第24章_自身免疫性疾病及其免疫检测

常见自身免疫性疾病的标志抗体
标志抗体 dsDNA Sm SSB 着丝点抗体 Scl-70抗体 AKA、抗CCP抗体 Jo-1抗体 高滴度RNP抗体 肝肾微粒体抗体（LKM-1） 平滑肌抗体（SMA） AMA（M2） 相关疾病 SLE SLE SS PSS（局限型） PSS（弥漫型） RA PM/DM（进行性系统性硬皮病） MCTD Ⅱ型自身免疫性肝炎 Ⅰ型自身免疫性肝炎 PBC
一、自身免疫性疾病分类
自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)
因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障
碍所致疾病。
按疾病累及的系统区分
结缔组织疾病 神经肌肉疾病 内分泌性疾病 消化系统疾病 泌尿系统疾病 血液系统疾病 生殖系统疾病 皮肤组织疾病 循环系统疾病
按器官特异性分为两类
1987年DNA基因重组技术开始应用自身抗体研究
近十年应用分子生物学技术
常检测的自身抗体
• • • • • • • 抗核抗体（ANA） 抗可提取性核抗原抗体（ENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 类风湿因子（RF） 抗角蛋白抗体（AKA） 抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体） 抗心磷脂抗体（ACLA）
第二十四章 自身免疫性疾病及其免疫检测
第一节 概 述 一、自身免疫性疾病的分类 二、自身免疫性疾病的共同特征
第二节 自身免疫疾病与免疫损伤 一、自身抗原 二、免疫调节异常 三、遗传因素 第三节 常见的自身免疫性疾病 一、由Ⅱ型超敏反应引起的自身免疫性疾病 二、自身抗体－免疫复合物引起的自身免疫 性疾病 三、T细胞对自身抗原应答引起的自身免疫性 疾病
5. 疾病有重叠现象，即一个病人可同时患一 种以上自身免疫病
6. 病程一般较长，多迁延为慢性
7. 病损局部可发现淋巴细胞、浆细胞、中性
粒细胞等浸润
8. 免疫抑制剂治疗可取得一定疗效
第二节自身免疫疾病与免疫损伤
在某些情况下，机体的自身耐受遭 到破坏，禁忌细胞株活跃，机体免疫系 统针对某些自身组织成份产生了免疫应 答，就可能导致自身免疫病的发生。
系统性自身免疫病 (systemic autoimmune disease) 或器官非特异性或全身性自身免疫病 器官特异性自身免疫病 (organ-specific autoimmune disease)或局限性自身免疫病
自身免疫病的“病谱”
器官特异性 非器官特异性
桥本甲状腺炎
原发性粘液水肿 甲状腺机能亢进
• AnuA的检测通常采用ELISA检测法。 • AnuA具有同抗ds-DNA抗体相同的诊断特异性， 可达到95%，在系统性硬化（SSc）病中可有 20%～50%低浓度阳性率，其他自身免疫性疾
病中该抗体均为阴性。
• AnuA的表达与SLE病情活动分数相关。
三、抗ENA抗体谱的检测与应用
抗ENA抗体谱:可提取核抗原抗体的总称
抗核小体抗体
核小体（nucleosome）是真核生物细 胞核染色质的基本单位 。凋亡细胞是核 小体的重要来源，当SLE患者的吞噬细胞 对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导 致核小体在患者体内大量存积，激活B细 胞产生抗核小体抗体（Antinucleosome antibody ,AnuA）。
检测及应用 检测及应用
硬皮病
多发性肌炎/皮肌炎 混合性结缔组织病 系统性血管炎
脱髓鞘疾病
自身免疫性肾小球肾炎 肺肾出血综合征
克罗恩病
抗磷脂综合征
寻常型天疱疮
二 、自身免疫性疾病的共同特征
1. 多数病因不明
2. 患者以女性居多，并随年龄增加发病率有所增加
3. 有遗传倾向
4. 患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋 巴细胞存在
关，因此，可分为由Ⅱ型超敏反应引起的自身免疫性疾病，
由Ⅲ型超敏反应引起的自身免疫性疾病及由T细胞对自身 抗原应答引起的自身免疫性疾病。当两种或两种以上的自 身免疫病出现混合的临床表现时，称为混合性结缔组织病 （mixed connective tissue disease， MCTD）。
一、由II型超敏反应引起的自身免疫 性疾病
如：DM1/I型糖尿病； MS/多发性硬化症
第四节 常见自身免疫性疾病的自 身抗体检测
自身抗体（autoantibody）
是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原 的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要 特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身 抗体(谱) 分类: 脏器特异性自身抗体 脏器非特异性自身抗体
均质型
抗dsDNA抗体 抗ssDNA抗体
抗组蛋白抗体(histone) 抗核小体抗体(nucleosome)
周边型
可见于胶原病、PBC、CAH等患者
核点型（DOTS）
抗着丝点型
见于SLE、SS、PBC、风湿病
PSS局限型标志抗体
抗原纤维蛋白型
抗RNA多聚酶Ⅰ型抗体
仅见于5%～10%的PSS，男性高于女性
2. 以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、 抗SS-B 抗体等； 3. 以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线 粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等； 4. 以抗原的化学名称分类命名，如抗DNA、抗 RNP、抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。
抗核抗体检测方法
间接免疫荧光法 （indirect immunofluorescence, IIF）
第五节 自身抗体检测的临床应用 一、自身抗体检测的一般原则 二、实验室方法的选择及结果的确认
第六节 自身免疫性疾病的相关实验检测 一、免疫球蛋白及补体检测及临床意义 二、淋巴细胞检测及临床意义 三、细胞因子检测及临床意义 四、循环免役复合物检测及临床意义
第一节 概 述



自身免疫耐受（autoimmune-tolerance）:正常 情况下，机体免疫系统能识别“自我”，对自 身组织成分不发生免疫应答反应，或仅产生微 弱的免疫应答，此为自身免疫耐受。 自身免疫(autoimmunity):是指机体免疫系统针 对自身成分发生免疫应答反应，出现自身抗体 或致敏淋巴细胞的现象。 自身抗体(autoantibody):针对自身组织器官、 细胞及细胞内成分的抗体。
一、自身抗体的特性
自身免疫性疾病的重要标志
高滴度存在于自身免疫性疾病患者
与疾病的活动性相关 参与免疫病理性损伤
自身免疫性疾病的主要实验检测
• 自身抗体 • 免疫球蛋白 • 补体 • 淋巴细胞 • 细胞因子
自身抗体研究发展简史
1948年 Haragraves等发现 LE 细胞现象 1957年 Holborow等应用IIF检测ANA 1961年 Beck等发现ANA不同荧光染色模型 60–70年代IIF、ID、CIE应用新的自身抗体 1979年 Towbin等应用免疫印迹技术检测自身抗体 80年代IB、RIP应用蛋白多肽水平认识自身抗原
酶免疫斑点法
ELISA
（Western-blot）
免疫印迹法
间接免疫荧光法示意图
荧光标记抗体
病人血清（待检抗体） HEp-2细胞 肝组织切片
IIF检测ANA荧光染色模型
细胞核
均质型 斑点型
细胞浆
核糖体型 线粒体型
细胞骨架
肌蛋白型 波形纤维蛋白型
细胞周期
中心体型 纺缍体型
核仁型
着丝点型 周边型
高尔基体型
检测自身抗体常用的方法
间接免疫荧光法（IIF） ELISA 免疫印迹法（Western-blot） 酶免疫斑点法
二、抗核抗体的检测与应用
抗核抗体::以真核细胞（如HEp-2细胞、
肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所 检测的自身抗体的总称。
抗核抗体谱
抗核抗体谱的分类和命名
1. 以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗 Sm、 抗Sa 抗体等；
二、自身抗体—免疫复合物引起 的自身免疫性疾病
如：SLE/systemic lupus erythematosus/系统性红斑狼疮； RA/ rheuma百度文库oid arthritis/类风湿性关节炎； SS/sjogren syndrome/干燥综合症
三、T细胞对自身抗原应答引起 的自身免疫性疾病
• 抗血细胞表面抗原的抗体引起的自身免疫性疾病 (如:AIHA/自身免疫性溶细胞贫血;ITP/免疫性血小板减少性紫癜) • 抗细胞表面受体抗体引起的自身免疫性疾病 (如:MG/重症肌无力; Graves disease/毒性弥漫性甲状腺肿) • 细胞外抗原的自身抗体引起的自身免疫性疾病 （如：Good pasture综合征/肺出血肾炎综合症）
扩张性心肌炎
恶性贫血 自身免疫性胃炎
自身免疫性溶血性贫血
系统性红斑狼疮
特发性血小板减少性紫癜 干燥综合征 特发性粒细胞减少症 类风湿关节炎
Addisino病
1型糖尿病 重症肌无力 多发性硬化症
自身免疫性肝炎
原发性胆汁性肝硬化 原发性硬化性胆管炎 溃疡性结肠炎
绝经过早（少数病例）
男性不育（少数病例） 交感性眼炎 晶状体源性葡萄膜炎
免疫印迹法 免疫印迹法
SDS-PAGE电泳
转移电泳
酶免疫检测
抗可提取性核抗原（ENA）抗体
抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%~30%）
抗nRNP抗体：MCTD 95%~100%（高滴度） 抗SSA抗体：PSS 60%~75%，其它CTD 抗SSB抗体： PSS 10%~40%，其它CTD 抗Scl-70抗体：SSc 25%~75%, 标记性抗体 抗Jo-1抗体：PM/DM 25%，标记性抗体 抗rRNP抗体： SLE特异性抗体（10%~30%）
临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白
抗可提取性核抗原（ENA）抗体
ENA检测方法
• • • • •
双向免疫扩散（ID） 对流免疫电泳（CIE） 免疫印迹法（Western-blot） ELISA 酶免疫斑点法
一、自身抗原
隐蔽抗原的释放
自身成分的改变
共同抗原引发的交叉反应
二、免疫调节异常
淋巴细胞旁路活化 多克隆刺激剂的旁路活化 辅助刺激因子表达异常 自身致敏T细胞与自身抗原应答
三、遗传因素
第三节 常见的自身免疫性疾病
由于病理性的自身免疫应答可发生在体内任何组织器
官，临床上常以病理损害的机制来区分各类自身免疫性疾 病，而许多自身免疫性疾病与超敏反应的发生髻之密切相
检测方法及应用 检测方法及应用
• 间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常 规检测抗dsDNA抗体最常用的方法。 • 抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%～ 100%，但其敏感性仅为30%～50%，因此抗
dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。
抗dsDNA抗体
SLE特异性抗体，与病情活动度相关。
SLE标志抗体
原发性胆汁性肝硬化标志抗体
抗Jo-1抗体
抗高尔基体抗体
多发性肌炎（PM）标志抗体
偶见于SLE和SS
抗肌动蛋白抗体
见于自身免疫性慢性活动型肝炎
抗双链DNA抗体
• 抗dsDNA抗体与细胞核DNA（外围区）脱 氧核糖磷酸框架结合。
• 抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗 体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相 关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗 提供了有效的实验室手段。
溶酶体型 颗粒型
细胞角蛋白型
原肌球蛋白型 纽带蛋白型
纺缍丝型
中间体型 PCNA型
核点型(dots)
斑点型（nRNP/Sm）
斑点型（SSA/SSB）
高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。 抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。
抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼 疮 （100%）。抗SSB抗体几乎仅见于 女性，可出现于SS和SLE。
仅见于硬皮病患者，阳性率为4%
抗PM-Scl（PM-1）抗体
见于重叠综合征（多发性肌炎PM /皮肌炎 DM / 弥漫性PSS ）
抗Scl-70型
PSS 弥漫型的标志抗体
增殖细胞核抗原Ⅰ型
（PCNA）
SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关
抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体
抗线粒体抗体（AMA）
四、与小血管炎相关的自身抗 体检测与应用
抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies, ANCA）是一组 以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原， 与临床多种小血管炎性疾病密切相关 的自身抗体，对系统性血管炎、炎症 性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有 重要意义。
第四节 常见自身免疫性疾病的自身抗体检测 一、自身抗体的特性 二、抗核抗体的检测与应用 三、抗ENA抗体谱的检测与应用 四、与小血管炎相关的自身抗体检测与应用 五、与RA相关自身抗体的检测与应用 六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用 七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用 八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与 应用