柴黄颗粒中黄芩苷的含量测定研究
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测得黄芩苷峰面积的相对标准差分别为 0.67%和 0.72%，表明对照品和供试品溶液在 12 小 时内稳定。
3.8 重复性试验
按 3.1 拟定的含量测定方法，对同一批号样品(批号 3091001) ，同时制备 6 份样品供试 品溶液，精密吸取 10µl 注入液相色谱仪，计算黄芩苷含量，其相对标准偏差为 0.95%，表 明该方法重复性良好。
3. 方法与结果
3.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Alltima C18(5µm,150mm×4.6mm)；流动相：甲醇-0.3％磷酸溶液（50：50）[2]； 流速：1.0ml/min； 柱温：30℃； 检测波长：280nm； 检测器灵敏度：0.01AUFS。在选定 的色谱条件下，黄芩苷和样品中其他组分可基线分离，阴性样品在相同位置无干扰，黄芩苷 与相邻峰的分离度大于 1.5；黄芩苷峰保留时间约为 7 分钟，故确定为本品含量测定方法的 流动相，理论塔板数(N)按黄芩苷峰计算应不低于 2500。结果见图 1～3
http://www.paper.edu.cn
柴黄颗粒中黄芩苷的含量测定研究
周静波，曾冬，郭力，陈儒燕，李丛菊
成都中医药大学，成都 (611137)
E-mail: zhoujb001@sina.com
摘 要：目的：建立柴黄颗粒中黄芩苷的含量测定方法。方法：采用
AlltimaC18(5µm,150mm×4.6mm) 色谱柱；流动相为甲醇-0.3％磷酸溶液（50：50）；检测波 长为 280nm。结果：黄芩苷峰与其他杂质峰分离良好，在 0.3302µg～0.7706µg 范围内，黄
回收率(%)=
测得量(mg)－制剂中黄芩苷的量(mg) 加入黄芩苷量(mg)
×100%
编 供试品中黄芩苷
号
的量（mg）
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表 1 加样回收率试验结果(n=2)
对照品加入量
测得量
回收率
（mg）
（mg）
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平均回收率 （%）
RSD（%）
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101.50
结论：试验结果 RSD 为 1.39%，回收率在 95%～105%之间，表明本方法回收率良好
3.10 样品含量测定
按 3.1 拟定的含量测定方法，制备样品供试品溶液，对 3 批样品进行含量测定。考虑到 药材的来源、炮制加工、制剂生产及贮存等因素，确定其转移率不低于 90％，则柴黄颗粒 中黄芩苷含量应不低于 324mg/袋。结果见表 2
-3-
批号
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表 2 3 批样品含量测定结果(n＝2)
样品（g）
峰面积
含量(mg/袋)
3091001 3091002 3091003
0.10072 0.10503 0.09957
555106 563397 549871
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Determination of the contents of Baicalin in Chaihuang Granules
Zhou Jingbo, Zen Dong, Guo Li,Chen Ruyan, Li Congju
Chengdu University of TCM, Chengdu (611137)
3.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品，研细，取约 0.1g，精密称定，置 100ml 量瓶中，加甲醇 80ml， 超声处理（功率 300W，频率 5KHz）20 分钟，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤 过，精密量取续滤液 5ml 至 10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
芩苷线性关系良好（r=0.9998），平均回收率为 101.05%（n=9）RSD=1.39%。结论：该方
法简便易行，准确度高，重现性好，可用于柴黄颗粒的质量控制。
关键词：柴黄颗粒；黄芩苷；含量测定
中图分类号:R283.65；R297.1
文献标识码: A
1. 引言
柴黄颗粒是由柴胡和黄芩提取物制成的纯中药复方制剂，收载于部颁标准中药成方制剂 第十册 （标准号 WS3-B-2009-95） [1]中, 具有清热消炎的功效，用于上呼吸道感染，感冒 发烧等症状。原标准中采用紫外分光光度法对黄芩苷进行含量测定，而本试验主要采用 RP-HPLC 法对黄芩苷进行含量测定研究，取得了较好的效果，从而进一步完善和提高了柴 黄颗粒的质量控制标准。
3.9 加样回收率试验
取已知含量的供试品 9 份（批号：3091001），每份约 0.05g，精密称定，分别置 100ml 量瓶中,分别加入黄芩苷对照品溶液（浓度：1.125mg/ml）3、4、5ml(每个水平平行三份)， 照拟定的方法制备供试品溶液并测定黄芩苷含量，按以下公式计算黄芩苷的回收率。结果见 表 1。
