蛋白酶整理
生物化学知识点整理笔记10 蛋白质的降解与氨基酸代谢
第十章蛋白质的降解与氨基酸的代谢第一节蛋白质的酶促水解生物体利用外源蛋白质作为营养时,需要将蛋白质分解成氨基酸(或寡肽)才能被吸收利用。
机体摄入的蛋白质的量和排出量在正常情况下处于平衡状态,称为氮平衡。
处于生长、发育或患疾恢复的机体,其摄入的氮量大于排出的氮量,称为正氮平衡;反之,当摄入的氮量小于排出的氮量时,称为负氮平衡。
一、蛋白酶与蛋白酶的分类催化蛋白质分子中的肽键水解的一类酶,称为蛋白酶。
1、按来源分动物蛋白酶植物蛋白酶微生物蛋白酶2、按作用位点分内肽酶、外肽酶、二肽酶各种内肽酶对不同的氨基酸残基所形成的肽键有不同的专一性。
如∶胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶3、按作用的pH分碱性蛋白酶,pH9-11中性蛋白酶,pH7-8酸性蛋白酶,pH2-5二、蛋白质的酶水解大分子的蛋白质受内肽酶、外肽酶和二肽酶的协同催化,逐步降解,终产物是氨基酸。
多肽寡肽二肽氨基酸这些氨基酸进一步代谢:1)用于合成Pr;2)氧化分解;3)转化为糖和脂肪等。
三、氨基酸的吸收及氨基酸代谢库氨基酸是蛋白质、核酸等生物分子合成的原料,细胞内总有相当数量的游离氨基酸存在,它们一部分从外界吸收;一部分由细胞自身合成;也有的是由体内蛋白质更新释放的。
细胞内所有游离存在的氨基酸称为氨基酸库。
第二节氨基的代谢氨基酸具有一些共同的结构特点,其分解代谢过程有一部分共同的途径,而不同氨基酸的碳骨架(侧链基团)不同,每种氨基酸又各自具有特定的代谢途径。
本章仅讨论氨基酸分解的共同途径。
氨基酸分解的第一步往往是脱去氨基,其方式主要包括:脱氨基作用、转氨基作用和联合脱氨基作用。
一、氨基酸的脱氨基作用(一)氧化脱氨基作用在酶催化下,氨基酸氧化脱氢,放出氨,生成相应的酮酸。
反应分两步进行:脱氢水解催化氨基酸氧化脱氨基作用的酶有两类:1、氨基酸氧化酶分为L-氨基酸氧化酶和D-氨基酸氧化酶。
特点:是一类以FMN或FAD为辅基的黄素蛋白,底物氨基酸脱下的氢直接交给氧,生成H2O2。
蛋白酶的分类及功能主治
蛋白酶的分类及功能主治一、蛋白酶的分类蛋白酶是一类能够将蛋白质分解为特定的肽段或氨基酸的酶类分子。
根据其活性、结构和分解作用的特点,蛋白酶可以分为不同的分类。
1. 依据酶活性•氨基酸序列特异性酶:如胰蛋白酶、酪蛋白酶等,其在特定的氨基酸序列上具有特异的酶解活性。
•内切酶:能够将蛋白质分解为两个或多个短肽段的酶,如胰岛素水解酶。
•外切酶:能够将蛋白质从非肽链的区域进行切割,如肽链C端的内酰胺肽酶。
2. 依据酶结构•酸性蛋白酶:以酸性环境中活性最好的酶,如胃蛋白酶和某些白细胞蛋白酶。
•碱性蛋白酶:在碱性环境中活性较好的酶,如胰凝乳蛋白酶和某些胃蛋白酶。
•中性蛋白酶:在近中性条件下活性较好的酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶和某些白细胞蛋白酶。
3. 其他分类•水解酶:将蛋白质水解为肽段的酶,如胃蛋白酶、胰蛋白酶等。
•降解酶:对蛋白质分子进行降解的酶,如泛素连接酶。
二、蛋白酶的功能主治蛋白酶广泛参与许多重要的生物学过程,对于细胞的生命活动有着重要的调控和参与作用。
下面将介绍几种常见的蛋白酶及其功能主治。
1. 胃蛋白酶•功能:胃蛋白酶主要参与胃液的消化过程,将蛋白质水解为短肽段。
•主治:胃蛋白酶能够降解食物中的蛋白质,促进食物的消化吸收。
2. 胰蛋白酶•功能:胰蛋白酶主要参与肠道的消化过程,将蛋白质水解为肽段和氨基酸。
•主治:胰蛋白酶在肠道内起到消化蛋白质的重要作用,促进蛋白质的消化和吸收。
3. 组氨酸蛋白酶•功能:组氨酸蛋白酶主要参与免疫系统的调节,促进组织修复和免疫反应。
•主治:组氨酸蛋白酶能够调节炎症反应,在伤口修复和免疫应答中发挥重要作用。
4. 粒细胞弹力蛋白酶•功能:粒细胞弹力蛋白酶主要参与结缔组织的修复和重建。
•主治:粒细胞弹力蛋白酶能够降解旧的弹力纤维,促进新的弹力纤维的合成和重建,对于皮肤的弹性和紧致具有重要作用。
5. MMPs蛋白酶•功能:MMPs蛋白酶(基质金属蛋白酶)主要参与细胞外基质的降解和修复。
改性蛋白酶的制备及其在羊毛防毡缩整理中的应用
改性蛋白酶的制备及其在羊毛防毡缩整理中的应用张冰;张弛;肖升木;阎克路【摘要】针对生物酶法处理羊毛防毡缩易出现的强力损伤问题,采用对蛋白酶进行聚合物接枝改性的方法增大蛋白酶体积而限制其向纤维内部扩散,使其对羊毛鳞片的分解停留在表层,降低酶分解作用对羊毛的强力损伤.将聚合物Eudragit L100经碳二亚胺活化后,通过共价键对碱性蛋白酶Esperase 8.0L进行接枝,形成改性蛋白酶Eudragit-Esperase(EE),使得Esperase 8.0L蛋白酶的分子质量从4.1~6.5 kDa增大至45 kDa以上,经分析测试,其基本达到改性要求.羊毛织物经改性蛋白酶EE处理后,与用蛋白酶Esperase 8.0L处理织物的性能相比,织物的失重率降低21.90%,拉伸断裂强力提高13.10%,说明EE可显著降低羊毛纤维的损伤.同时,经EE处理后羊毛织物的面积毡缩率从原毛织物的8.12%降至0.89%,表明改性蛋白酶EE处理赋予织物良好的防毡缩性能.%Because bio-enzymatic antifelting finishing of wool tends to cause strength loss of the finished wool, polymer grafting modified protease is used in the antifelting finishing of wool. The grafting modification made the protease become bigger and therefore hindered it to diffuse into the inside of the fiber so that the protease only degraded the scales on the surface of the wool, thus reducing the strength loss. Polymer Eudragit L100 was firstly activated by carbodiimide and then grafted onto alkaline protease Esperase 8. 0L through covalent bond, thus to obtain modified protease Eudragit-Esperase (EE), in which, the molecular weight of Esperase 8. 0L was increased from 4. 1 -6. 5 kDa to over 45 kDa. Testing results showed the modification requirement was basically met. When compared with thewool fabric finished with protease Espperase 8.0L only, the wool fabric finished with modified protease EE offered remarkable benefits; weight reduction rate reduced by 21.90% , tensile strength increased by 13. 10% , and area shrinkage reduced from the original 8. 12% to 0. 89% , indicating that wool fiber damage is significantly reduced and excellent antifelting property imparted to the wool.【期刊名称】《纺织学报》【年(卷),期】2012(033)005【总页数】7页(P74-80)【关键词】羊毛织物;蛋白酶;改性;毡缩【作者】张冰;张弛;肖升木;阎克路【作者单位】东华大学化学化工与生物工程学院,上海201620;纺织面料技术教育部重点实验室,上海201620;东华大学化学化工与生物工程学院,上海201620;纺织面料技术教育部重点实验室,上海201620;东华大学化学化工与生物工程学院,上海201620;纺织面料技术教育部重点实验室,上海201620;东华大学化学化工与生物工程学院,上海201620;纺织面料技术教育部重点实验室,上海201620【正文语种】中文【中图分类】TS195.56羊毛织物因其具有良好的弹性、保暖性及柔和的手感,倍受消费者的欢迎,但是羊毛织物在水洗过程中易发生严重的毡缩现象,极大地影响了毛织物的风格和尺寸稳定性。
