肌肉中肌苷酸的高效液相色谱测定法

定。 ｔ ａ ２用离子对色谱法 Ｋｉｄ等〔 ａ 〕 测定。本文采用
反相色谱法对大白鼠和小白鼠腿肌中的肌苷酸用外
标法进行定 量测定 。
实 验
部 分
（ 一）仪器和试剂 色谱仪：日本 岛 津 ＬＣ ４ ，Ｓ Ｄ－ 紫外分光检测器，Ｃ Ｒ２ Ａ Ｐ １ － Ａ数据微处理
机。 谱 Ｈｐｒｌ ， μ ，５× ． ｍ 色 柱： ｙ ｓ Ｃ８５ｍ １ ４ｍ ， ｅｉ １ ０ ６
ｄｔ ｍ ｎｔ ｎ Ｃ２， ｅ＋Ｎ２，ｎ＋Ｃ ２ ａｄ ｅ ｒ ｉ ｉ ｏ ｕ＋Ｆ３， ｉ Ｚ ２， ｏ＋ ｎ ｅ ａ ｏ ｆ ＋ ，
Ｐ ２ｂ ｉ ｃ ｍｔ ｒ ｈ ．ｍｘｕｅ ｍ ｏ ｂ＋ ｙ ｈｏａ ｇ ｐ ｏ ｎ ｏａ ｉ ｒ ｏ６ ｍｌ ｔ ｆ
ｃ ｒ ａｉ ＋３ ｍ ｌ ｌ ａｉ＋ ０ ｍ １ ｔ ｉｉ ｃ ｔｃ ｄ ｍ ｏ ｏａ ｃ ｄ ３ｍ ｏ ａｅｃ ｘｉ ｃ ｃｉ
取腿肌剪碎放入试管，管口 用塑料布包扎紧，在水
浴上煮沸１，冷却后离心 １ｍｎ上清液用氯仿－ ｈ ０ ｉ， 苯 酚饱和溶液去一次蛋白，再用氯仿反复去蛋白，直
至氯仿 与水的界面 间无蛋 白为止 。
（ Ｉ 标准溶液的 三） ＭＰ 回收 用外标法测定Ｉ 、Ａ 、 Ｎ 混合溶液中 ＭＰ ＭＰ Ｉ Ｏ Ｔ 的 ＭＰ 浓度， 如表１ 所列，回收率良 好。
表 １
标准ＩＰ Ｍ 溶液的回收
结 果 和 讨 论 （ 一）分离条件的选择 用４ｍｍｏ Ｌ ０ ｌ 磷酸盐 ／ 缓冲溶液作流动相，调节不同的Ｐ Ｈ值，在Ｃ８ １ 柱上 进行分离。在Ｐ ０— ． Ｈ６ ７ 范围内，Ｉ ５ ＭＰ 腺苷单磷
酸（ＭＰ和肌苷 Ｉ Ｏ 都 Ａ ） Ｎ ） 能很好分离，而在 ｐ Ｈ
ｗ ｈ ａ ｐ ｓｅ ５ ａｄ ／ ｉ ｄｔ ｔ ． ｉ ａ ｌ ｉ ｏ ０ｌ Ｕ Ｖｓ ｅ ｏ ｔ ｓ ｅ ｆ ｎ Ｖ ｍ ｚ ｅｃ ｒ ｎｅ ｅ ｏ ｒ ｇ ｔ ４ １ ４ ｏ Ｌ４（－ｙｉ ｄｔｔ ｎ ｅ ｗ ｓ ０ ｍ ｌ －２Ｐ ｒ ｅｃ ｉ ｅ ｎ ａ × － ／ ａ ｉｌ ｏ ｅ ｒｎｌ Ｒ ｉ ３ ｏ Ｌ ｍ ｎ ｍ ｙａ ）ｒ ｅ ｉ （Ａ ） ｍ １ ａ ｏｉ ｚ ｓｃ ｏ Ｐ ｎ ／ ｍ ｕ ｈｄｏｉｅ ｌ ｏ Ｌ ｅｃ ｄ Ｔ ｉ ｍ ｔｏ ｙｒｘｄ ａｄ ｌ ａ ｔ ａｉ． ｈ ｎ ｍ ／ ｃｉ ｃ ｓ ｅ ｄ ｈ ｗｓ ｌ ｄ ｔ ａａｙ ｓ ｈｍ ｎ ｉ ａ ａｐｉ ｔ ｈ ｎｌ ｉ ｏ ｕ ａ ｈ ｒ ｐ ｅ ｏ ｅ ｓ ｆ ａ．
ａｉ＋１ｇＬ ｈ ｍ ｒｅ １ｍ ｏｈｄｏ ｃ ．／ ｌ ｉ ｎ ａ ａｄ ｍ ｌ ｒ－ ｄ ５ ｉ ｕ ｉｔ ｎ ０ ｔ ｔ
ｃｌｒｃ ｉ ｗ ｓ ｅ ａ ｅｕｎ ｗｉ ａｆｏ ｒｔ ｈｏｉ ａ ｄ ｕ ｄ ｌｅ ｔ ｔ ｗ ｅ ｃ ａ ｓ ｓ ｈ ｌ ａ ｏ １ ｍｌｍｉ，ＨＰ Ｃ Ｃ － ｃｌｍｎ ａ ｕｅ ｆ ． ０ ／ ｎ Ｉ － Ｓ２ ｏｕ ｗ ｓ ｄ ｓ
