 果
１．２．３ 精 子 ＤＮＡ 碎 片 检 测：采 用 精 子 染 色 质 扩 散 实 验
（ｓｐｅｒｍ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ，ＳＣＤ），试 剂 购 自 深 圳 博 锐 德 生
生物科技有限公司，批内差 异 ≤８％，批 间 差 异 ≤１０％。 严 格
按照说明书 进 行 操 作，在 普 通 光 学 显 微 镜 下 观 察 ５００ 个 精
１ 资 料 与 方 法
１．１ 一 般 资 料 ：选 取 ２０１２ 年 １０ 月 至 ２０１４ 年 １１ 月 在 四 川 省 妇幼保健院采用黄体中期短效 长 方 案 完 成 控 制 性 超 排 卵 、取
Hale Waihona Puke Baidu
曾玖芝，等 ．精子 ＤＮＡ 损伤与常规体外受精—胚胎移植结局关系研究
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卵、移植，并进 行 常 规ＩＶＦ 治 疗 的 １６９ 例 不 孕 夫 妇。 女 方 年 龄 ２２～３８ 岁 ，平 均 （３０．１９±４．１２）岁 ，男 方 年 龄 ２３～４８ 岁 ，平 均（３２．６３±５．０７）岁。其中原 发 不 孕 ６５ 对，占 ３８．４６％，继 发 不孕１０４对，占６１．５４％。夫妇双方染色 体 为 正 常 核 型，男 性 检查包括第二 性 征、阴 茎、阴 囊、精 索、输 精 管、附 睾、睾 丸 等 均 无 异 常 ，排 除 重 度 少 弱 精 子 症 患 者 。 １．２ 方 法 １．２．１ 标本收集：在女方取 卵 前 ２ 周 内，男 方 取 精 液 进 行 检 查。要求：禁欲 ２～７ｄ，手 淫 法 收 集 新 鲜 精 液 于 取 精 杯 内 ， ３７ ℃环境下液化后将 标 本 分 成 两 份，一 份 行 常 规 精 液 分 析； 另一份用于 ＤＮＡ 碎片检测。 １．２．２ ＩＶＦ－ＥＴ：均采用黄 体 中 期 短 效 长 方 案 进 行 控 制 性 超 排卵，控制性促排卵药物均采 用 醋 酸 曲 谱 瑞 林 （达 必 佳，德 国 辉凌制药有 限 公 司，０．１ ｍｇ／支）和 注 射 用 重 组 促 卵 泡 素 （果 纳芬，默 克 雪 兰 诺 有 限 公 司，４５０ Ｕ／支），阴 道 Ｂ 超 结 合 血 清 激素监测，注射 ＨＣＧ ３６ｈ后取卵，取 卵 后 ４～６ｈ常 规ＩＶＦ， ７２ｈ后 选 择 ２～３ 个 胚 胎 移 植，常 规 黄 体 酮 针 剂 进 行 黄 体 支 持，移植后１２～１４ｄ查血 ＨＣＧ，呈阳性者３周后行阴道 Ｂ 超 检查，见到妊娠囊者确认临床妊娠。受精１６～１８ｈ机械 法 去 除颗粒细胞，观察到双原核的 受 精 卵 确 定 正 常 受 精。 双 原 核 受精卵数／获卵数×１００％计算 正 常 受 精 率，受 精 后 第 ３ 天 卵 裂球≥６，ＤＮＡ 碎 片 ≤２０％ 的 胚 胎 为 优 质 胚 胎，优 质 胚 胎 数／ 第 ３ 天 可 利 用 胚 胎 ×１００％ 计 算 优 质 胚 胎 率 。
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ＪＯＵ广ＲＮＡＬ西 ＯＦ Ｇ医ＵＡＮ科ＧＸＩ Ｍ大ＥＤＩＣＡ学Ｌ ＵＮ学ＩＶＥＲ报ＳＩＴＹ ２０１５ Ａｕｇ；３２（４）
精子 ＤＮＡ 损伤与常规体外受精—胚胎移植结局关系研究＊
曾玖芝 袁 华１△ 龚 衍 梁梅玉 马蓉宁 熊东升
（四 川 省 妇 幼 保 健 院 生 殖 医 学 中 心 成 都 ６１００４１）
表 １ ３ 组 一 般 情 况 比 较 （ｘ珚±ｓ）
组别
Ａ组 Ｂ组 Ｃ组 Ｐ
ｎ
女方年龄 （岁 ）
不孕时间 （ｔ／年 ）
获卵数 （ｎ ）
移植日内膜 平均移植胚 厚度（ｌ／ｍｍ） 胎数（ｎ ）
子，计数存在 ＤＮＡ 碎片的精子数量。 判 断 标 准：精 子 头 部 仅
产生较小的光晕或无光晕，或单 侧 光 晕 的 厚 度 不 超 过 精 子 头
部最小直径的１／３，均被判 断 为 存 在 ＤＮＡ 碎 片 的 精 子。ＤＦＩ
＝存在 ＤＮＡ 碎片的精子数／计数精子总数×１００％。
１．２．４ 统 计 学 处 理：采 用 ＳＰＳＳ１３．０ 统 计 软 件 进 行 数 据 分