双氧水前处理对毛织物防毡缩整理的影响
双氧水前处理对毛织物防毡缩整理的影响余雪满;李清政【摘要】The wool fabric was surface modified by the method of combining pretreatment with hydrogen peroxide and protease. The effect of protease treatment on the shrink-resistance of wool fabric wasdis?cussed. The results showed that the hydrogen peroxide pretreatment had great effect on the shrink-resis?tance of protease treatment, which decreased to 5.34% and reached the standard of international wool office. But the strength needed to be improved.%用双氧水前处理与蛋白酶结合的方法对羊毛织物进行表面改性,探讨前处理对羊毛织物防毡缩性能的影响.结果表明,双氧水前处理对羊毛织物防毡缩效果有显著影响,毡缩率下降到5.34%,达到了国际羊毛局标准,但强力有待改善.【期刊名称】《印染助剂》【年(卷),期】2017(034)012【总页数】4页(P39-41,45)【关键词】羊毛织物;蛋白酶;前处理;防毡缩【作者】余雪满;李清政【作者单位】浙江工业职业技术学院,浙江绍兴 312000;杭州明纺纺织检测服务有限公司,浙江杭州 311209【正文语种】中文【中图分类】TQ342;TS190.643羊毛织物是高档的纺织面料,因独特的弹性和保暖性、丰满的手感和柔和的光泽而深受消费者的喜爱[1],但羊毛纤维表面鳞片的存在使其具有特殊的缩绒性[2],从而使护理的难度大大增加。
蛋白酶PG对丝绸织物整理的研究
12 工 艺 .
酶 处 理采用 生 物酶 浸渗 整理 真丝 织物 : 预浸(0o 5 C
温水 , i, 比 1 :) 酶 洗 ( 白酶 P ) 酶 失 活 3 m n浴 0 51一 蛋 G一
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第 2 卷第 7 3 期
20 0 Leabharlann 年 7月 印 染 助 剂
TEXTI LE AUXI ARI LI ES
Vo .3 No7 12 .
J1 0 6 u. 0 2
密垂白 P 丝织整的究 酶G 绸物理研 蛋 对
徐升 运 , 邢建 伟 马 , 齐 赵文 娟 z ,
垂 系数 、 缩水 率 等 性 能 指 标 , 了解 丝 绸 织 物 结 构 和性
能的变 化 .
(0mn一 脱 水 一 水 洗 2次 ( mi,0℃, 比 3 :) 1 i) 5 n4 浴 01一
脱水 一 柔 软整 理[ 软剂 N3 o 04 柔 %( , w 0℃, i,H 7 2 m np , 0 浴 比 1 : 一 干燥 (0o, i) 51 1 7 6 m n. C 0
1 . 测试 3
1 实 验
11 材料 与 仪器 .
1 . 蛋 白酶 P .1 3 G活 力
织 物 : 磅 真 丝 ( 密 110根 /0c 纬 密 4 0 重 经 7 1 m、 6
蛋 白质 或 多 肽 水 解 后 生 成 的 芳 香 族 氨 基 酸 对 25n 7 m波 长 的紫外 光 具有 最 大 吸收值 . 用 蛋 白酶催 利 化 酪 蛋 白水 解 前后 在 三 氯 醋 酸 可 溶 物 中 紫外 线 吸收
纯毛绒线蛋白酶防毡缩整理的研究
羊 毛纤 维 的优 良弹 性 , 目前 采 用 的方 法 还是 以 降
低 定 向摩 擦 效 应 为 主 , 改 变 定 向摩 擦 效应 的途 而 径 又是 多种 多 样 的 , 由此 引 出的 防缩 技 术 已有 近 百种 之 多 , 归纳 起 来 主 要 有 3类 : 理 、 学 减 法 物 化
1 羊毛 的缩绒 性 羊 毛 由鳞 片 层 和 皮 质层 组 成 , 毛 的鳞 片 层 羊 又 由鳞 片表 层 、 片 外层 和鳞 片 内层 组 成 , 鳞 羊毛 表
缩 绒技 术 和生 物酶 技 术等 。
收稿 日期 :0 5 1 7 2 0 —1 —1 作者 简 介 : 志 忠 (93一)男 , 教 授 , 州 理 工 大 学 生 李 16 , 副 兰
观粗 犷 、 面绒 毛密 布 、 实 厚 重 、 暖性 好 的 毛 表 结 保 纺制 品 , 这是 对 纺织 加 工 生 产 有 利 的一 面 。但 羊
毛 的这种 缩绒 性 也 存 在一 定 的弊 端 , 使 得 普 通 它
的、 未经 防缩 处理 的纯 毛针织 绒线 发生 缩 绒 , 而 从 导 致绒线 产 品外 观不 良, 起球 发 毛 , 其织 成 的 羊 用 毛衫 出现 尺寸 收 缩 、 纹 不 清 、 曲变 形 、 厚 毡 织 扭 增
3 生物 酶 防毡 缩整 理 技术
羊毛采 用 氯 化 、 化 防 缩 工 艺 虽 然 已经 应 用 氧 了2 年, O多 特别是 氯 化一 树脂 二 步 法处 理 纯 毛绒
线 及 其织 物 防毡 缩 工 艺 已相 当成 熟 , 技 术 具 有 该
命 科 学 与 工 程 学 院 , 要 从 事 生 物 酶 在 纺 织 技 术 上 的 应 主
羊毛针织物蛋白酶防毡缩整理研究
表 1 织 物 原 样 洗 前 洗 后悬 垂 性 及 硬 挺 度 系数 项 目 悬 垂 系 数 硬 挺 度 系 数 毡 缩 率
选 定双氧 水的 浓度 为4 / 双氧水 预处理 时 0mlL,
原萎0:. 样 s 洗 薹 ss 后 7 .z 霎7: 。 . ・ 。 … % 蓁
从表 3和表 4中的 结果可 看 出 , 同的 p 值影 响双 不 H
氧水 对羊 毛针织 物 的预 处 理作 用 , 理后 对 羊 毛的 毡缩 处 率有影 响. 织物 处理 并洗后 其悬 垂 系数 比原 样洗 后大 , 说 明悬垂 性 不 如 原样 洗 后 , 双 氧 水 处 理 后 , 物 手感 柔 且 织
pH = 7
4 . 5% O2 4.5 4 7 % 4. 1 2 6 %
质层部分水解 , 片表面 平滑 . 鳞 但羊 毛鳞 片 内层 之上 的中层 含硫较多 , 抗酶 解 能力较 强 , 先用氧 化剂将 须
收稿 日期 :0 70 7 20 —91
・
作者简介 : 石大 为(9 7 , 讲师 , 1 7  ̄) 男, 在读硕士 , 现任职于 内蒙古工业大学 轻工 与纺织学院 , 主要从 事纺纱织物工
3 n p 5mi、H= 8 以这 样 的 工 艺 条 件 来 处 理 羊 毛 针 织 物 , 防毡 缩性 有 所 改 善 , 物 . 其 织
悬垂性有所提高.