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图 1 黄芩苷对照品色谱图
图 2 供试品溶液色谱图
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1.621 1.881 2.07 8 2.90 6 3.17 9
作者简介：周静波，男，博士研究生，研究方向为中药质量标准与化学成分。
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图 3 阴性样品色谱图
3.2 对照品溶液的制备
精密称取经 60℃减压干燥 4 小时的黄芩苷对照品 7.83mg，置 25ml 量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取 5ml 置 25ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 （62.64µg/ml）
4. 讨论
在利用 RP-HPLC 法测定柴黄颗粒中黄芩苷的含量时，我们曾采用《中国药典》2005[3] 年版(一部)黄芩药材含量测定项下的色谱条件甲醇－水－磷酸（47：58：0.2）进行试验，结 果发现供试品溶液在该条件下测定效果良好，但保留时间较长，约为 10 分钟，经过筛选发 现用甲醇-0.3%磷酸（50：50）为流动相后保留时间可提前至 7 分钟左右，且能达到基线分 离。通过线性范围、精密度、稳定性、重现性、回收率等试验考察，证明该方法快速、简便， 结果准确可靠，能对柴黄颗粒中的黄芩苷进行测定，较大地提高了柴黄颗粒的质量控制方法。
2. 仪器与试药
2.1 仪器
SHIMADZU 高效液相色谱仪(LC-10ATVP 溶剂输送系统，LC-10AVP 检测器)；TIANHE C18(5µm,150mm×4.6mm) 色谱柱；十万分之一电子天平(Sartorius BP121S)；超声波清洗器 （DL-360 中国宁波）
2.2 试药
黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110715-200514，供含量测定用)，使用 前经 60℃减压干燥 4 小时；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
3.4 阴性供试品溶液的制备
取处方中除柴胡以外的其他原料，按工艺制备方法，并按供试品溶液的制备方法制得 阴性供试品溶液。
3.5 线性范围的考察
精密量取黄芩苷对照品溶液(55.04µg/ml)6µl、8µl、10µl、12µl、14µl 注入液相色谱仪， 记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线方程为： Y=118006X+192743，r=0.9998。以峰面积值(Y)对进样量(X)作图，得一直线，结果表明在 0.3302µg～0.7706µg 范围内，黄芩苷线性关系良好。
3.6 精密度试验
精密吸取同一对照品和供试品溶液 10µl 注入液相色谱仪，连续进样 5 次，测得黄芩苷 峰面积的相对标准差分别为 0.62%和 0.81%，表明仪器精密度良好。
3.7 稳定性试验
精密吸取同一对照品和供试品溶液 10µl，分别于 0、4、8、12 小时注入液相色谱仪，
-2-
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Abstract Objective: To establish a method to Determination of the contents of Baicalin in Chaihuang Granules. Method: Alltima C18(5µm,150mm×4.6mm) was used with the mobile phase consisting of Methanol-0.3%H3PO4 (50:50), the detection wavelength was at 280nm. Result: The linear range of Baicalin was in the range of 0.3302µg～0.7706µg, r=0.9998, the average recovery as 101.05%, RSD = 1.39%(n=9). Conclusion: The method is simple、accurate and credible. It can be used for the quality control of Chaihuang Granules. Keywords: Chaihuang Granules; Baicalin; Determination
参考文献
[1] WS3-B-2009-95-2005.［S］.中华人民共和国国家药品监督管理局国家药品标准.柴黄颗粒质量标准.2005 [2] 刘广川,孙东凯,吴贵华. HPLC 法测定祛斑胶囊中黄芩苷的含量［J］．天津药学,2007. 19（6）：15-16 [3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005：211