Ｚｅｎｇ Ｊｉｕｚｈｉ，Ｙｕａｎ Ｈｕａ，Ｇｏｎｇ Ｙａｎ，Ｌｉａｎｇ Ｍｅｉｙｕ，Ｍａ Ｒｏｎｇｎｉｎｇ，Ｘｉｏｎｇ Ｄｏｎｇｓｈｅｎｇ．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｒｅｐｒｏ－ ｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｏｒ Ｗｏｍｅｎ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６１００４１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｏｎ ｔｈｅ ｅｍｂｒｙｏ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔ－ ｃｏｍｅｓ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ－ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ（ＩＶＦ－ＥＴ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＩＶＦ ｃｙｃｌｅｓ ｆｒｏｍ １６９ｃｏｕｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ．ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ （ＤＦＩ）ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ｓｐｅｒｍ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ＤＦＩ＜１５％，３０％ ＞ＤＦＩ≥１５％ ａｎｄ ＤＦＩ≥３０％ ｇｒｏｕｐｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＤＦＩ ｖａｌｕｅｓ．Ｔｈｅ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ＩＶＦ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＤＦＩ ａｎｄ ｔｈｅ ＩＶＦ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａ－ ｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｏｗｅｒ ｉｎ ＤＦＩ≥３０％ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｃｌｅａｖａｇｅ ｒａｔｅ，ｕｓｅｆｕｌ ｅｍｂｒｙｏｓ ｒａｔｅ， ｇｏｏｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｅｍｂｒｙｏｓ ｒａｔｅ，ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｒａｔｅ ａｎｄ ａｂｏｒｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ． ＤＦＩ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ（Ｐ ＜０．０５）．Ｔｈｅ ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｒｅｃｅｉｖｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ ｃｕｒｖｅ（ＡＵＣ）ｗａｓ ０．６６９ （９５％ ＣＩ＝０．５３４～０．８０３）ｆｏｒ ３０．７０％ ｏｆ ＳＤＦ． Ｔｈｅ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ３０．７０％ ｗａｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ａｓ ｃｕｔ－ｏｆｆ ｖａｌｕｅ ｔｏ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ ａｂｎｏｒｍａｌ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｒａｔｅ．Ｂｙ ｔｈｉｓ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｗａｓ ９３．１０％ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ４１．６７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｓｐｅｒｍ ＤＮＡ ｄａｍａｇｅ ｈａｓ ａｎ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ＩＶＦ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｒｅｄｉｃｔ ＩＶＦ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｓｐｅｒｍ；ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ；ｏｕｔｃｏｍｅ