关键 词 : 羊毛; 针织物‘ 蛋白酶; 防毡缩; 毡缩率
中图分类号 : S9.6 文 献标识码 : T I55 A
由于 羊毛纤维 表面 结构 的特殊 性 , 致 了羊 毛纤维 具有毡 缩倾 向, 大地 影响 了毛织物 的风格和 尺 导 极
表 2 双氧 水不 同p H值各溶液 的体 积和双氧水 用量
等离子体/蛋白酶联合整理对羊毛防缩性能的影响
s p e c t r o s c o p y . Th e r e s u l t s h o we d t h a t t h e mo r p ho l o g y o f t h e t r e a t e d f a b r i c h a s c h a ng e d,wi t h s h r i nk a g e r e d u c e d t o 5. 4% a n d s t r e n g t h b a s i c a l l y r e t a i n e d. As a r e s u l t .1 o w— t e mp e r a t u r e p l a s ma — p r o t e a s e c o mb i n e d
f a b r i c wa s c a r r i e d o ut b y l o w— t e mp e r a t u r e p l a s ma ・ p r o t e a s e c o mb i n e d t r e a t me n t . Th e s h r i n k r e s i s t a n c e a n d
的防毡缩效果 。
关键 词 羊 毛 织 物 ;蛋 白酶 ; 低 温 等离 子 体 ;防毡 缩
中图分类号 : T S 1 9 5 . 1 文献标志码 : A
Ef f e c t o f p l a s ma — pr o t e a s e c o m bi n e d t r e a t me n t o n s hr i n k- r e s i s t a nc e o f wo o l f a br i c s
Y U X u e m a n , L I Q i n g z h e n g
中性蛋白酶对羊毛的防毡缩整理
13 实验 仪器 .
仪 表恒 温水 浴锅 , de t e型电子 分析 天平 , A vn r u S C一8 A 色 差 仪 , D 2 N 型 电 子 织 物 强 力 仪 , 0 H O6 A T C织物 稳 定 性 测 试 系 统 ( 、 , G 6 AC A B) Y 4 1型 织 物 中压 透 气 量 仪 ,S 6 6 L 型 扫 描 电 子 显 微 镜 JM 3 0 V
摘
要 : 用 枯 草 杆 菌 中性 蛋 白酶 对 羊 毛 织 物 进 行 防 毡缩 整理 , 过 单 因 素 平 行 实 验 研 究 了 蛋 白酶 浓 度 、 应 通 温
度 、 间以及 p 时 H值 对 防毡 缩 整 理 效 果 的影 响 , 定 了各 影 响 因素 的 最 佳 水 平 。 采 用 优 化 后 的工 艺 参 数 , 酶 浓 确 即 度 5 (w", 度 4 % ol 温 ) o℃ , 理 时 间 3 i,H 值 7 5 处 理 羊 毛 织 物 , 以使 羊 毛 织 物 的相 对 面 积 毡 缩 率 由未 整理 处 5mn p ., 可
(E 。 S M)
会科 技 发 展 计 划 重 点 项 目联 合 资 助 项 目( 目编 号 : Z 项 K 20 1o2o )北 京 市 服 装 材 料 研 发 与 评 价 重 点 实 验 室 开 060 107 ; 放课 题 资 助 项 目( 目编 号 :05 K一6 项 20Z )
作者 简 介 : 甲 贤 (9 1 , , 读 硕 士 研 究 生 , 要 从 余 18 一) 女 在 主 事纺 织 品 的功 能性 整 理 研 究 。
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一
l 一 O
名 访 甜 技
2o o 7年第 1 期 0
中性 蛋 白酶 对 羊 毛 的防毡 缩 整 理
生物酶在羊毛改性及羊毛织物后整理中的应用
生物酶在羊毛改性及羊毛织物后整理中的应用许漪高炳生(福建众和股份有限公司莆田351154)摘要:本文介绍了一种用生物酶将羊毛纤维及其织物进行脱鳞片改性,使纤维变细,从而获得仿山羊绒织物效果的工艺方法。
本文详细地分析了羊绒、羊毛纤维的特点,外观形态和微观结构以及性能上的差异,介绍了几种生物酶的特点和催化机制,以及生物酶在羊毛前处理中的应用和生物酶在羊毛织物后整理中的一种工艺。
利用生物技术改造和提升传统的纺织产业,是实现纺织产品高档化和生产清洁化的可持续发展方向之一。
关键词:羊毛;羊毛与羊绒比较;生物酶;羊毛改性;整理;性能;应用前言近几年来,随着人们生活水平的日益提高,对纺织品的质量要求也越来越高,“回归大自然”的呼声日益强烈。
纺织印染加工企业及其产品所带来的潜在性的健康危害和环境污染也越来越引起人们的关注。
利用生物技术改造和提升传统的纺织产业,实现纺织产品的高档化和生产的清洁化,不仅是人们提高生活质量的需要,而且关系到社会的可持续发展。
由于羊毛纤维结构的复杂性,采用生物酶法对土种绵羊底绒进行剥鳞片处理,对其进行仿山羊绒改性处理,纤维细度可降低2um,可使其品质支数提高1个等级,粗支羊毛细度降低可提高其可纺性,改变以往粗羊毛只用来生产地毯等产品的状况。
采用生物酶脱鳞片,使纤维变细,可取得较好的仿山羊绒织物的效果。
酶加工技术使纺织品的附加值大大提高,从而增强了市场竞争力。
近年来酶在纺织工业中的应用再一次引起人们极大关注和广泛的研究兴趣,已和超临界CO:染色、低温等离子体处理和数码喷印技术并称为目前纺织品染整加工的四大发展方向。
本文在查阅和收集有关文献及试验的基础上,汇总和整理相关资料,围绕用生物酶将羊毛脱鳞片,使纤维变细,从而使羊毛织物获得仿山羊绒效果的工艺作一介绍,以供大家参考。
1羊绒、羊毛纤维的特点和性能上的差异山羊绒是名贵的特种动物纤维之一,在当今国际市场上统称为“开士米”(Cashmere),其纤维细、强度大、光泽好,是目前世界纺织原料中品质最好、价格最高的原料之一,被人们誉为“纤维宝石”、“软黄金”。
羊毛针织物蛋白酶抗起球整理工艺研究
大, 因此本实 验选 择在 5 —7 i之间进 行 。 0 0mn
2 3 浸 液温度 .
