【CN110004138A】固定化酶及其制备方法【专利】

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(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910354520.5

(22)申请日 2019.04.29

(71)申请人中国检验检疫科学研究院

地址 100176 北京市大兴区北京市亦庄经

济开发区荣华南路11号

(72)发明人张峰　姚桂红　凌云　杨敏莉　

(74)专利代理机构北京正鼎专利代理事务所

(普通合伙) 11495

代理人岳亚

(51)Int.Cl.

C12N 11/14(2006.01)

C12N 11/08(2006.01)

(54)发明名称固定化酶及其制备方法(57)摘要本发明公开了制备固定化酶及其制备方法。其中，该制备固定化酶的方法包括：将四氧化三铁溶于第一缓冲液中获得基材溶液，并加入多巴胺盐进行包覆处理，以便得到聚多巴胺包覆的四氧化三铁纳米复合物；将非特异性脂肪酶和sn -1,3专一性脂肪酶溶于第二缓冲液中，以便得到酶缓冲液；将聚多巴胺包覆的四氧化三铁纳米复合物与所述酶缓冲液接触，通过共价固定获得所述固定化双酶。该方法以四氧化三铁纳米复合物为固定载体，将sn -1,3专一性脂肪酶和非特异性脂肪酶经共固定化处理得到固定化双酶。制备过程简单，条件温和，同时，所制备的固定化双酶的稳定性好，催化效果高，且易于分离回收、重复使用效果好，

便于将该酶用于工业生产。权利要求书1页说明书8页附图4页CN 110004138 A 2019.07.12

C N 110004138

权　利　要　求　书1/1页CN 110004138 A

1.一种制备固定化酶的方法，其特征在于，包括：

将四氧化三铁溶于第一缓冲液中获得基材溶液，并加入多巴胺盐进行包覆处理，以便得到聚多巴胺包覆的四氧化三铁纳米复合物；

将非特异性脂肪酶和sn-1,3专一性脂肪酶溶于第二缓冲液中，以便得到酶缓冲液；以及

将所述聚多巴胺包覆的四氧化三铁纳米复合物与所述酶缓冲液接触，通过共价固定获得所述固定化双酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非特异性脂肪酶为皱褶假丝酵母脂肪酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述sn-1,3专一性脂肪酶为疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述非特异性脂肪酶与所述sn-1,3专一性脂肪酶的质量比为1:0.2-7。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述酶缓冲液中的所述非特异性脂肪酶和所述sn-1,3专一性脂肪酶的总浓度为0.5-3.5mg/mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多巴胺盐的添加量为0.5-3mg/mL。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一缓冲液为三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液，优选地，所述三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液的浓度为8-12mM，pH值为7.0-12.0。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述四氧化三铁的添加量为1-6mg/mL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二缓冲液为PBS缓冲液，优选地，所述PBS缓冲液的浓度为8-12mM，pH值为4.0-9.0。

10.一种固定化酶，其特征在于，所述固定化酶是利用权利要求1-9任一项所述的方法制备的。