物 肌肉中 肌苷酸的测定。 方法简便、 快速、精确 度
较高 。
参 考 文 献 〔 〕刘望夷等， １ 中国农业科学， ，（ ８ ． ４９１ ０ ７ ９）
〔 〕 ＥＷ ｔ ａｅ ａ ， ｎｌＣ ｉ ．Ａ ｔ ６， ２ ．ａ ｎｂ ｅ ｌ Ａ ａ ｈ ａ ｔ ． ． ｍ ｃ ，１４ ａ
（ 稿 日 １８ １ 收 期： ９ 年 月４日 ９ ） Ｔｅ ｔｒｉ ｔｎ ｌ ｓｅ ＇ ｏｏ ｏ ｈｔ ｉ ｈ Ｄ ｅｍｎ ｉ ｏ ｎ ｉ ５ Ｍ ｎｐ ｓ ａ ｎ ｅ ａｏ ｆ ｎ － ｏ ｈ ｐ ｅ Ｍ ｓｅ Ｈ ｈ ｅ ｏ ａｃ Ｌ ｕ Ｃｒ ａｏ ａｈ ｕ ｌ ｂ ｉ－ ｒｒ ｎ ｉｉ ｈ ｍｔｒ ｙ ｃ ｙ Ｐ ｆ ｍ ｅ ｄ ｏ ｇ ｐ ｇ ｑ Ｄ Ｈ ｎｈ ａ Ｌ Ｈｕｍ ｉ ｕ Ｃ ｏｇａ ，Ｌ ｅｇｕ ， ｕ ｉｅ ，Ｌ ｏ ｎ ｙｎ ｉ ｈ Ｚｎ ｈ ａ ａ ｎ Ｌ ｉｅ ｉ ，Ｎ ｎｉｇ ａ ｅｇ ｕ，Ｎ ｊｉｇ ｎｖｒ ｔ ｓ ｙ ａ ｎ：Ｚ ｏ Ｈ ｕ ｉ Ｐ ｙ ｃ ａｄ ｅ ｉ ｒ Ｔ ｓ ｎ Ｃｎｒ ｏｍ ｈｓｓ Ｃ ｍｓ ｙ ｔ ｇ ｔｅ ｉ ｎ ｈ ｔ ｅｉ ｅ ｏ Ｊ ａｇｕ Ｎ ｎｉ ｆ ｎ ｓ ａｊｎ ｉ ， ｇ Ａ ｅ ｏ ｉ ｐｅ ｎｅ ｆ ｔ ｄｔ ｍ ｎｔ ｎ ｍ ｔ ｄ ｒ ｅｔ ｏ ｈ ｅ ｒ ｉ ｉ ｎ ｓ ｓ ｄ ｅ ｅ ａ ｏ ｒ ｏ ｉ ｓ ｅ ｏｏｈｓｈｔ （ ） ｔ ｍ ｓ ｅ ｆ ｉ ５ｍ ｎｐｏ ａ Ｉ ｎ ｎ － ｏ ｐ ｅ ＭＰ ｉ ｈ ｕ ｌ ｎ ｅ ｃ ｏ ｍ ｕ ａｄ ｔ ｈ ｈｐｒ ｒ ａｃ ｌ ｕｄ ｆ ｓ ｎ ｒ ｂ ｉ －ｅ ｏｍ ｎ ｉ ｉ ｏ ｅ ａ ｙ ｇ ｆ ｅ ｑ ｃｒｍ ｔ ｒｐｙ Ｈ ｐｒ ｌ ｃｌ ｎ ｉ ｈ ａ ｇ ｈ ｏ ｙｅ ｉ Ｃ ８ ｕ ｗ ｔ ｏ ｏａ ｎ ｓ １ ｏｍ ｈ ４ ｍ ｏ／ ｐ ｏ ｈｔ ｂｆ ｒ ｕ ｏ ａ ｍ ｂ ｅ ９ ｌＬ ｓ ａ ｕ ｅ ｓｌ ｉ ｓ ｉ ｍ ｈ ｐ ｅ ｆ ｏ ｔ ｎ ｏ ｌ ｐａ ． ｈ ｑａｔａ ｖ ｄｔ ｍｎｔ ｎ ｓ ｅ ｈ ｅＴ ｅ ｎｉｔ ｅ ｅ ｉ ｉ ｗ ｂｓ ｓ ｕ ｔｉ ｅ ｒ ａｏ ａ ａ ｄ ｏ ｅｔ ｎｌ ｄｒ ｍ ｔ ｄ Ｔ ｅ ｅ ｉｅｔ ｎ ｅ ａ ｓ ｎａｄ ｈ ． ｈ ｃ ｆｃ ｎ ｏ ｘｒ ｔ ａ ｅｏ ｏ ｆｉ ｆ Ｖ ｒ ｔ ｎ ｄ ｏｅ Ｗ ｒ ０ —１ ％ ｄ ａｉ ｉ ａ ｒ ｖｒ ｅ ． ． ａ ９－ ａ ｏ ｎ ｅ ｙ ｅ ｃ １ ３ ｎ ７ １４ ｒ ｐｃｖｌ ａ ｔｅ ｅ ｉ Ｉ ｅ ｏ Ｃ． ０％ ｓ ｔ ｅ ｔ ｄｔ ｔ ｎ ｖｌ ａ ｅ ｅ ｉ ｙ ｈ ｅ ｃ ｏ ｅ ｆ ５ Ｐ Ｍ Ｔｅ ｉ ｍ ｎ ｔ ｔ ｌ ａ ｏｎ ｗ ｓ ０ ． ｈ ｍｎ ｕ ｄ ｅａ ｅ ｕｔ Ｐ ｉ ｅｃ ｂ ｍ ａ
