6种植物中内生镰刀菌的分离和鉴定
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小 型 分 生孢 子 、 型 分生 孢 子 的 数 量及 形 状 ， 孢 细 胞 、 垣 大 产 厚
使 寄 主 植 物快 速 生 长 ， 强 植 物 的抗 逆 性 ， 增 而且 能产 生 丰 富 多 样 的 活性 物 质 。镰 刀 菌 是 植 物 中 的 主 要 内生 菌 ， 些 弱 致 病 一 镰 刀 菌 和非 致 病 镰 刀 菌 则 具 有 生 物 防 治 作 用 。镰 刀 菌 对 保 护 环境 也 有 重 要 意 义 ， 能 降 解 酚类 化 合 物 等 环 境 污染 物 。 它 因此 对 于镰 刀 菌 的 研 究 具有 一 定 的现 实 意 义 。但 是 由于 镰 刀 菌 形 态 多 样化 ， 极 易 受 温 度 、Ｈ 值 、 照 、 度 等 营 养 环 境 且 ｐ 光 湿 影 响 而变 化 ， 能简 单 地 鉴 定 归类 ， 多 次用 显 微 分 析 仪 观 察 不 须 各 种 大分 生 孢 子 、、 生 孢 子形 态 以及 菌 落 性 状 ， 据 有关 镰 ／分 Ｊ 根 刀 菌 的 资料 再 进 行 分类 ， 因此 镰 刀 菌 的 分 类 鉴 定 工 作 较 为 复 杂 Ｊ 。本 试验 拟对 ６种 植 物 中分 离 得 到 的 内 生镰 刀菌 进 行 归
菌可寄生于植物体 内， 大多数镰 刀菌是植物病原菌 ， 如小麦赤 霉 病 菌 ， 能 产 生 赤霉 毒 素 从 而 引 起 植 物 萎 蔫 病 变 。植 物 内 它
生 真 菌 与 寄 主植 物 有 复 杂 的关 系 ， 究表 明 ， 研 内生 真 菌 不 仅 能
直 径 ９ａ 的 Ｐ Ａ平 板 上 ， 后 放 于 ２ 培 养 箱 中保 温 培 养 。 ｍ Ｓ 最 ５℃ １ ３ 内生镰 刀 菌形 态 学鉴 定 ． １３ １ 载 玻 片培养 法 培 养 在 无菌 操作 台上将 熔化 后 冷 却 至 ．． ６ ０℃ 以下 的 Ｐ Ａ培 养 基倒 人 培养 皿 ， 为 ０ １ ０ ２ｃ Ｓ 厚度 ． ～ ． ｍ。接 种 铲 在酒 精 灯 火 焰 上 方 灼 烧 灭 菌 后 ， 凝 固 的 培 养 基 上 划 在 ０５ａ × ． ｍ 的琼 脂 培 养 基 小 块 ， 将 其 转 移 至 灭 菌 的载 ． ｍ ０５ｃ 并 玻 片 上 ， 分 离 的 内生 镰 刀 菌 菌 种 活 化后 接 种 在 小 块 四角 ， 将 盖 上 无 菌盖 玻 片 ， 置于 保 湿培 养皿 中 ２ ８℃ 培养 ２～ 。 ３ｄ １３２ 显 微 镜 观察 将 培 养 ２ｄ的 玻 片 取 出 ， 于 显 微 镜 操 ．． 放 作 台上 。 用针 尖 轻 轻 挑 起 盖 玻 片 的 一 侧 ， 慢将 盖 玻 片 拿 起 慢 来 ， 掉 周 围 的 培 养 基 ， 新 的 载 玻 片 中 央 滴 １ 甲 基 蓝 染 挑 在 滴 液 ， 玻 片 一 侧 轻 放 于 液 体 边 缘 ， 轻 盖 上玻 片 ， 滤 纸 吸取 盖 轻 用 周 围的 液 体 。调 整 显 微 镜 ， 察 并 记 录 分 生 孢 子 大 小 、 状 ， 观 形
纳 总 结 和 培 养 ， 用 传 统 分 类 的方 法 对 其 进 行菌株 问 的 系统 进 化 树 状 图 ， 步 分 析 植 物 中 Ｓ Ｔ 初 内生镰 刀 菌 的 种类 和分 布 情 况 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 供 试 植 物 ．
孙 勇， 缪 倩， 孙 颖 ，陈凤 关
（ 州 师范 大 学 江 苏 省 药 用 植 物 生 物技 术 重 点 实 验 室 ， 苏徐 州 ２ １１ 徐 江 ２ １６）
