实验4 离体家兔肠肌运动

实验4 离体家兔肠肌运动

[摘要] 目的：观察HCl、NaOH、18摄氏度台氏液和肾上腺素乙酰胆碱对离体家兔肠肌运动的影响。方法：利用RM6240系统采集实验数据，并进行统计分析。结果：统计分析得最大张力较对照组的P<0.01,最小张力的P<0.05,张力差值>0.05, 说明8个小组的最大张力和最小张力较对照组差异显著，张力差值差异不显著。结论：肠肌易受到离子环境、神经递质、激素和温度影响，HCl、乙酰胆碱对肠肌收缩有加强作用，NaOH、肾上腺素、18℃台氏液对肠肌收缩有抑制作用。

[关键词] 离体家兔肠肌；张力；

1材料

1.1实验动物家兔。

1.2主要仪器张力换能器，微机生物信号采集处理系统，麦氏浴槽，超级恒温器；兔手术台，通气管，手术器械。

1.3主要试剂台氏液，HCl,NaOH,肾上腺素，乙酰胆碱溶液。

2方法

2.1体家兔肠肌标本制备：取健康家兔一只，用木槌击其头部致昏，立即剖开腹部，找到十二指肠取出15cm左右一段，置于氧饱和的台氏液培养皿中，，沿肠壁除去肠系膜，用5ml注射器吸取台氏液将肠内容物冲洗干净，然后将十二指肠剪成1.5cm8段，在台氏液培养皿中将每段肠肌在其两端对角壁处缝针穿线并打结。注意保持肠管通畅，勿使其封闭。

2.2标本固定：肠管一端连线系于张力换能器的悬臂梁上，然后放入37氏度麦氏浴槽中，再将肠管另一端系于与曹固定钩上，调节肌张力至2-3g。

2.3实验系统连接及参数设置:

（1）麦氏浴槽中加15ml台氏液，调节超级恒温器的温度，使麦氏浴槽内温度稳定在37±0.5摄氏度。通气管接百分之95氧气+百分之5的二氧化碳混合气体管道。用螺丝夹调节气体管道的气体流量，调节至浴槽中气泡一个个逸出为止。

（2）能器接输出线接微机生物信号处理系统，仪器参数：开启RM6240系统，点击第一通道，选择“张力”。

3 实验观察

3.1 滴加HCl，观察并记录其收缩幅度，反应稳定后换液冲洗。

3.2 滴加NaOH，观察并记录其收缩幅度，待曲线恢复至基线或基本稳定后换液冲洗。

3.3用18摄氏度的台氏液灌流肠肌，观察并记录其收缩幅度，待恢复正常。

3.4加入肾上腺素溶液后，观察其反应。反应稳定后换液冲洗。

3.5 加入乙酰胆碱溶液，观察并记录其反应。

3.6 统计方法结果以X-+ S 表示，用Excel统计函数进行数据统计。

4. 实验结果

数据分析统计结果如下表：

得结果当p<0.05差异显著；p>0.05差异不显著。

与对照组比较：*P<0.01 , **P<0.05 , ***P>0.05，前两者差异显著，后一者差异不显著。

5.讨论

1正常情况下,我们观察到离体十二指肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩。

2、在浴槽中加入0.001%乙酰胆碱(Ach)2滴后,可见离体肠管活动增强,描记曲线出现收缩频率变快,幅度增加。机制如下:①Ach与肌膜M受体结合,使平滑肌Ca2+专用通道开放,Ca2+内流上升,一方面使肌浆[Ca2+]上升,收缩幅度上升;另一方面,使平滑肌兴奋性上升,直接或间接使其收缩频率上升。②Ach与肌膜M受体结合,引起生电性钠泵活动,使静息点位下降,最终引起平滑肌兴奋性上升,使其收缩频率上升。