由 图 4可 以看 出 , 白酶 的浓 度 对 羊 毛 针 织 蛋 物 的起 球个 数 和程 度 有 着 明显 的影 响 , 对 浓 度 故 的选择 与控 制 非 常关 键 , 度 过 高 过 低 对 起 球 都 浓
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2o 0 7年 第 7 期
石 访 甜技
一
2 一 7
羊 毛针 织 物 蛋 白酶 抗 起 球 整 理 工 艺研 究
解 芳 王 少辉 富 秀 荣 石 大为 , , ,
(. 1 内蒙 古 工 业 大 学 轻 工 与 纺 织学 院 , 蒙 古 呼 和 浩特 内 005 ; . 华 大学 纺 织 学 院 , 海 10 1 2 东 上 20 5 ) 00 1
8 7 6 5 4 3 2 l 0
的条 件下 , 别 在 不 同浓 度 下 处 理 , 验 结 果 如 分 实
图 4 示。 所
8 。一 \ 【 _ . 簌 暂骝
∞ 柏 ∞ ∞ 加 0
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05 .
烘干 。 2 整理 工艺 参数选 择 经双 氧 水预处 理 的羊 毛针 织物 可 以用蛋 白酶 进 行抗起 球 整 理 。实 验 发 现 , 响 处 理效 果 的 主 影
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p 值 H
图 1 蛋 白酶 溶 液 p H值 变 化 时 织物 起 球 的 实 验 结 果
表 明 , 碱 性 蛋 白 酶处 理 后 的 羊 毛 针 织 物 抗 起 球 性 得 到 了 明 显 的 改 善 。 经 关 键 词 : 毛 ; 织 物 ; 性 蛋 白酶 ; 起 球 羊 针 碱 抗 中 图 分 类 号 :S9 .5 T 1563 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 :0315 (0 70 . 2.3 10.46 20 )70 70 0
蛋白酶的分类及酶切位点
蛋白酶的分类及酶切位点氨基酸0.ppt氨基酸的名称与符号alanine 丙氨酸Ala Aarginine 精氨酸Arg Rasparagine 天冬酰氨Asn Asx Naspartic acid 天冬氨酸Asp Asx Dcysteine 半胱氨酸Cys Cglutamine 谷氨酰胺Gln Glx Qglutamic acid 谷氨酸Glu Glx Eglycine 甘氨酸Gly Ghistidine 组氨酸His Hisoleucine 异亮氨酸Ile Ileucine 亮氨酸Leu Llysine 赖氨酸Lys Kmethionine 甲硫氨酸Met Mphenylalanine 苯丙氨酸Phe Fproline 脯氨酸Pro Pserine 丝氨酸Ser Sthreonine 苏氨酸Thr Ttryptophan 色氨酸Trp Wtyrosine 酪氨酸Tyr Yvaline 缬氨酸Val V血清终止胰酶消化的原理血清终止的原理其实是竞争抑制。
就是用过量的牛血清中含有的蛋白来和胰酶结合。
不给胰酶消化细胞蛋白的机会。
细胞传代时,血清为什么能终止胰酶消化?胰蛋白酶的酶切位点是肽链的Lys和Arg两个残疾的羧基端肽键,血清的加入可使酶饱和,严格上说不是竞争性抑制,因为血清蛋白不是抑制剂,还是底物!什么样的细胞不能用胰酶-EDTA消化植物细胞不能用胰酶-EDTA消化,要用纤维素酶消化。
应该是肿瘤细胞吧。
正常的细胞,貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化。
EDTA-胰酶,只不过是在胰酶里加入了EDTA而已。
EDTA是乙二胺四乙酸,一种金属螯合剂。
一般和胰蛋白酶配合使用。
原因在于,钙,镁等金属离子会降低胰酶活力,故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。
它可以螯合这些离子,消除对胰酶的抑制。
干细胞饲养层制作中,胰酶—EDTA消化成纤维细胞(MEF)时,EDTA的作用是什么?应该是胰酶分散细胞,EDTA鳌合金属离子使金属酶失活《军医进修学院学报》1992年02期加入收藏投稿正常人血浆蛋白酶解产物对胃癌细胞肺转移抑制作用的研究焦顺昌赵东海黄昌霞王洪海【摘要】:本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合消化方法得到正常人血浆(NHP)有限蛋白酶解产物(NHP-EP)。
羊毛抗起毛起球整理工艺的研究
羊毛抗起毛起球整理工艺的研究摘要:本文分析了国内外羊毛抗起球的研究进展,并对现有的羊毛抗起球方法进行了研究。
本文从氯化法、酶法和低温等离子体等角度,对抗起球整理进行了阐述,并对其利弊进行了比较,希望能够为开发防起毛起球技术提供借鉴。
关键词:羊毛织物;抗起毛起球整理;整理方法1羊毛抗起毛起球整理工艺的概述在实际应用中,羊毛、羊绒织物会受到各种程度的摩擦、揉搓等,会出现起毛、起球等问题,这不仅会对织物的外形造成影响,还会降低消费者的购买意愿。
为了达到这个目的,需要对毛料进行防起毛起球处理[1]。
羊毛织物起毛起球的原因,是因为它具有独特的表面鳞片层结构,按照其处理方式的差异,可以将羊毛的抗起毛起球方法分为减法、加法以及加减法等。
羊毛针织面料的特点是:弹性好,柔软,贴身;具有良好的吸湿性和透气性,保温性能和穿着舒适等特性。
但在毛织品上对羊毛针织面料的防起毛团处理是很有必要的。
当前,通过改善毛料的弹性,降低毛料的取向摩擦系数,抑制毛料的起毛起珠,可分为物理、化学和生物三类。
物理化学方法包括紫外线辐照法、低温等离子体处理法、超声波浸渍法等,利用刻蚀金属表面的鳞片,减小方向上的摩擦因子,从而实现防起毛性和起球性。
生物整理的方法包括:羊毛角质化-丝绸丝胶蛋白、生物酶等,这些方法可以有效地破坏织物的鳞片层,降低织物的弹性,从而达到防起毛和起球的作用。
现有的几种后处理技术都有各自的缺点,例如:羊毛容易变黄,抗起毛和起毛效果不稳定,手感差;因此,如何有效地改善材料的弹性和强度是目前亟待解决的问题。
2减法抗起毛起球整理减法防起球是通过对羊毛料鳞片刻蚀、粗糙,调控毛料的取向摩擦力和强度,或通过对羊毛料进行“生物研磨”,实现羊毛织物抗起毛、气球等功能。
2.1氯化法该过程也称之为氯氧化法,它是通过氯气、次氯酸钠和二氯异氰脲酸钠等的氯化与氧化反应,来对纤维之间的摩擦系数和抱着力进行调节,进而提高羊毛织物的抗起毛起球性能。