摘 要 ： ６种 植 物 的 内生 镰 刀 菌 进 行 分 离 和 培 养 ， 过 显 微 形 态 观 察 对 获 得 的 菌 株进 行 分 类 鉴 定 ， 测 定 菌 落 生 对 通 并 长速 度 和 ＩＳ 列 ， 步 分 析 植 物 中内 生 镰 刀 菌 的 种类 和 分 布 情 况 。 结 果 表 明 ， 分 离 出 ６ Ｔ序 初 共 ２株 内 生 镰 刀菌 ， 属 于 ６ 分 种 镰 刀 菌 ，２株 内生 镰 刀 菌 中 以尖 孢 镰 刀 菌 和 茄 病 镰 刀 菌 最 为 常 见 。 ６ 关 键 词 ： 刀菌 ；内生 真 菌 ； 缘 关 系 树 ； Ｔ 镰 亲 ＩＳ序 列 中 图分 类 号 ： ４ ２ ４ ４ ￥ ３ ． 文 献 标 志码 ：Ａ 文章 编 号 ：０２— ３ ２ ２ １ ）５— ４ ７— ３ １０ １０ （０ ０ ０ ０ ３ ０ 遍 后 ， ０ ２ 氯化 汞 浸 泡 ５ｍ ｎ再 次用 无 菌 水 清 洗 ３遍 ， 用 ．％ ｉ， 然
后 用 ７ ％ 乙 醇浸 泡 ３ ， ５ ０ｓ最后 再用 无 菌 水 清 洗 ３遍 。然 后 置 于 灭 菌 牛皮 纸 上 ， 每 个 组 织 块无 菌切 分 为 ４份 ， 别移 植 于 将 分
镰 刀 菌属 （ ｕａｉｍ） 真 菌 中 的 １ 重 要 类 群 ， 性 时 Ｆｓｒ ｕ 是 个 无 期 在 分类 上隶 属 于 半 知 菌亚 门 ， 有性 时期 为 子 囊 菌 亚 门 ， 其 因 在 无 性 阶段 产 生 的 大 型 分 生 孢 子 形 似 镰 刀 而 得 名 … 。镰 刀
孢 子 的 有 无 。 根 据 Ｂ ｏ 分 类 系 统 对 镰 刀 菌 进 行 分 类 ｏｔ ｈ 鉴 定 “ 。
１ ４ ｒ Ａ Ｔ ． ＤＮ Ｉ Ｓ区 的扩 增 与 测序 ］ 。
江苏 农 业 科 学
孙 勇， 缪 倩， 孙
２１ ０ ０年第 ５ 期
－ ３ ・ － — ７－ —４ — —
颖， 等．６种 植 物 中 内 生镰 刀 菌 的 分 离和 鉴 定 ［］ Ｊ ．江 苏农 业 科 学 ，０ ０ ５ ：３ ２ １ （ ）４ ７—４ ９ ３
６种 植 物 中内生 镰 刀 菌 的分 离 和鉴定
使 寄 主 植 物快 速 生 长 ， 强 植 物 的抗 逆 性 ， 增 而且 能产 生 丰 富 多 样 的 活性 物 质 。镰 刀 菌 是 植 物 中 的 主 要 内生 菌 ， 些 弱 致 病 一 镰 刀 菌 和非 致 病 镰 刀 菌 则 具 有 生 物 防 治 作 用 。镰 刀 菌 对 保 护 环境 也 有 重 要 意 义 ， 能 降 解 酚类 化 合 物 等 环 境 污染 物 。 它 因此 对 于镰 刀 菌 的 研 究 具有 一 定 的现 实 意 义 。但 是 由于 镰 刀 菌 形 态 多 样化 ， 极 易 受 温 度 、Ｈ 值 、 照 、 度 等 营 养 环 境 且 ｐ 光 湿 影 响 而变 化 ， 能简 单 地 鉴 定 归类 ， 多 次用 显 微 分 析 仪 观 察 不 须 各 种 大分 生 孢 子 、、 生 孢 子形 态 以及 菌 落 性 状 ， 据 有关 镰 ／分 Ｊ 根 刀 菌 的 资料 再 进 行 分类 ， 因此 镰 刀 菌 的 分 类 鉴 定 工 作 较 为 复 杂 Ｊ 。本 试验 拟对 ６种 植 物 中分 离 得 到 的 内 生镰 刀菌 进 行 归
菌可寄生于植物体 内， 大多数镰 刀菌是植物病原菌 ， 如小麦赤 霉 病 菌 ， 能 产 生 赤霉 毒 素 从 而 引 起 植 物 萎 蔫 病 变 。植 物 内 它
生 真 菌 与 寄 主植 物 有 复 杂 的关 系 ， 究表 明 ， 研 内生 真 菌 不 仅 能