３ 。参照刘望夷等〔 的样品处理法并稍 头 １ 〕 加改进。
将小白鼠的颈椎折断和大白鼠的头颅剪断后立即取 它们的腿肌 分别用预冷的１ ５ ． ％ＫＣ溶液清洗。 １ ｌ （ 二）Ｉ 标准曲线回归方程为Ａ １ １Ｃ＋ ＭＰ ．５ ８ １ ９ ×１－，相关系数为γ ． ９， ． ６ ０３ ０ ＝０ ９９ ９
匀浆自 装柱， 试剂： 肌苷酸、 腺苷酸和肌苷均为层
析纯，其它试剂均为分析纯。肌苷酸 （ ）标准 Ｉ ＭＰ
液：１μ／ ｌ磷酸缓冲溶液：４ｍ ｏ Ｌ， ０ｇｍ ０ ｍｌ 用 ／ Ｎ Ｏ 调 一定的Ｐ 。 ３ Ｈ 节至 Ｈ
（ 二）样品的处理 小白鼠为昆明品系， 雌性， 幼年 （ 个月）２头，中年 （ 年）２头，大白鼠 １ ０ １ ０ Ｗｉ ａ种，雌性 幼年 （２ ｓｒ ｔ ７天）４ 头。老年（ ２ ２
７ 时如图 １ ．比 ０ 所示，Ｉ ＭＰ的峰形尖锐，更有利于定
（ 四）样品的测定 取样品溶液０ ｍｌ ． 用水稀释２倍，进样 １μ １ ５ ０１ ， 测得结果列于表２。表２中实际浓度为样品稀释前
的浓度。 上四种样品பைடு நூலகம்分别定量加入 Ｉ 在以 ＭＰ标
准溶液，使Ｉ 的浓度增加 ２． ｇｍｌ ＭＰ ０ μ／ ，测得其回 ０
６ｎｇ ．
用气相色谱法鉴定发射火药中的添加剂
卢永志 邵昌仪 陶 莉
（ 武汉大学分 析测试中心， ３０２ ４０ ）
发射药的种类有多种，这主要根据所含添加剂 的种类不同而加以分类。因此，对发射药中添加剂 成份的分析可鉴别发射药的种类。
多年来，国内 外曾报道过鉴测发射药添加剂的
各种有效方法〔 〕 而气相色谱法则以其简单、 １ ， －３ 快速、实用的优点被人们所重视。作者在瞿慧生等 人〔 ４工作的基础上用填充柱取代毛细管柱，从而 使分析速度、灵敏度大蟠提高。 大岣摺
收 率列于表 ３。 表 ２ 样品中Ｍ 的测定 ＩＰ
表 ３
样品中ＩＰ Ｍ 的回收 试验
１９１ ４． ３（ ８） ９ 〔 〕 ＹＫｔ ａ ａ，． ｓ ｃＯ ｆＡ ａ Ｃ ｅ ． ３ ． ｉｄ ｅ ｌ ＪＡｓ ． ｆ ｎｌ ｈｍ， ａ ｔ ． ｏ ． ．
６， ２１８） ６ ３（９３． ６
图２ 为幼年大白鼠腿肌提取液的色谱图。 从以上实验可知，在测定Ｉ 的浓度约５ｐ ｍ ＭＰ ｐ 时的变异系数为０ —１ ％，回收率在 ９—１４ ． ． １ ３ ７ ０％。 肌苷酸的最小检知量为 ６ｇ ｎ 。本方法可用于其它动
肌肉中肌苷酸的高效液相色谱测定法
都恒华 吕慧 梅 罗崇延 李增华
（ 南京大学， １０８ ２００）
赵厚民
（ 苏省理化测试中心， 江 南京）
肌肉中 肌苷酸的含量是肌肉 鲜度的一种标志。
近年来肌苷酸有Ｗａａａｅ １用多种酶电极法测 ｔｎｂ等 〕
量测定。Ｈ ． ｐ ７ 时峰形虽好，但对固定相不太有利， ５ 故选用ｐ Ｈ为７ 的流动相。