＊ 基 金 项 目 ：国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 （Ｎｏ．８１２００４５３） △ 通 信 作 者 ，Ｅ－ｍａｉｌ：Ｙｕａｎ－ｈｕａ２００８＠１６３．ｃｏｍ １ 广西医科大学第一附属医院生殖医学中心 南宁 ５３００２１ 收 稿 日 期 ：２０１５－０２－１０
外 受 精 — 胚 胎 移 植 （ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｍｂｒｙｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ， ＩＶＦ－ＥＴ）结局是否 有 关，是 否 有 助 于 预 测 ＩＶＦ 结 局、指 导 受 精方式 的 选 择，目 前 尚 有 争 议。 在 本 研 究 中，我 们 对 常 规 ＩＶＦ 患者的精液标 本 进 行 ＤＮＡ 碎 片 的 检 测，并 与ＩＶＦ 相 关 指标进行分析，探讨其与ＩＶＦ 结局的关系。
１６９ 对 患 者 获 临 床 妊 娠 ７２ 周 期 ，周 期 妊 娠 率 ４２．６％ 。 根 据 ＤＦＩ将 患 者 分 为 Ａ 组 （ＤＦＩ＜１５％）、Ｂ 组 （３０％ ＞ＤＦＩ≥ １５％）、Ｃ 组（ＤＦＩ≥３０％）。３ 组 间 女 方 年 龄、不 孕 时 间、获 卵 数、移植日内膜厚 度、平 均 移 植 胚 胎 个 数 差 异 均 无 统 计 学 意 义（Ｐ ＞０．０５），见表１。 ２．１ 不同 ＤＦＩ组间ＩＶＦ－ＥＴ 结局比较：Ｃ 组受精率及正常 受 精率均低于 Ａ 组和 Ｂ 组（Ｐ ＜０．０１，Ｐ ＜０．０５），其 余 指 标 组 间两两比较差异均无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表２。
作为男性生育 力 的 评 价 指 标 之 一，精 子 ＤＮＡ 损 伤 越 来 越受到重视。有研究发现男性生育 能 力 随 精 子 ＤＮＡ 碎 片 率 （ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ，ＤＦＩ）的 上 升 而 下 降，其 在 评 价 男 性 生 育 力 方 面 优 于 常 规 指 标 。 ［１，２］ 然 而 ，精 子 ＤＮＡ 损 伤 与 体
摘要 目的：探讨精子 ＤＮＡ 损伤对常规体外受精—胚胎移 植（ＩＶＦ－ＥＴ）胚 胎 质 量 结 局 及 临 床 结 局 的 影 响。 方 法：对 １６９ 例 行 常 规ＩＶＦ 治疗的夫妇用精子染色质扩散实验（ＳＣＤ）测定精子 ＤＮＡ 碎片率（ＤＦＩ），据 ＤＦＩ值将患者分为 ＤＦＩ＜１５％、３０％＞ＤＦＩ ≥１５％和 ＤＦＩ≥３０％ ３组，比较３组间受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优 质 胚 胎 率、着 床 率、临 床 妊 娠 率 和 流 产 率 并进行相关性分析。结果：精 子 ＤＦＩ≥３０％ 组 受 精 率、正 常 受 精 率 均 显 著 低 于 ＤＦＩ＜１５％ 组 和 ３０％ ＞ＤＦＩ≥１５％ 组 （Ｐ ＜ ０．０５），其余指标 ３ 组 间 比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 （Ｐ ＞０．０５）。 精 子 ＤＦＩ与ＩＶＦ－ＥＴ 受 精 率、正 常 受 精 率 呈 显 著 负 相 关 关 系 （ｒ ＝－０．２８４，－０．１８７，Ｐ ＜０．０５）。 精 子 ＤＦＩ预 测 受 精 异 常 的 ＲＯＣ 曲 线 下 面 积 为 ０．６６９（９５％ ＣＩ ０．５３４～０．８０３），截 断 值 ３０．７０％，敏感性４１．６７％，特异性９３．１０％。结论：精子 ＤＮＡ 损伤对ＩＶＦ－ＥＴ 中的受精情况有负面影响，可用于预测受精异常。 关键词 精子；ＤＮＡ 碎片指数；体外受精；结局 中 图 分 类 号 ：Ｒ６９８．２ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００５－９３０Ｘ（２０１５）０４－０５６４－０４ DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2015.04.010