直 径 ９ａ 的 Ｐ Ａ平 板 上 ， 后 放 于 ２ 培 养 箱 中保 温 培 养 。 ｍ Ｓ 最 ５℃ １ ３ 内生镰 刀 菌形 态 学鉴 定 ． １３ １ 载 玻 片培养 法 培 养 在 无菌 操作 台上将 熔化 后 冷 却 至 ．． ６ ０℃ 以下 的 Ｐ Ａ培 养 基倒 人 培养 皿 ， 为 ０ １ ０ ２ｃ Ｓ 厚度 ． ～ ． ｍ。接 种 铲 在酒 精 灯 火 焰 上 方 灼 烧 灭 菌 后 ， 凝 固 的 培 养 基 上 划 在 ０５ａ × ． ｍ 的琼 脂 培 养 基 小 块 ， 将 其 转 移 至 灭 菌 的载 ． ｍ ０５ｃ 并 玻 片 上 ， 分 离 的 内生 镰 刀 菌 菌 种 活 化后 接 种 在 小 块 四角 ， 将 盖 上 无 菌盖 玻 片 ， 置于 保 湿培 养皿 中 ２ ８℃ 培养 ２～ 。 ３ｄ １３２ 显 微 镜 观察 将 培 养 ２ｄ的 玻 片 取 出 ， 于 显 微 镜 操 ．． 放 作 台上 。 用针 尖 轻 轻 挑 起 盖 玻 片 的 一 侧 ， 慢将 盖 玻 片 拿 起 慢 来 ， 掉 周 围 的 培 养 基 ， 新 的 载 玻 片 中 央 滴 １ 甲 基 蓝 染 挑 在 滴 液 ， 玻 片 一 侧 轻 放 于 液 体 边 缘 ， 轻 盖 上玻 片 ， 滤 纸 吸取 盖 轻 用 周 围的 液 体 。调 整 显 微 镜 ， 察 并 记 录 分 生 孢 子 大 小 、 状 ， 观 形
纳 总 结 和 培 养 ， 用 传 统 分 类 的方 法 对 其 进 行菌株 问 的 系统 进 化 树 状 图 ， 步 分 析 植 物 中 Ｓ Ｔ 初 内生镰 刀 菌 的 种类 和分 布 情 况 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 供 试 植 物 ．
孙 勇， 缪 倩， 孙 颖 ，陈凤 关
（ 州 师范 大 学 江 苏 省 药 用 植 物 生 物技 术 重 点 实 验 室 ， 苏徐 州 ２ １１ 徐 江 ２ １６）
摘 要 ： ６种 植 物 的 内生 镰 刀 菌 进 行 分 离 和 培 养 ， 过 显 微 形 态 观 察 对 获 得 的 菌 株进 行 分 类 鉴 定 ， 测 定 菌 落 生 对 通 并 长速 度 和 ＩＳ 列 ， 步 分 析 植 物 中内 生 镰 刀 菌 的 种类 和 分 布 情 况 。 结 果 表 明 ， 分 离 出 ６ Ｔ序 初 共 ２株 内 生 镰 刀菌 ， 属 于 ６ 分 种 镰 刀 菌 ，２株 内生 镰 刀 菌 中 以尖 孢 镰 刀 菌 和 茄 病 镰 刀 菌 最 为 常 见 。 ６ 关 键 词 ： 刀菌 ；内生 真 菌 ； 缘 关 系 树 ； Ｔ 镰 亲 ＩＳ序 列 中 图分 类 号 ： ４ ２ ４ ４ ￥ ３ ． 文 献 标 志码 ：Ａ 文章 编 号 ：０２— ３ ２ ２ １ ）５— ４ ７— ３ １０ １０ （０ ０ ０ ０ ３ ０ 遍 后 ， ０ ２ 氯化 汞 浸 泡 ５ｍ ｎ再 次用 无 菌 水 清 洗 ３遍 ， 用 ．％ ｉ， 然
后 用 ７ ％ 乙 醇浸 泡 ３ ， ５ ０ｓ最后 再用 无 菌 水 清 洗 ３遍 。然 后 置 于 灭 菌 牛皮 纸 上 ， 每 个 组 织 块无 菌切 分 为 ４份 ， 别移 植 于 将 分
镰 刀 菌属 （ ｕａｉｍ） 真 菌 中 的 １ 重 要 类 群 ， 性 时 Ｆｓｒ ｕ 是 个 无 期 在 分类 上隶 属 于 半 知 菌亚 门 ， 有性 时期 为 子 囊 菌 亚 门 ， 其 因 在 无 性 阶段 产 生 的 大 型 分 生 孢 子 形 似 镰 刀 而 得 名 … 。镰 刀
孢 子 的 有 无 。 根 据 Ｂ ｏ 分 类 系 统 对 镰 刀 菌 进 行 分 类 ｏｔ ｈ 鉴 定 “ 。
１ ４ ｒ Ａ Ｔ ． ＤＮ Ｉ Ｓ区 的扩 增 与 测序 ］ 。
江苏 农 业 科 学
孙 勇， 缪 倩， 孙
２１ ０ ０年第 ５ 期
－ ３ ・ － — ７－ —４ — —
颖， 等．６种 植 物 中 内 生镰 刀 菌 的 分 离和 鉴 定 ［］ Ｊ ．江 苏农 业 科 学 ，０ ０ ５ ：３ ２ １ （ ）４ ７—４ ９ ３
６种 植 物 中内生 镰 刀 菌 的分 离 和鉴定