在这些过程中,氧化过程是至关重要的。
蛋白酶分类
蛋白酶分类蛋白酶是一类能够降解蛋白质的酶,广泛存在于生物体内。
它们在细胞生长、分化、凋亡等过程中起着重要的作用。
根据其催化机制和结构特点,蛋白酶可以分为多种类型。
一、按照催化机制分类1. 水解酶:水解酶是最常见的一类蛋白酶,它们通过加水反应来降解蛋白质。
其中包括丝氨酸蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等。
2. 氧化还原酶:氧化还原酶通过氧化还原反应来降解蛋白质。
如谷胱甘肽过氧化物酶等。
3. 脱氨基酶:脱氨基酶通过去除氨基来降解蛋白质。
如天冬氨酸脱羧酶等。
4. 顺电荷转移反应催化剂:顺电荷转移反应催化剂可通过电子传递来加速肽键的断裂,如金属依赖性的胰岛素分泌酶等。
二、按照结构特点分类1. 丝氨酸蛋白酶:丝氨酸蛋白酶是一类结构简单的蛋白酶,其活性部位由含有羟基的丝氨酸和组氨酸残基组成。
如胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等。
2. 天冬氨酸蛋白酶:天冬氨酸蛋白酶是一类含有两个天冬氨酸残基的活性部位的蛋白质,它们在水解肽键时不需要金属离子的参与,如胃泌素、木质素等。
3. 半胱氨酸蛋白酶:半胱氨酸蛋白酶是一类含有半胱氨基和其他残基(如丝氨基)组成的活性部位的蛋白质。
它们需要还原剂来保持其催化活性,如精胺裂解酶、细胞因子转化脱敏因子等。
4. 金属依赖性蛋白质:金属依赖性蛋白质是一类需要金属离子(如锌、铁等)参与催化的蛋白质。
它们可以分为两类,一类是含有金属离子的活性部位,如胰岛素分泌酶、乳铁蛋白酶等;另一类是通过金属离子辅助催化,如光合作用中的氧化还原酶。
三、按照底物特点分类1. 肽酶:肽酶主要降解肽链而非多肽或蛋白质。
它们可进一步分为内切肽酶和外切肽酶两类。
内切肽酶可将多肽链在特定位置切断,如胰凝乳蛋白酶;而外切肽酶则能够从多肽链末端开始降解,如氨基肽酸内外切酶。
2. 脂解酶:脂解酶主要降解脂质而非蛋白质。
它们包括磷脂酰肌醇二磷脂水解酶、甘油三磷脂水解酶等。
3. 糖化合物水解酶:糖化合物水解酶主要降解糖化合物而非蛋白质。
它们包括α-淀粉酶、β-半乳糖苷酶等。
蛋白酶的分类及酶切位点
蛋白酶的分类及酶切位点氨基酸0.ppt氨基酸的名称与符号alanine 丙氨酸Ala Aarginine 精氨酸Arg Rasparagine 天冬酰氨Asn Asx Naspartic acid 天冬氨酸Asp Asx Dcysteine 半胱氨酸Cys Cglutamine 谷氨酰胺Gln Glx Qglutamic acid 谷氨酸Glu Glx Eglycine 甘氨酸Gly Ghistidine 组氨酸His Hisoleucine 异亮氨酸Ile Ileucine 亮氨酸Leu Llysine 赖氨酸Lys Kmethionine 甲硫氨酸Met Mphenylalanine 苯丙氨酸Phe Fproline 脯氨酸Pro Pserine 丝氨酸Ser Sthreonine 苏氨酸Thr Ttryptophan 色氨酸Trp Wtyrosine 酪氨酸Tyr Yvaline 缬氨酸Val V血清终止胰酶消化的原理血清终止的原理其实是竞争抑制。
就是用过量的牛血清中含有的蛋白来和胰酶结合。
不给胰酶消化细胞蛋白的机会。
细胞传代时,血清为什么能终止胰酶消化?胰蛋白酶的酶切位点是肽链的Lys和Arg两个残疾的羧基端肽键,血清的加入可使酶饱和,严格上说不是竞争性抑制,因为血清蛋白不是抑制剂,还是底物!什么样的细胞不能用胰酶-EDTA消化植物细胞不能用胰酶-EDTA消化,要用纤维素酶消化。
应该是肿瘤细胞吧。
正常的细胞,貌似都需要用胰酶或者胶原酶消化。
EDTA-胰酶,只不过是在胰酶里加入了EDTA而已。
EDTA是乙二胺四乙酸,一种金属螯合剂。
一般和胰蛋白酶配合使用。
原因在于,钙,镁等金属离子会降低胰酶活力,故在使用胰酶消化液时要配合加入EDTA。
它可以螯合这些离子,消除对胰酶的抑制。
干细胞饲养层制作中,胰酶—EDTA消化成纤维细胞(MEF)时,EDTA的作用是什么?应该是胰酶分散细胞,EDTA鳌合金属离子使金属酶失活《军医进修学院学报》1992年02期加入收藏投稿正常人血浆蛋白酶解产物对胃癌细胞肺转移抑制作用的研究焦顺昌赵东海黄昌霞王洪海【摘要】:本文采用胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶联合消化方法得到正常人血浆(NHP)有限蛋白酶解产物(NHP-EP)。
蛋白酶的分类及作用位点
蛋白酶的分类及作用位点蛋白酶是一类催化剂,能够降低化学反应的活化能,从而加速蛋白质的降解或转化过程。
根据催化反应的机制和作用位点的不同,蛋白酶可以分为多个分类。
1.依据催化反应机制的分类:- 氨基酸酶(proteases):通过水解蛋白质的肽连接,一般会将酸、碱或巯基作为催化剂。
- 氧化还原酶(redox enzymes):通过氧化还原反应来降解蛋白质,例如谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase)。
- 转移酶(transferases):通过将化学团转移到底物上来改变其性质,例如激酶(kinases)和磷酸酶(phosphatases)。
- 合成酶(ligases):通过将底物合并成一个新的化学物质来催化反应,例如DNA连接酶(DNA ligase)。
2.依据作用位点的分类:- 内切酶(endonucleases):在蛋白质内部剪切多肽链,例如胰蛋白酶(trypsin)和胃蛋白酶(pepsin)。
- 外切酶(exonucleases):从蛋白质的末端剪切多肽链,例如组氨酸蛋白酶(histidine protease)。
- 脂联素酶(lipase):水解脂肪酸酯,例如胃脂肪酶(gastric lipase)和胰脂肪酶(pancreatic lipase)。
- 软酶(soft enzyme):对底物没有特定位点要求,例如粗蛋白酶(pepsin)。
除了以上的分类,蛋白酶还可以按照其发现地点或用途进行分类:- 溶酶体蛋白酶(lysosomal protease):位于细胞溶酶体内,用于内吞体的降解。
- 细胞质蛋白酶(cytoplasmic protease):位于细胞质内,参与细胞内的蛋白质合成和降解过程。
