色谱分析复习题及答案

3、气相色谱定性的依据是什么？主要有哪些定性方法？ 答：不同组分由于其结构不同，与固定相的作用同，因而流出柱的时间不相同。

4、如何选择气液色谱固定液？ 答：依据相似相溶原则选择固定液。

5、气相色谱定量的依据是什么？为么要引入定量校正因子？有哪些主要的定量方法？各适于什么情况？

答：色谱定量的依据是： 在一定的色谱条件下，进入检测器的被测组分的质量m i 与检测器产生的响应信号（峰面积A i 或峰高h i ）成正比，即：

i i i A f m ⋅= 引入定量校正因子的原因

：因为A i 的大小和组分的性质有关，因此，同一检测器对不同组分具有不同的响应值，故相同质量的不同物质通过检测器时，产生的峰面积不等，因而不能直接应用峰面积计算组分的含量。为此，引入“定量校正因子”以校正峰面积，使之能真实反映组分含量。

归一化法 ：应用该方法的前提条件是试样中各组分必须全部流出色谱柱，并在色谱图上都出现色谱峰。

外标法：即所谓校准曲线法（A －c 曲线）。外标法简便，不需要校正因子，但进样量要求十分准确，操作条件也需严格控制。适用于日常控制分析和大量同类样品的分析。

流动相中的溶解度反而减小，所以k值增大。由1.2增大为2.24。

3、在反相色谱中，流动相从40%（V/V）甲醇—水改变为60%（V/V）甲醇—水，问组分的调整保留值将改变多少? 为什么? （P’ 甲醇=5.1，

P’ 水=5.1）

提示：对于由溶剂A和B组成的二元混合溶剂，其极性可表示为

Pab ‘=a P a’ b P b’

式中a和b分别为溶剂A和B在混合溶剂中的分数。

解：在40%配比时，混合溶剂的极性为P1’ =0.46×5.1 0.6×

10.2=8.16

在60%配比时，混合溶剂的极性为P2’ =0.6×5.1 0.4×10.2=7.14

P2’= P2’- P2’=7.14-8.16= -1.02

根据反相色谱体系∴在反相色谱中，流动相的极性变弱（P’由8.16变为7.14），溶剂强度增加，洗脱能力增加，因而使组分的调整保

留时间减少到原来的1/3.2。

4、某色谱体系采用25%三氯甲烷/正己烷为流动相，发现组分分离不十分理想，想通过改变流动相的选择性来改善分离选择性，选用乙醚/正己烷为流动相，问乙醚/正己烷的比例为多少? （P’ CHCl3=5.1，P’

乙醚=5.1）

提示：流动相选择性的改变是通过保持溶剂强度不变时改变流动相组成来实现的，改变前流动相A/B和改变后的流动相A/C的组成

有下列关系：

解：25%的CHCl3/正己烷与37%乙醚/正己烷的溶剂强度相等，

但对样品的分离选锋性不同。

填空：

1. 氢火焰离子化检测器和热导池检测器分别属于_质量型__和___浓度__型检测器。气相色谱仪的心脏是_色谱柱___。

2. 固定液一般是按照__相似相溶___原理选择；在用极性固定液分离极性组分时，分子间作用力主要是__诱导力____，极性愈大，保留时间就愈___长__。

3. 固定液通常是高沸点的有机化合物，这主要是为了保证固定液在使用温度下有____较好的热稳定性____，防止___发生不可逆的化学反应____。

4. 用于气液色谱的担体主要分为____白色担体___、___红色担体___两类。

5. 与填充柱相比，毛细管色谱柱的相比β较大，有利于实现快速分析。但其柱容量_较小_。

6. 在HPLC仪中，为了克服流动相流经色谱柱时受到的阻力，要安装_耐高压的六通阀___。

7. 气相色谱分析中，载气仅起输送作用；而液相色谱分析中，流动相还要直接参加__实际的分配过程__，要想提高高效液相色谱的柱效，最有效的途径是__使用小粒径填料_。

8. 欲分离位置异构体化合物，宜采用的高效液相色谱的分离模式是__梯度洗脱___。

固定液的选择原则：①“相似相容”原则，②固定液和被分离物分子之间的特殊作用力，③利用混合物固定液④利用协同效应选择固定液

10．假设一个未知油剂样品，请设计一种气象色谱分析方法，并概述分析过程。

液相色谱：

11、正相HPLC与反相HPLC的主要不同之处什么？各适合分离什么物质？

答：正相HPLC是指以亲水性的填料做固定相，以疏水性溶剂或混合物做流动相的液相色谱，主要用于分离醇类，类脂代化合物、磷脂类化合物，脂肪酸以及其他化合物。

反相HPLC是指以强疏水性的填料作固定相，以可以和水混合的有机溶剂做流动相的液相色谱，主要用于分离生物大分子、卤化物和肽及蛋白质，含卢芳烃，小分子的核酸、核苷酸、多环芳烃等；

12、何为梯度洗脱？什么情况下采用梯度洗脱？

答：梯度洗脱就是有两种（或两种以上）不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程度连续的改变，以改变流动相的配比和极性。

适合:①具有较宽K范围的样品，及所有的组分的色谱峰的K值不能在0.5-20之间②大分子样品，相对分子质量大于1000的，尤其是生物样品③样品中含有高保留时间的干扰成分，在一次分析中如不把他洗脱出去，就会污染色谱柱，并影响下一次分析。④即使在使用等度时也可以使用梯度洗脱选择流动相的比例。

n有效= 16R2 [r21 / (r21 —1) ]2 = 16×1.52 ×(1.18 / 0.18 ) 2

= 1547（块）

L有效= n有效·H有效= 1547×0.1 = 155 cm

即柱长为1.55米时，两组分可以得到完全分离。

色谱法是一种分离技术，试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相

的流体（气体或液体），称为流动相。

色谱法：当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发

生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在

两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。

一、单项选择题

1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（）。

A、分配色谱法

B、排阻色谱法

C、离子交换色谱法

D、吸附色谱法

2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。

A、检测器

B、记录器

C、色谱柱

D、进样器