析。计量 资 料 用 均 数 ± 标 准 差 （ｘ珚±ｓ）表 示，组 间 均 数 比 较
采
用
单
因
素
方
差
分
析
；计
数
资
料
以
率
表
示
，采
用
２
χ
检
验
；两
变
量间的 相 关 性 分 析 采 用 Ｐｅａｒｓｏｎ 相 关 分 析；指 标 预 测 采 用
ＲＯＣ 曲线分析。Ｐ ＜０．０５为差异有统计学意义。
２ 结 果
１．２．３ 精 子 ＤＮＡ 碎 片 检 测：采 用 精 子 染 色 质 扩 散 实 验
（ｓｐｅｒｍ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ，ＳＣＤ），试 剂 购 自 深 圳 博 锐 德 生
生物科技有限公司，批内差 异 ≤８％，批 间 差 异 ≤１０％。 严 格
按照说明书 进 行 操 作，在 普 通 光 学 显 微 镜 下 观 察 ５００ 个 精
１ 资 料 与 方 法
１．１ 一 般 资 料 ：选 取 ２０１２ 年 １０ 月 至 ２０１４ 年 １１ 月 在 四 川 省 妇幼保健院采用黄体中期短效 长 方 案 完 成 控 制 性 超 排 卵 、取
Hale Waihona Puke Baidu
曾玖芝，等 ．精子 ＤＮＡ 损伤与常规体外受精—胚胎移植结局关系研究
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卵、移植，并进 行 常 规ＩＶＦ 治 疗 的 １６９ 例 不 孕 夫 妇。 女 方 年 龄 ２２～３８ 岁 ，平 均 （３０．１９±４．１２）岁 ，男 方 年 龄 ２３～４８ 岁 ，平 均（３２．６３±５．０７）岁。其中原 发 不 孕 ６５ 对，占 ３８．４６％，继 发 不孕１０４对，占６１．５４％。夫妇双方染色 体 为 正 常 核 型，男 性 检查包括第二 性 征、阴 茎、阴 囊、精 索、输 精 管、附 睾、睾 丸 等 均 无 异 常 ，排 除 重 度 少 弱 精 子 症 患 者 。 １．２ 方 法 １．２．１ 标本收集：在女方取 卵 前 ２ 周 内，男 方 取 精 液 进 行 检 查。要求：禁欲 ２～７ｄ，手 淫 法 收 集 新 鲜 精 液 于 取 精 杯 内 ， ３７ ℃环境下液化后将 标 本 分 成 两 份，一 份 行 常 规 精 液 分 析； 另一份用于 ＤＮＡ 碎片检测。 １．２．２ ＩＶＦ－ＥＴ：均采用黄 体 中 期 短 效 长 方 案 进 行 控 制 性 超 排卵，控制性促排卵药物均采 用 醋 酸 曲 谱 瑞 林 （达 必 佳，德 国 辉凌制药有 限 公 司，０．１ ｍｇ／支）和 注 射 用 重 组 促 卵 泡 素 （果 纳芬，默 克 雪 兰 诺 有 限 公 司，４５０ Ｕ／支），阴 道 Ｂ 超 结 合 血 清 激素监测，注射 ＨＣＧ ３６ｈ后取卵，取 卵 后 ４～６ｈ常 规ＩＶＦ， ７２ｈ后 选 择 ２～３ 个 胚 胎 移 植，常 规 黄 体 酮 针 剂 进 行 黄 体 支 持，移植后１２～１４ｄ查血 ＨＣＧ，呈阳性者３周后行阴道 Ｂ 超 检查，见到妊娠囊者确认临床妊娠。受精１６～１８ｈ机械 法 去 除颗粒细胞，观察到双原核的 受 精 卵 确 定 正 常 受 精。 双 原 核 受精卵数／获卵数×１００％计算 正 常 受 精 率，受 精 后 第 ３ 天 卵 裂球≥６，ＤＮＡ 碎 片 ≤２０％ 的 胚 胎 为 优 质 胚 胎，优 质 胚 胎 数／ 第 ３ 天 可 利 用 胚 胎 ×１００％ 计 算 优 质 胚 胎 率 。
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ＪＯＵ广ＲＮＡＬ西 ＯＦ Ｇ医ＵＡＮ科ＧＸＩ Ｍ大ＥＤＩＣＡ学Ｌ ＵＮ学ＩＶＥＲ报ＳＩＴＹ ２０１５ Ａｕｇ；３２（４）
精子 ＤＮＡ 损伤与常规体外受精—胚胎移植结局关系研究＊
曾玖芝 袁 华１△ 龚 衍 梁梅玉 马蓉宁 熊东升
（四 川 省 妇 幼 保 健 院 生 殖 医 学 中 心 成 都 ６１００４１）
表 １ ３ 组 一 般 情 况 比 较 （ｘ珚±ｓ）
组别
Ａ组 Ｂ组 Ｃ组 Ｐ
ｎ
女方年龄 （岁 ）
不孕时间 （ｔ／年 ）
获卵数 （ｎ ）
移植日内膜 平均移植胚 厚度（ｌ／ｍｍ） 胎数（ｎ ）
子，计数存在 ＤＮＡ 碎片的精子数量。 判 断 标 准：精 子 头 部 仅
产生较小的光晕或无光晕，或单 侧 光 晕 的 厚 度 不 超 过 精 子 头
部最小直径的１／３，均被判 断 为 存 在 ＤＮＡ 碎 片 的 精 子。ＤＦＩ
＝存在 ＤＮＡ 碎片的精子数／计数精子总数×１００％。
１．２．４ 统 计 学 处 理：采 用 ＳＰＳＳ１３．０ 统 计 软 件 进 行 数 据 分