- 胰蛋白酶(pancreatic protease):主要存在于胰腺内,用于分解摄入的蛋白质,促进消化和吸收。
- 血浆蛋白酶(plasma protease):存在于血浆中,参与血液凝固和炎症反应等生理过程。
蛋白酶的种类
蛋白酶的种类1.木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶,是一种蛋白水解酶,可将抗体分子水解为3个片段。
是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶,活性中心含半胱氨酸,属巯基蛋白酶,应用于啤酒及食品工业。
木瓜蛋白酶papain属巯基蛋白酶,具有较宽的底物特异性,作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸和L-瓜氨酸残基羧基参与形成的肽键。
此酶属内肽酶,能切开全蛋蛋白质分子内部肽链—CO—NH—生成分子量较小的多肽类。
木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。
它的外观为白色至浅黄色的粉末,微有吸湿性。
木瓜蛋白酶(Papain)简称木瓜酶,又称为木瓜酵素。
是利用未成熟的番木瓜(Carica papaya)果实中的乳汁,采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。
它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶,具有蛋白酶和酯酶的活性,有较广泛的特异性,对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力,同时,还具有合成功能,能把蛋白水解物合成为类蛋白质。
溶于水和甘油,水溶液无色或淡黄色,有时呈乳白色;几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。
最适合PH值6~7(一般3~9.5皆可),在中性或偏酸性时亦有作用,等电点(pI)为8.75;最适合温度55~65℃(一般10~85℃皆可),耐热性强,在90℃时也不会完全失活;受氧化剂抑制,还原性物质激活。
2.胃蛋白酶胃蛋白酶(英文名称:Pepsin)是一种消化性蛋白酶,由胃部中的胃粘膜主细胞所分泌,功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。
胃蛋白酶原由胃底主细胞分泌,在pH1.5~5.0条件下,被活化成胃蛋白酶,将蛋白质分解为胨,而且一部分被分解为酪氨酸、苯丙氨酸等氨基酸。
可分解蛋白质中苯丙氨酸或酪氨酸与其他氨基酸形成的肽键,产物为蛋白胨及少量的多肽和氨基酸,该酶的最适pH为2左右。
3.中性蛋白酶中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的,属于一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。
抗起球测试标准三级
抗起球测试标准三级人们对毛织物服用性能的要求除了保暖外,还要求美观、有档次。
抗起毛起球性能是衡量毛织物内在质量的一个重要指标,优等品的抗起毛起球性为3~4级,一等品为3级。
目前,工程技术人员开发了多种抗起毛起球整理工艺,提高了毛织物的服用性能。
1抗起毛起球整理织物起毛起球是从原料、纺纱、织造到染整加工都应注意的综合过程。
抗起毛起球的方法很多,如改变纤维结构、成分与性能,改变纱线的纺纱工艺及织物结构,加强烧毛、剪毛,合理柔软等,在此基础上,通过化学整理的方法可进一步提高织物的抗起毛起球性能。
目前,抗起毛起球整理方法主要有蛋白酶处理和树脂整理法2种。
蛋白酶处理法:通过蛋白酶对特定蛋白质的水解和机械的冲击作用相结合来达到抗起毛起球的目的。
通过以上2种作用的结合,有效去除了表面的毛茸和纤维的末梢。
随着绒毛的去除,织物的组织变得清晰,色泽明丽,织物的起毛起球趋势明显减少。
蛋白酶整理效果是持久的,即使在家用洗衣机里重复洗涤后,织物仍无起毛起球现象。
树脂整理法:该方法主要是利用树脂在纤维表面交联成网状膜的功能,使纤维表面包裹一层耐磨的树脂膜,减少纤维的滑移;且使纤维端粘附于纱线上,摩擦时不易形成毛茸,从而有效地提高织物的抗起毛起球性。
一般采用聚氨酯树脂、丙烯酸树脂等。
用蛋白酶进行抗起毛起球整理,对织物的抗起毛起球性提高较大,可以提升1~2级;树脂整理可提高0.5—1级。
2生产举例2.1精纺面料马裤呢的抗起毛起球整理织物:纯毛马裤呢(橄榄绿)。
整理工艺路线:半成品一二浸二轧(带液率65%~70%)一烘干一罐蒸。
工艺配方:抗起毛起球剂Es 30 g/L,渗透剂ST一20 1 g/L。
其整理结果如表l所示。
2.2羊绒衫的抗起毛起球整理近几年由于畜牧业大多采用圈养,使得羊绒的质量下降,再加上企业为了降低成本,采用各种品质的混绒,从而导致了羊绒衫的品质下降,起毛起球现象日趋严重,一度成为消费者投诉的热点。
另外,由于技术壁垒,使出口产品对羊绒衫的抗起毛起球性能也提出了更高的要求;企业之间为了提高竞争力,也在试图从其它方面来提高羊绒衫的品质。
羊毛的蛋白酶改性整理综述
应 用等 , 最后 指 出蛋 白酶在 印染行 业 中的 巨大发 展前 景 。
关键词 : 蛋白酶 ; 羊毛 ; 改性 ; 整理 中图分类号 :S9 . 3 文献标识码 : 文章编号 :05 9 5 (0 60 — 02 0 T 15 2 5 A 10 — 30 20 )8 0 1— 3
作 者 简 介 : 冬梅 (9 0 ) 女 , 周 1 8 一 , 黑龙 江 省伊 春 市人 , 读 硕 士 在
生, 主要 从 事印 染助 荆的 开发 以及 染整 新 工艺 、 新技 术的研 究
分 布 , 羊 毛 细胞 连 接 的桥 梁 , 而对 羊 毛 的机 械 是 因
维普资讯
1 蛋 白酶 的应 用 现 状 ( 1 】
绿 色环保是酶在 印染 中应用 的鲜 明特色 . 广阔 有
的发展前景 。蛋 白酶可用 于对羊毛 织物 的防毡缩 整 理、 超柔软丝光整理 、 抗起毛起球 整理等 , 是羊毛制品
物蛋 白酶和微 生物 蛋 白 酶 : 据活 性 温度 的高 低可 根
第 2 8卷第 8 期 20 0 6年 8月
周 冬 梅 等 : 毛 的蛋 白酶 改 性 整 理 综述 羊
l 3
性 能起 着至 关重要 的作 用
32 蛋 白 酶 对 羊 毛 的 减 量 机 理 .