3.8 重复性试验
按 3.1 拟定的含量测定方法，对同一批号样品(批号 3091001) ，同时制备 6 份样品供试 品溶液，精密吸取 10µl 注入液相色谱仪，计算黄芩苷含量，其相对标准偏差为 0.95%，表 明该方法重复性良好。
3. 方法与结果
3.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Alltima C18(5µm,150mm×4.6mm)；流动相：甲醇-0.3％磷酸溶液（50：50）[2]； 流速：1.0ml/min； 柱温：30℃； 检测波长：280nm； 检测器灵敏度：0.01AUFS。在选定 的色谱条件下，黄芩苷和样品中其他组分可基线分离，阴性样品在相同位置无干扰，黄芩苷 与相邻峰的分离度大于 1.5；黄芩苷峰保留时间约为 7 分钟，故确定为本品含量测定方法的 流动相，理论塔板数(N)按黄芩苷峰计算应不低于 2500。结果见图 1～3
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柴黄颗粒中黄芩苷的含量测定研究
周静波，曾冬，郭力，陈儒燕，李丛菊
成都中医药大学，成都 (611137)
E-mail: zhoujb001@sina.com
摘 要：目的：建立柴黄颗粒中黄芩苷的含量测定方法。方法：采用
AlltimaC18(5µm,150mm×4.6mm) 色谱柱；流动相为甲醇-0.3％磷酸溶液（50：50）；检测波 长为 280nm。结果：黄芩苷峰与其他杂质峰分离良好，在 0.3302µg～0.7706µg 范围内，黄
回收率(%)=
测得量(mg)－制剂中黄芩苷的量(mg) 加入黄芩苷量(mg)
×100%
编 供试品中黄芩苷
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表 1 加样回收率试验结果(n=2)
对照品加入量
测得量
回收率
（mg）
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平均回收率 （%）
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结论：试验结果 RSD 为 1.39%，回收率在 95%～105%之间，表明本方法回收率良好
3.10 样品含量测定
按 3.1 拟定的含量测定方法，制备样品供试品溶液，对 3 批样品进行含量测定。考虑到 药材的来源、炮制加工、制剂生产及贮存等因素，确定其转移率不低于 90％，则柴黄颗粒 中黄芩苷含量应不低于 324mg/袋。结果见表 2
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批号
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表 2 3 批样品含量测定结果(n＝2)
样品（g）
峰面积
含量(mg/袋)
3091001 3091002 3091003
0.10072 0.10503 0.09957
555106 563397 549871
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Determination of the contents of Baicalin in Chaihuang Granules
Zhou Jingbo, Zen Dong, Guo Li,Chen Ruyan, Li Congju
Chengdu University of TCM, Chengdu (611137)
3.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品，研细，取约 0.1g，精密称定，置 100ml 量瓶中，加甲醇 80ml， 超声处理（功率 300W，频率 5KHz）20 分钟，取出，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤 过，精密量取续滤液 5ml 至 10ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
芩苷线性关系良好（r=0.9998），平均回收率为 101.05%（n=9）RSD=1.39%。结论：该方
法简便易行，准确度高，重现性好，可用于柴黄颗粒的质量控制。
关键词：柴黄颗粒；黄芩苷；含量测定
中图分类号:R283.65；R297.1
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1. 引言
柴黄颗粒是由柴胡和黄芩提取物制成的纯中药复方制剂，收载于部颁标准中药成方制剂 第十册 （标准号 WS3-B-2009-95） [1]中, 具有清热消炎的功效，用于上呼吸道感染，感冒 发烧等症状。原标准中采用紫外分光光度法对黄芩苷进行含量测定，而本试验主要采用 RP-HPLC 法对黄芩苷进行含量测定研究，取得了较好的效果，从而进一步完善和提高了柴 黄颗粒的质量控制标准。
3.9 加样回收率试验