.3、在浴槽中加入0.001%肾上腺素2滴(约0.2ml)后,可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小以及基线下移。机制如下:①肾上腺素与肠肌细胞膜上的α和β两种受体共同结合,使K+、Ca2+外流增多,细胞膜发生超极化,肠肌兴奋性降低,收缩频率下降。②同时,肾上腺素还单独作用于β受体,使Ca2+泵活动上升,还可以使Ca2+外流增加,使肌浆[Ca2+]下降,使收缩频率下降。③此外,肾上腺素还能使生电钠泵活动上升,引起细胞膜发生超极化,肠肌兴奋性降低,收缩频率下降。

.4、消化道平滑肌对温度刺激敏感，将38度的台氏液迅速换成25度的台氏液，前期肠肌的代谢水平尚未适应新环境，随后肠肌的代谢逐渐升高至超过正常水平，最后趋于正常。

.5、在浴槽中加入1NNaOH溶液2滴后,离体肠管活动增强,描记曲线出现收缩幅度增加。机制如下:NaOH可以中和H+,使[H+]下降,使得Ca2+内流上升使平滑肌兴奋性上升,同时使肌浆网[H+]上升并使Ca2+与肌钙蛋白结合上升,最后使得其收缩频率和幅度上升。

.6、在浴槽中加入1N盐酸溶液2滴后,离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩幅度降低,频率变慢。机制如下:①细胞外[H+]升高时,Ca2+通道的活性受到抑制,使得Ca2+内流减少,使肠肌兴奋性降低,收缩频率下降。②同时使肌浆网[H+]上升,使肌浆网[H+]下降,Ca2+与肌钙蛋白结合下降,使收缩幅度下降。

另外

家兔离体小肠各段平滑肌尽管失去外来神经支的支配, 但壁内神经丛依然存在。由位于环行肌粘膜下边缘与肠肌丝Cajal 间质细胞是小肠慢波活动的起搏器和传导者。由Cajal 间质细胞自发活动的产生和传导易受到离子环境、神经递质和激素等

（1）.加入HCl后，对小肠的收缩活动有增强效应，由此可见，酸性环境有助于小肠平滑肌的运动。

（2）.加入氢氧化钠后，肠段的收缩频率都较正常水平减慢,振幅减小。

（3）.温度对于肠段的运动也有影响。当将体外环境温度改变至28℃时，肠段的活动明显加强；而当将体外环境的温度改变至45℃时，肠段的活动明显减弱。加入18摄氏度台氏液后，温度较原先37℃下降，故肠肌收缩略有下降。

（4）.加肾上腺素后，小肠的收缩运动受到抑制，收缩的强度降低。

（5）.加入乙酰胆碱后，肠段的收缩幅度明显变大，即乙酰胆碱促进了肠段的收缩。这是因为乙酰胆碱与肠道的平滑肌细胞上的特殊位点结合，促进钙离子在肌浆网中的传递，从而增强平滑肌的收缩。肠的平滑肌有神经调节的作用。

小肠平滑肌的肌间神经丛中主要有两类神经元。一类神经元含血管活性肠肽、腺苷酸环化酶激活肽、一氧化氮合成酶等，它们可以使中间神经元或抑制性运动神经元；另一类神经元含乙酰胆碱、速激肽、P物质等，它们可以使中间神经元或兴奋性运动神经元。这些神经元通过他们末梢释放的递质，调节小肠平滑肌的活动。故加入乙酰胆碱，实际上是通过其对于神经元的作用来调节肠段的运动，加快加剧肠段的收缩。[1]

6.结论

肠肌易受到离子环境、神经递质、激素和温度影响，HCl、乙酰胆碱对肠肌收缩有加强作用，NaOH、肾上腺素、18℃台氏液对肠肌收缩有抑制作用。

7.参考文献

[1] 夏树林, 朱道立（南通大学生命科学学院）撰写的《化学药物对家兔离体小肠平滑肌电生理特性的影响》

[2] 陆源，林国华，杨武鸣主编《机能学实验教程》（第二版）北京：科学出版社，2010

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