实验一、蛋白质的两性电离及等电点测定

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_ 2.4 1.0 3.2
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4.0 _ 1.0 4.1
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1.0 _ 1.0 4.7
2.5
_ _ 1.0 5.3
0.6
_ _ 1.0 5.9
(2)静置约20 min，观察每支试管中溶液的混浊度，以-，+， ++，+++，++++符号表示沉淀的多少，将结果记录于上表中。
（3）该实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相 当准确。除了需要精心配制试剂以外，实验中应
继续滴入NaOH溶液 至沉淀溶解
2、酪蛋白等电点的测定
（1）取5支试管，编号后按下表的顺序准确地加入
各种试剂，．然后混合均匀(每管加入酪蛋白醋酸
钠溶液后，须立即摇匀该管)。
试剂(ml)及管号
蒸馏水（ml)
1
1.6
2
_
3
3.0
4
1.5
5
3.4
0.01mol/L醋酸溶液
0.10mol/L醋酸溶液 1.0mol/L醋酸溶液 酪蛋白醋酸钠溶液 溶液的最终pH 沉淀出现的多少
【试剂】
1、0.5％酪蛋白醋酸钠
2、0.01％溴甲酚绿指示剂 变色范围是 pH3.8～5.4。指示剂的酸色型为黄色，碱色型 为蓝色。 3、0.02mol／L盐酸溶液
4、0.02mol／L氢氧化钠溶液
5、1.00mol／L乙酸溶液
6、0.10mol／L乙酸溶液
7、0.01mol／L乙酸溶液
严格按照定量分析的操作进行。
思考题 • 根据实验观察结果，指出哪一支试管的pH是酪蛋 白的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度为什么 最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质
加以说明。
【操作】
1、蛋白质的两性电离
（1）取一支试管，加入0.5％酪蛋白醋酸钠溶液20滴和0.01 ％溴甲酚绿指示剂2滴，摇匀。观察溶液颜色，记录，并 分析原因。 （2）用细滴管缓慢加入0.02mol/L盐酸溶液，、边滴边摇， 直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH值接近酪蛋白 的等电点。观察溶液颜色的变化，记录，分析原因。 （3）继续滴入0.02mol／L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色 的变化，记录，分析原因。
实 验 一 蛋 白 质 两 性 电 离 与 等 电 点
【教学目标】 1、独立操作，一丝不苟地作实验。
2、仔细观察不同阶段试剂颜色变化及沉淀的出现 和消失，通过现象观察能分析蛋白质两性电离的 性质，正确填写实验报告。
3、通过往五支不同pH值溶液的试管内加入酪蛋白， 观察沉淀出现的情况，确定其等电点。
蛋白质的性质之一：两性电离与等电点
NH3+ NH3+
P
COOH
+OH+H+
P
COO--
+OH+H+
NH2
P
COO-
正离子 pH＜pI
兼性离子 pH=pI
Fra Baidu bibliotek
负离子 pH＞pI
各种蛋白质的氨基酸组成不同，解离情况不同，
等电点不同。多数接近5.0。
【实验原理】
蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液 的pH值为等电点时游离为两性离子，溶解 度最低，容易沉淀析出。若在大于或小于 等电点的溶液中，因蛋白质分子带有同种 电荷而相互排斥，不易产生沉淀。
4、共同讨论测定等电点的原理。
一、蛋白质的两性电离 多肽链中氨基酸残基中有可解离基团， 如：末端 -COO- 、 -NH3+ ，酸性氨基酸侧链 COO- ， Lys 的ε-NH3+ ， Arg 的胍基， His 的 咪唑基。
*蛋白质的等电点(pI) 当蛋白质溶液处于兼性离子，净电荷为 零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。
（4）再滴入0.02mol／L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否 出现沉淀，记录，解释原因。当继续滴入0.02mol／L氢氧 化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色的变化。解释其原因。 作好记录。
结果及分析 操作 在酪蛋白溶液中加入 指示剂 滴入HCL至出现大量 沉淀 继续滴入HCL
实验结果
简要分析
滴入NaOH溶液