取已知含量的供试品 9 份（批号：3091001），每份约 0.05g，精密称定，分别置 100ml 量瓶中,分别加入黄芩苷对照品溶液（浓度：1.125mg/ml）3、4、5ml(每个水平平行三份)， 照拟定的方法制备供试品溶液并测定黄芩苷含量，按以下公式计算黄芩苷的回收率。结果见 表 1。
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图 2 供试品溶液色谱图
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作者简介：周静波，男，博士研究生，研究方向为中药质量标准与化学成分。
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图 3 阴性样品色谱图
3.2 对照品溶液的制备
精密称取经 60℃减压干燥 4 小时的黄芩苷对照品 7.83mg，置 25ml 量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取 5ml 置 25ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 （62.64µg/ml）
4. 讨论
在利用 RP-HPLC 法测定柴黄颗粒中黄芩苷的含量时，我们曾采用《中国药典》2005[3] 年版(一部)黄芩药材含量测定项下的色谱条件甲醇－水－磷酸（47：58：0.2）进行试验，结 果发现供试品溶液在该条件下测定效果良好，但保留时间较长，约为 10 分钟，经过筛选发 现用甲醇-0.3%磷酸（50：50）为流动相后保留时间可提前至 7 分钟左右，且能达到基线分 离。通过线性范围、精密度、稳定性、重现性、回收率等试验考察，证明该方法快速、简便， 结果准确可靠，能对柴黄颗粒中的黄芩苷进行测定，较大地提高了柴黄颗粒的质量控制方法。
2. 仪器与试药
2.1 仪器
SHIMADZU 高效液相色谱仪(LC-10ATVP 溶剂输送系统，LC-10AVP 检测器)；TIANHE C18(5µm,150mm×4.6mm) 色谱柱；十万分之一电子天平(Sartorius BP121S)；超声波清洗器 （DL-360 中国宁波）
2.2 试药
黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110715-200514，供含量测定用)，使用 前经 60℃减压干燥 4 小时；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
3.4 阴性供试品溶液的制备
取处方中除柴胡以外的其他原料，按工艺制备方法，并按供试品溶液的制备方法制得 阴性供试品溶液。
3.5 线性范围的考察
精密量取黄芩苷对照品溶液(55.04µg/ml)6µl、8µl、10µl、12µl、14µl 注入液相色谱仪， 记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线方程为： Y=118006X+192743，r=0.9998。以峰面积值(Y)对进样量(X)作图，得一直线，结果表明在 0.3302µg～0.7706µg 范围内，黄芩苷线性关系良好。
3.6 精密度试验
精密吸取同一对照品和供试品溶液 10µl 注入液相色谱仪，连续进样 5 次，测得黄芩苷 峰面积的相对标准差分别为 0.62%和 0.81%，表明仪器精密度良好。
3.7 稳定性试验
精密吸取同一对照品和供试品溶液 10µl，分别于 0、4、8、12 小时注入液相色谱仪，
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Abstract Objective: To establish a method to Determination of the contents of Baicalin in Chaihuang Granules. Method: Alltima C18(5µm,150mm×4.6mm) was used with the mobile phase consisting of Methanol-0.3%H3PO4 (50:50), the detection wavelength was at 280nm. Result: The linear range of Baicalin was in the range of 0.3302µg～0.7706µg, r=0.9998, the average recovery as 101.05%, RSD = 1.39%(n=9). Conclusion: The method is simple、accurate and credible. It can be used for the quality control of Chaihuang Granules. Keywords: Chaihuang Granules; Baicalin; Determination
参考文献
[1] WS3-B-2009-95-2005.［S］.中华人民共和国国家药品监督管理局国家药品标准.柴黄颗粒质量标准.2005 [2] 刘广川,孙东凯,吴贵华. HPLC 法测定祛斑胶囊中黄芩苷的含量［J］．天津药学,2007. 19（6）：15-16 [3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005：211