有 很高 的要求 羊毛织 物 由于 纤维 表面 鳞 片存 在 定
向摩 擦 效应 . 易产 生 毡 缩 现 象 . 能 达 到 机 可 洗 容 不 要 求 ] 。 氯 化 作用 常 用于 羊毛 纤 维鳞 片改 性 . 了防止 为
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一、蛋白酶的分类、主要用途及作用二、产蛋白酶菌株的筛选三、产酶发酵四、蛋白酶活性测定的方法蛋白酶的分类、主要用途及作用酶:酶是具有生物催化功能的生物大分子。
蛋白酶:水解蛋白质肽键的一类酶的总称蛋白酶分类:1据水解多肽的方式分为内肽酶和外肽酶2据反应的最适pH值分为酸性,碱性,中性蛋白酶蛋白酶简介:广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。
微生物蛋白酶,主要由霉菌、细菌,其次由酵母、放线菌生产。
催化蛋白质水解的酶种类很多,重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶等。
蛋白酶对所作用的底物有严格的选择性,一种蛋白酶只能作用于蛋白质分子中一定的肽键,如胰蛋白酶催化水解碱性氨基酸所形成的肽键。
蛋白酶分布广泛,主要存在于人和动物消化道中,在植物和微生物中含量丰富,由于动植物资源有限,工业生产上生产蛋白酶制剂主要利用枯草杆菌等微生物发酵设备。
一、酸性蛋白酶定义:酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类注:酸性蛋白酶是指蛋白酶具有较低的最适pH,不是指酸性基团存在于酶的活性部位.简介:主要来源于动物的脏器和微生物分泌物,包括胃蛋白酶、凝乳酶和一些微生物蛋白酶。
根据其产菌的不同,微生物酸性蛋白酶可以分为霉菌酸性蛋白酶、酵母菌酸性蛋白酶和担子菌酸性蛋白酶,根据作用方式可以分为两类:一类是与胃蛋白酶相似,主要的产酶微生物是曲霉、青霉和根酶等;另一类是与凝乳酶相似,主要产酶微生物是毛酶和栗疫酶等,从酶的活力-PH曲线分析,在酶的活性部位中含有一个或更多的羧基,这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。
酸性蛋白酶具有较好的耐酸性,目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶,此类酶的最适作用pH值为3.0左右,当pH值升高时,酸性蛋白酶的酶活会明显降低,且此类酶不耐热,当温度达到50℃以上时很不稳定,从而限制了酸性蛋白酶的应用范围。
基本性质酸性蛋白酶的最适PH从2左右(胃蛋白酶)到4左右应用1酿酒:酸性蛋白酶在酿酒的过程中起协同作用,具有溶解发酵原料,促进微生物繁殖,降解酵母菌体蛋白等多种功能。
2毛用酸性蛋白酶最适ph3.5,最适温度40度,用该酶处理预处理后的羊毛,可以得到较大的减量率和较好的细度。
面临的问题:酶对羊毛的作用活力不高。
3食品工业:食品上用以淀粉改良,提高食品风味、改良品质,因能提高氨基酸含量4啤酒生产:能有效阻断双乙酰生成,缩短啤酒成熟期。
饲料添加剂:提高饲料利用率。
二、碱性蛋白酶简介碱性蛋白酶是由造育的地衣芽孢杆菌发酵而得,主要成分为枯草杆菌蛋白酶,是一种内切酶,催化部位为丝氨酸,分子量约为27300。
碱性蛋白酶是由造育的地衣芽孢杆菌发酵而得,主要成分为枯草杆菌蛋白酶,是一种内切酶,催化部位为丝氨酸,分子量约为27300。
基本性质适宜于在40-55℃、PH9-11的碱性条件下使用,超出以上范围酶的活力下降。
重金属离子和阳离子表面活性剂对其活力有抑制作用,应用中应避免。
应用碱性蛋白酶是目前市场上流行的洗涤添加剂,能大幅度提高洗涤去污能力,特别对血渍、汗渍、奶渍、油渍等蛋白类污垢,具有独特的洗涤效果。
二、中性蛋白酶简介中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的,属于一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。
在一定温度、PH值下,本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。
可广泛应用于动植物蛋白的水解基本性质水解温度 35 ~55 ℃ PH 值: 6.0 ~ 7.5应用1动植物蛋白水解粉(HAP、HVP)生产的应用利用中性蛋白酶的酶促反应,可把动植物的大分子蛋白质水解成小分子肽或氨基酸,以利于蛋白质的有效吸收和利用,其水解液AN%高,水解度高,风味佳,已广泛用于生产高级调味品和食品营养强化剂,各种动物来源性抽提物生产功能性骨、肉提取物(骨素)、水产提取物、蛋白胨、肽等及研究开发一些高附加值的功能食品。
2焙烤行业的应用:中性蛋白酶可将面团的蛋白质水解成胨、肽类甚至氨基酸,从而减弱面团筋力,使它具有良好的可塑性和延伸性,保持清晰美观的印花图案。
改善成品的光泽、使饼干断面层次分明,结构均匀一致,口感松爽酥脆。
3大豆分离蛋白的应用:能水解大豆分离蛋白成小分子肽,大大提高了大豆分离蛋白的生物效价,使其易为人体消化吸收,同时还提高了溶解,降低了粘度,改善了大豆分离蛋白的功能特性。
4酵母抽提物、酵母浸膏的生产应用提高最终产品的蛋白质利用率及风味5啤酒工业:添加中性蛋白酶分解蛋白质为多肽和游离氨基氮,特别对大麦,大豆等植物性蛋白作用效果明显,用于啤酒生产,可排除蛋白质产生的"冷混浊"现象。
6医药工业的应用:含中性蛋白酶的药物,可起到消炎、利胆、止痛、助消化的功效。
7纺织工业的应用:用中性蛋白酶处理过的羊毛,其抗张度比常规方法高,毛线手感柔软,收缩性为0;还可用于蚕的脱胶和蚕丝的精炼。
8皮革工业的应用:利用中性蛋白酶可制成脱毛剂,经鞣制的皮革,脱毛干净,粒而清晰,无明显损伤,毛孔细致光亮。
