纤维素酶产生菌

实验步骤
• 采样 采样： 从腐殖质和纤维素丰富的地点采取土样。 表层土亦可。因为此处是筛选菌种，不是 检测土壤。故，采样原则是：目标菌种最 可能出现的地点。
实验步骤
• 筛选： 筛选： 以滤纸条和CMC-Na为唯一碳源的液体 筛选培养基进行细菌的初步筛选，于28度 摇床培养1周。 两种培养基一种是溶于水的筛选压， 一种是不溶于水的筛选压。设置两种筛选 压利于筛选到目标菌株。
纤维素酶产生菌的筛选分离与 酶活检测
09工业环保与安全技术
纤维素（cellulose ）
• 由葡萄糖单元共价连接的长链所组成的结 构多糖。通常含数千个葡萄糖单位，是植 物细胞壁的主要组成成分。
纤维素（cellulose ）
麻、麦秆、稻草、甘蔗渣等， 麦秆、稻草、甘蔗渣等， 渣等 都是纤维素的丰富来源。 都是纤维素的丰富来源。是 地球上最古老、 地球上最古老、最丰富的天 高分子， 然高分子，是取之不尽用之 不竭的， 不竭的，人类最宝贵的天然 可再生资源。常温下， 可再生资源。常温下，纤维 素既不溶于水， 素既不溶于水，又不溶于一 般的有机溶剂， 酒精、 般的有机溶剂，如酒精、乙 丙酮、苯等。 醚、丙酮、苯等。它也不溶 于稀碱溶液中。因此， 于稀碱溶液中。因此，在常 温下，它是比较稳定的， 温下，它是比较稳定的，这 是因为纤维素分子之间存在 氢键。 氢键。
作业
• 下周（12周）上交纸质实验报告。内含结 果图片与结果分析。 • 同时与实验设计（纸质）一同上交。
Байду номын сангаас
实验实施1
• 5.摆放斜面，斜面至试管的1/5处即可。 • 6.将采取的土样置于灭菌冷却后的生理盐水 中，振荡10-20min，用无菌移液管吸取菌 悬液5mL至CMC-Na和滤纸条筛选培养基 （液体）中，摇床28℃培养一周。
实验实施2
• • • • • • • • 1.配制刚果红鉴定平板，无菌水； 2.包扎1ml、10ml移液管1只，空试管12只； 3.包装培养皿6个； 4. 4.将以上用品灭菌； 5.无菌操作倒平板； 6.梯度稀释涂布； 7.倒置培养于28℃培养箱48小时 8.挑取透明圈较大的菌落培养于斜面24小时，4℃ 冰箱保存
实验步骤
• 酶活检测： 酶活检测： 刚果红鉴定平板鉴定，在刚果红鉴定 平板上进行梯度稀释涂布，28度培养箱培 养48小时后，比较在刚果红鉴定平板上留 下的透明圈大小，保存透明圈大的菌株。 梯度稀释根据菌液浓度决定稀释程度。 一般为10-5、10-6. 保存菌株用斜面培养24小时后，4℃冰 箱保存。
实验实施1
1.分别配制60mLCMC-Na和60mL滤纸条筛选 培养基（液体），各分装5ml到2只试管， 再向试管中加入1.5%的琼脂（制作斜面）。 滤纸条培养基中的滤纸条分开称取！余下 50mL液体培养基分装至150mL三角瓶。 2.配制约50mL生理盐水。 3.包扎准备一只5mL移液管。 4.将以上用品灭菌。
纤维素酶（cellulase ）
• 纤维素酶是一类能够将纤维素降解为葡萄 糖的多组分酶系的总称 。在分解纤维素时 起生物催化剂的作用。
纤维素酶产生菌的筛选分离
• 实验内容：从腐殖质和纤维素丰富的地点 实验内容： 采取土样，（第十周上课前12小时内采集， 并于上课时各组自行携带至实验室）。接 种至以滤纸条和CMC-Na为唯一碳源的液体 筛选培养基中，进行细菌的初步筛选，于 28度摇床培养1周后，进行刚果红鉴定平板 鉴定，（即在刚果红鉴定平板上进行梯度 稀释涂布）。28度培养箱培养48小时后， 比较在刚果红鉴定平板上留下的透明圈大 小，保存透明圈大的菌株。
纤维素酶活检测
• 1.包扎1ml、10ml移液管1只，空试管12只； 用于两瓶筛选培养液稀释。 • 2.包装培养皿6个；用于制作刚果红鉴定平 板。 • 1、2项用品可置于160℃烘箱 小时干热灭 ℃烘箱2小时干热灭 菌
纤维素酶活检测
• 3.配制刚果红鉴定平板，无菌水； 每组配制100mL刚果红鉴定培养基（制作 6个平板，用于两瓶筛选培养液的稀释涂布） 每组配制约150mL蒸馏水灭菌（用于两 组筛选培养液的稀释） 以上培养基与蒸馏水121℃,20min湿热 灭菌。
纤维素酶活检测
• 4.取出培养基，摇匀后 摇匀后，无菌操作倒平板； 摇匀后 • 5.两组培养液均进行梯度稀释涂布；（取菌 液时，请摇晃 摇晃2-3min后取，以便于悬浮菌 摇晃 后 株）
涂布平板接种法：
纤维素酶活检测
• 6.倒置培养于28℃培养箱48小时 • 7.观察结果并拍照。（拍照时，请在同一平 拍照时， 拍照时 面上放置有刻度的尺子作为参照） 面上放置有刻度的尺子作为参照 观察结果时间安排：1班，周三上午 3班 周四下午 2班 周五 • 8. 有透明圈最大的菌落的平板，直接放4℃ 冰箱保存。