日立-8900全自动氨基酸分析仪简单操作规程

日立L-8900全自动氨基酸分析仪

简易操作规程

一、联机

1、打开电脑。

2、打开主机电源。

3、双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。

1-1

4、在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击

联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized变成

Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升。分离柱的温度会升到50℃。

1-2

1-3

二、手动各组件控制操作

1、泵1和泵 2

点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量0.ml/min，B1 100%。点击打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。

2-1

点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。点击打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。

2-2

2、自动进样器

点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。

2-3

2-4

3、反应柱柱温箱

点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。

2-5

2-6

三、编辑方法

1、依次点击、、出现3-1-1的画面。

3-1-1

2、选中，点击。再依次点击、

，出现3-1-2的画面。

3-1-2

3、在设置中选中各个柱，其余参数默认。

4、将方法另存为L8900分析方法，文件名及路径均可自选。注意一定不要覆盖原来的方法，一定得另存。

注意将梯度设为3-3-1所示，其余参数默认。

3-3-1

2、保存方法。

四、编辑Sequence

1、依次点击、、，出现4-1画面。选中，其余参数默认。

4-1

2、点击，出现4-2画面，根据需要填写各个参数。

4-2

3、点击，出现4-3画面，根据需要填写各个参数。

4-3

4、点击，出现4-4画面，根据需要填写各个参数。

4-4

5、点击，出现4-5画面。

4-5

6、通过复制、编辑，最终将Sequence编辑如图4-6所示。注意此时第一行是再生程序（RG），进样体积为0，Run Type是Unknown，第二行是标准样品，三行起是未知样。

7、将Sequence另存为Test。

五、采集数据

点击Control Single Run,运行Stand－By方法，进样体积为0。

点击Control、Sequence Run，运行Test。

数据采集完后，机器自动进入清洗程序，清洗一个小时，自动关泵，关灯，关柱温箱。

六、关机

点击断开连接，关闭程序，关闭主机电源。

七、试剂的准备

反应液R1、R2：醋酸钠(CH3COONa·2H2O)、冰醋酸(CH3COOH)、茚三酮(C9H6O4)、乙二醇单甲醚（CH3CH(OH)·CH2OCH3）、硼氢化钠（NaBH4）

缓冲液B1到B6：柠檬酸钠(Na3C6H5O7·2H2O)、柠檬酸(C6H8O7·H2O)、氯化钠(NaCl)、无

水乙醇(C2H5OH)、氢氧化钠(NaOH)、硫代双乙醇（硫二甘醇）(S(C2H4OH)2)、苯甲醇（）、brij-35(聚氧乙烯十二烷基谜)、辛酸(C7H15COOH)

八、出峰情况

Asp：天门冬氨酸Thr：苏氨酸Ser：丝氨酸Glu：谷氨酸

Pro：脯氨酸Gly：甘氨酸Ala：丙氨酸Cys：胱氨酸

Val：缬氨酸Met：蛋氨酸Ile：异亮氨酸Leu：亮氨酸

Tyr：酪氨酸Phe：苯基丙氨酸Lys：赖氨酸NN3：氨气

His：组氨酸Trp：色氨酸（标准品中不含该组分）Arg：精氨酸

九、仪器使用注意事项

1、氮气压力：仪器需要的压力为0.05—0.1Mpa，压力过高会损坏仪器。

2、为避免堵塞，注意泵1泵2的打开顺序。

3、电脑严禁更改设置，严禁安装其他程序，严禁上网。注意避免染上病毒。

4、进样浓度范围：0.4—10 nmol，过高的浓度会影响分析结果，且容易堵塞反应柱。

十、样品的前处理

准备想做测试的样品，在开动氨基酸分析仪之前，需要进行适合该项检测目的的处理，在这上分有两大系统，一个是将氨基酸以及和它有关连的化合物为对象对游离氨基酸的测定法（以下称生物液分析法），另一个是由蛋白质加水分解而得到的氨基酸对它的分析法（以下称蛋白质加水分解物分析法）在此对其中的几个作介绍。另外，作为原则请用0.45um的过滤器对样品过滤。

（1）生物液分析法的前处理：

主要目的是做氨基酸成分的提取（萃取），除去蛋白质以及不溶性物质。

（a）血液

①把血液用7,000~10,000rpm(7000~10000G)离心分离15分钟

②在澄清液中加入5~10%三氯醋酸，稀释2~3倍。

③用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟。

④将澄清液作为样品。

注意事项：

1）澄清液有混蚀时，要么提高离心分离的转速，要么进一步使用过滤器。

2）虽然三氯醋酸的浓度根据蛋白质的量而不一样，通常把添加后的浓度做为3%左右。

3）将血液就这样做除蛋白操作，回收率很低，特别是Arg的消失明显。

4）最终样品量做成0.05~0.1ml

（b）滤纸提取血液（直径10mm的点约30ul，最少也是直径3mm×5片）

①剪开滤纸，沿着离心管的管壁放入（例如：

②加入0.5ml的1%三氯醋酸

③用超声波清洗器震动2分钟

④用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟

⑤用0.45um的过滤器将澄清液过滤，使用微量小玻璃瓶装进自动进样器

注意事项：样品的混浊多的时候，不要使用三氯醋酸，用水/乙醇提取（萃取），待减压干硬后，用0.02N-HCI稀释的话，分析柱的污染将减少。

（c）尿

①在原尿中加入1%三氯醋酸再稀释2~5倍（由于有异常的尿有大量的氨基酸出来，

所以要提高稀释倍率）。

②有混浊时，进行过滤或者离心分离。

③把得到的液体的0.05~0.1ml作样品。

注意事项：检测微量成分的良好灵敏度时，在除蛋白后，减压干硬之后用稀释液再溶解。浓度就和原液吻合。

（d）酱汁（调味汁）、果汁等含有蔬菜原料的食品类

①用1~5%三氯醋酸溶液稀释10倍

②用7,000~10,000rpm（7000~10000G）离心分离15分钟

③把澄清液作样品

（e）酱油、酒等设有沉淀物的水系食品类

①在0.02NHCI稀释做样品（和PH的关系在3倍以上）

注意事项：食醋等虽然在低稀释度就可以，但酱汕等由于氨基酸浓度高，要稀释200~300倍左右再作样品。

（f）从植物叶的提取（萃取）

①用研钵将样品搓碎，或是截断成细小状。

②在含有乙醇的20%~30%水中让其散开（1g样品/3ml乙醇/水）

③在水浴器上用80℃，约20分钟以上提取（萃取）。

④将澄清液过滤提取，提取（萃取）要反复3次。

⑤使用漏斗将剩下的样品用酒精清洗。

⑥由④以及⑤的液体在水浴器上除去酒精。

⑦往残留下来的水溶液中加入乙醚提取（萃取）后，采取水层

⑧把水层减压干硬

⑨在0.02 N HCI给一定的容量

（2）蛋白质加水分解物分析法的前处理