9饲料工业的应用:加入饲料配方中或直接与混合饲料混合饲喂,可提高蛋白质的利用率和降低饲养成本。
产蛋白酶菌株的筛选方法一(形成芽孢产蛋白酶菌株的筛选)实验方案设计一、实验原理枯草杆菌是属于芽孢杆菌属的一类细菌。
枯草芽孢杆菌的分布十分广泛,主要存在于土壤或腐烂的稻草之中。
由于能够形成芽孢,因此能够抵抗高温,低温等不良环境,所以是实验室及工业生产中主要污染菌之一,危害极大。
但是许多枯草芽孢杆菌能分泌蛋白酶、淀粉酶、抗菌素等物质,是工业酶制剂生产的重要菌种。
例如,我国使用的BF7658枯草芽孢杆菌生产а-淀粉酶,用于淀粉水解,纺织品退浆等。
又如AS1398枯草杆菌是生产蛋白酶的重要菌株。
1. 枯草芽孢杆菌的芽孢耐热的特点。
由于芽孢具有较强的抗高温能力,分离纯化时可采用热处理的方法,即通过高温加热杀死其中不生芽孢的菌种,使耐热的芽孢菌得到富集。
2. 枯草芽孢杆菌的产酶特征。
利用枯草芽孢杆菌产生水解酶的特性,可以选择酪蛋白或淀粉为主要营养成分的分离培养基,因菌体分泌的酶可以将大分子的蛋白或淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。
根据透明圈直径(H)和菌落直径(C)之比值(H/C)可以初步确定酶活力,其比值越大,酶活力越高,进而可筛选出高产酶活的菌株。
3. 枯草芽胞杆菌的形态特征枯草芽孢杆菌的细胞大小0.7×2~3 μm,营养细胞为杆状,杆端钝圆、单生或者短链,着色均匀,无荚膜,周边运动,革兰氏染色阳性。
有芽孢0.6×1~1.5 μm,芽孢中生或近中生,壁薄,不膨大,孢子呈椭圆或长筒形,常为两端染色。
菌落变化很大,枯草芽孢杆菌在麦芽汁琼脂培养基斜面上,菌落呈细皱状,干燥或颗粒状。
在土豆培养基上菌落呈细皱状,干燥,有时呈现天鹅绒状的菌苔,在液体培养基表面形成银白色的菌膜。
菌落粗糙,扁平、扩展,不透明,不闪光,表面干燥,污白色或微带黄色。
4. 枯草芽胞杆菌的生理生化特性枯草芽孢杆菌能够液化明胶,冻化牛乳,还原硝酸盐,不产生吲哚、H2S,V-P反应阳性,水解淀粉。
葡萄糖发酵产酸不产气,需氧,适温25~31℃生长。
二、实验材料及用具(1)肉汤培养基:组成:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml,煮沸后调节ph7.2-7.4,121度高压灭菌15min。
.配置100ml,其中20 mL液体培养基放入250 mL锥形瓶中(内装玻璃珠10颗);50 mL固体斜面培养基分装在试管中:5mL/支,10支。
(2)酪素培养基:组成:蛋白胨10 g,葡萄糖1 g,氯化钠5 g,氯化钙0.1 g,L-酪氨酸0.1 g,琼脂22 g,酪素5 g,蒸馏水1 000mL,pH 7.2~7.4,112℃ ,灭菌30 min.200 mL放入500 mL的锥形瓶中,6个平板,pH 6.5~7.0,121℃,灭菌20min,倒好平板后进行无菌检查。
(3) 生理盐水:0.85% NaCl水溶液,9 mL/支×10支(4) 其他:平皿10套、温度计、水浴锅、移液管、显微镜、涂布器2个,三角瓶(250mL,500 mL规格)、革兰氏染色液等。
三、实验步骤1.采样从地表下10~15cm的土壤或者枯枝烂叶、腐烂稻草中用无菌小铲、纸袋取土样。
2.增殖培养(富集培养)取土样平摊于一干净的纸上,从四个角和中央各取一点土,混匀,称取1g,置于装有20ml肉汤培养基的250ml三角瓶中,六层纱布封口,于80℃水浴加热处理10min,以杀死样品中的微生物营养体细胞。
然后30℃,150 r/min,振荡培养24h。
取样镜检形成芽孢的情况。
3. 涂布分离将增殖培养液置于80℃水浴中加热10min,再次杀死不形成芽孢的营养体细胞,以浓缩芽孢杆菌(第二次加热处理前,取1ml培养液经适当稀释后作革兰氏染色,观察是否有枯草芽孢杆菌存在,本实验中略去该步骤)。
然后取1 mL处理液以10倍稀释法分别稀释到10-4,10-5,10-6等。
分别取0.1mL菌液于无菌的酪素培养基平板上(初筛平板,每个稀释度平均两皿),用灭过菌的涂布棒将菌液均匀涂布在酪素平板上,倒置于30℃培养箱中培养24~48h。
观察酪素平板上菌落周围的透明圈,挑(H/C)比值大的菌接入斜面培养基,30℃培养24h,备用。
4. 纯化用平板划线分离法在酪素平板或牛肉膏蛋白胨平板上分离纯化挑选出的菌株。
5. 纯种鉴定菌种经革兰氏染色,油镜观察,从细胞形态及菌落特征进行鉴别。
①细胞形态,菌落特征,芽孢形成情况。
②产蛋白酶能力的测定:直接观察在酪素平板上菌落周围所形成的透明圈。
6.菌种保藏该实验分离得到的枯草芽孢杆菌作为后续实验的菌种使方法二(利用蛋白水解圈)一实验原理通过样品采集、富集培养、浓度稀释、涂布培养、传代培养和鉴定来分离产蛋白酶的菌株。
为了得到含有较多所需菌株的样品,采集样品时要在含有枯叶草根等土壤肥沃的地方采集。
通过富集培养使能产生蛋白酶的菌株数量增加,比例增大,利用显微计数法计数,稀释到合适的浓度,使其涂布培养后长成单个菌落,然后进行传代培养,再进行鉴定,在鉴定时为了菌株不受污染,利用影印平板法将菌株接种到两个平板的对应位置,一个平板用来接种到试管中,另一个平板用来检验。
Folin试剂与酚类化合物(Tyr,Trp,Phe)在碱性条件下发生反应形成蓝色化合物,用蛋白酶分解酪蛋白生成含酚基的氨基酸与Folin试剂呈蓝色反应,检验时将福林试剂滴到菌落上,若菌落周围出现透明圈,则说明菌落周围的蛋白质被细菌分解了,细菌产生了蛋白酶。
本实验含有一个对照,即培养基不接菌种的平板,该对照若无杂菌生长,则说明在这种培养基长出的菌落是所接中的细菌生长的.自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后,其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈。