超声波提取黄芪中总黄酮工艺研究
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第２ ７ 卷第 ４ 期 ２ ０ １ ２年１ ２月 （ ） 文章编号 ： １ ６ ７ ２ ２ ４ ７ ７ ２ ０ １ ２ ０ ４ ０ ０ １ ２ ０ ５ － － －
安 徽 工 程 大 学 学 报 Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ Ｐ ｏ ｌ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｃ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｙ
１ ０］ ／ 之间的标准曲线方程 ［ 质量浓度为横坐标 Ｘ，得出吸光度相对于芦丁溶液质量浓度 （ ｍ ｍ Ｌ） ． ｇ
（ ） 黄芪总黄酮提取工艺 ． 取烘干后的黄芪粉 １ｇ→ 加一定量的乙醇提取剂 → 超 声 波 、 微 波、 醇浸提取 ２ ／ ０ｍ Ｌ后３ ０ ０ ０ｒ ｍ ｉ ｎ离心１ ０ｍ ｉ ｎ→ 取 ３ｍ Ｌ 上 清 液 加 ０． ３ｍ Ｌ ５％ Ｎ ａ ＮＯ → 抽滤 → 取样 １ ２→ 摇匀静置
·１ ３·
（ 按 ６ｍ ｉ ｎ→ 加 ０． ３ｍ Ｌ １ ０％ Ａ ｌ ＮＯ ｉ ｎ Ｌ ４％ Ｎ ａ ＯＨ→ 加 ３ ０％ 乙醇定容至 ２ ５ｍ Ｌ． → 加 ４ｍ ３） ３ → 摇匀静置 ６ｍ （ ） 中方法测总黄酮提取率 ． １． ２ １ （ ） 黄芪总黄酮提取率的测定 ． 取黄芪提取液用紫外分光光度计在 ５ 代入标准曲 ３ １ ０ｎ ｍ 处测得吸光度 ， ３ － ／ ， 计算出黄酮提取率 ．黄酮提取率 （ 公式中Ｖ 为定容体积 （ 线 方程及公式 ， ％） Ｃ×Ｖ ×１ ０ ） ｍ， ｍ Ｌ） ｍ ＝（ ） ， ／ 为黄芪粉质量 （ Ｃ 为黄芪提取液质量浓度 （ ｍ ｍ Ｌ）． ｇ ｇ （ ） 黄芪总黄酮提取工艺的优化 ． 通过预实验 ， 确定超声波 、 微波 、 乙醇浸提提取法中最优的提取方法 ， ４ 并在单因素试验的基础上 ， 选取 ４ 因素 ３ 水平设计正交试验 ． １． ３ 单因素实验 （ ） ， 提取温度对黄芪总黄酮提取率的影 响 ． 准 确 称 取 烘 干 后 的 黄 芪 粉 １． 超声波功率为２ 按 １ ０ｇ ２ ５ｗ， （ ／ ） 液料比为 ２ 的比例添加 ６ 分别在不同提取温度下提取 ３ ０ ｍ Ｌ ０％ 的乙醇溶剂 ， ０ｍ ｉ ｎ． ｇ （ ） ， 提取时间对黄芪总黄酮提取率的影响 ． 准确称取烘干后的黄芪粉 １． 恒定超声波功率为２ ２ ０ｇ ２ ５ｗ， （ ／ ） 按液料比为 ２ 的比例添加 ６ 在提取 温 度 为 ６ 分别在不同提取时间 ０ ｍ Ｌ ０％ 的乙醇溶剂 ， ５ ℃ 的 条 件 下， ｇ 下进行试验 ． （ ） ， 不同乙醇体积分数对黄芪总黄酮提取率的影响 ． 准确称取烘干后的黄芪粉 １． 恒定超声波功率 ３ ０ｇ ／ ） 为２ 在提取温度为 ６ 按液料比为 ２ 的 比例 添 加不 同 体 积分 数 的乙 醇 溶 剂， 分 ２ ５ｗ， ５℃ 的条件下 ， ０（ ｍ Ｌ ｇ 别提取 ３ ０ｍ ｉ ｎ． （ ） ， 料液比对黄芪总黄酮提取率的影响 ． 准 确 称 取 烘 干 后 的 黄 芪 粉 １． 恒定超声波功率为２ ４ ０ｇ ２ ５ｗ， 按不同液料比添加 ６ 在提取温度为 ６ 提取时间 ３ ０％ 的乙醇溶剂 ， ５℃ ， ０ｍ ｉ ｎ 条件下进行试验 ． （ ） 正交试验设计 ． 以提取温度 、 提取时间 、 乙醇体积分数 、 料液比 为 影 响 因 素 ， 总 黄 酮 提 取 率 为 指 标， ５ ４ 设计 Ｌ 正交试验 ． 正交因素水平表见表 １． ３） ９（
收稿日期 ： ２ ０ １ ２ ０ ９ ２ ６ － － ， 作者简介 ： 李慧静 （ 女， 河南新乡人 ， 硕士研究生 ． １ ９ ８ ７ －） ） ， ， ， 通讯作者 ： 张庆庆 （ 女 安徽怀宁人 教授 ， 硕导 ． １ ９ ５ ４ －
第４期
李慧静 ， 等： 超声波提取黄芪中总黄酮工艺研究
表 １ 因素水平表 水平 １ ２ ３ 因素 Ａ 提取温度／℃ ６ ０ ６ ５ ７ ０ Ｂ 乙醇体积分数／％ ５ ５ ６ ０ ６ ５ ·ｍ Ｃ 料液比 （ Ｌ－１ ） ｇ １∶１ ５ １∶２ ０ １∶２ ５ Ｄ 提取时间／ ｍ ｉ ｎ ２ ０ ３ ０ ４ ０
２
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图 １ 芦丁最大吸收波长
图 ２ 芦丁标准曲线
２． ２ 超声波和微波提取对黄芪总黄酮提取率的影响 （ ） 按照 １． 中黄芪总黄酮的提取 方 法 ， 设定 不同 的提 取 时间， 对 比 超 声 波、 微 波、 乙醇浸提取法对黄 ２ ２ 芪总黄酮提取效果的影响 ． 采用料液比为 １∶２ 在超声波功率 ２ 提取温度 ６ ０， ６ ０％ 乙醇溶液 ， ２ ５ｗ， ０℃ 的超 ， ， ， 声波中提取 １ ５ｍ ｉ ｎ ２ ０ｍ ｉ ｎ， ２ ５ｍ ｉ ｎ， ３ ０ｍ ｉ ｎ ３ ５ｍ ｉ ｎ和功率为２ ５ ０ｗ 的 微 波 炉 中 提 取 ０． ５ｍ ｉ ｎ， １． ０ｍ ｉ ｎ ， ， ， ， ， ， 及在 ７ 试验重复 １． ５ｍ ｉ ｎ ２． ０ｍ ｉ ｎ ２． ５ｍ ｉ ｎ， ５℃ 恒温水浴回流提取 １ ５ｍ ｉ ｎ ２ ０ｍ ｉ ｎ ２ ５ｍ ｉ ｎ ３ ０ｍ ｉ ｎ ３ ５ｍ ｉ ｎ， （ ） 对所得结果按 １． 公式计算出取平均值 ， 见图 ３、 图 ４、 图 ５． ３次， ２ ３ 由图 ３、 图 ４ 和图 ５ 可知 ， 超声波提取黄芪总黄酮比微波和醇提取法的效果好 ． 另外微波提取功率 过 高会出现爆沸 ， 且破坏黄酮类化合物的结构 ， 使总黄酮的提取率下降 ． 所以综 合 考 虑 选 取 超 声 波 提 取 法 作 为黄芪总黄酮的最佳提取工艺 ．
摘要 ： 研究比较了超声波法 、 微波法 、 乙醇提取法等工艺 提 取 黄 芪 总 黄 酮 的 效 果 ， 得出超声波法提取黄芪总黄 以提取温度 、 提取时间 、 料液比 、 乙醇体积 分 数 为 考 察 因 素 ， 黄芪总黄酮提取率为考察指标， 采 酮的工艺最佳 ． 用正交试验法优化黄芪总黄酮提取工艺 ． 结果 表 明 ， 最 佳 工 艺 条 件 为： 超声波提取温度为６ 提取时间３ ５℃、 ０ 、 （ ／ 、 料液比为 １∶１ 乙醇体积分数为 ６ 总黄酮的提取率为 ０． 是微波提取法的 １． 乙 ５ ｍ Ｌ） ５％ ， ４ １ ８％ ， ３ １倍， ｍ ｉ ｎ ｇ 醇提取的 １． ６ ９倍． 关 键 词： 黄芪 ； 总黄酮 ； 正交试验 ； 超声波提取 中图分类号 ： Ｔ Ｓ ２ ０ １ 文献标识码 ： Ａ
２ 结果与分析
２． １ 芦丁标准曲线的确定 （ ） ） 芦丁最大吸收波长的确定 ． 取芦丁标准品溶液 １ｍ 按 １． 所述试验方法处理 ， 利用紫 外可 １ Ｌ， ２ 中（ １ 见分光光度计在 ４ ０ ０～７ ０ ０ｎ ｍ 处进行波长扫描 ， 测得最大吸收峰在 ５ 结果见图 １． １ ０ｎ ｍ 处， （ ） 芦丁标准曲线测定 ． 按 １． 所述方 ２ ２中（ １） 法测定芦丁 的 标 准 曲 线 ， 其 标 准 曲 线 方 程 为： Ｙ 相关系数 Ｒ ＝０． 测 ０ ４ ２ ｘ－０． ０ ３ ９ ７， ９ ９ ９ １． ＝ ０． 定结果见图 ２．
黄芪为豆科多年生草本植物 ， 味甘 、 性温 ， 可以作为滋补药 ． 黄芪中主要含有黄芪皂苷类 、 多糖类 、 黄酮
］ １ ４ － 类等物质 ． 其中黄芪黄酮具有调节免疫 、 抗心肌 、 抗 氧 化、 抗 突 变、 清 除 自 由 基 等 多 种 药 理 作 用［ 黄酮类 ．
化合物是植物中分布较广且重要的多酚类天然产物 ， 其提取是天然产物领域研究的热点之一 ． 传统的提取方法有热水提取法 ， 碱性水 、 碱性稀醇浸提法 ， 有机 溶 剂 热 回 流 及 冷 浸 提 取 法 ， 超 过 滤 法，
的开发利用提供参考 ．
１ 材料与方法
１． １ 材料与仪器 黄芪芜湖市购 ， 为甘肃黄芪 ； 芦丁标准品购于中国医药有限公司 ； 无水乙醇 、 硝酸铝 、 亚硝酸钠 、 氢氧化 钠、 碳酸钠 均为分析纯 ． 郑 州 市 上 街 华 科 仪 器 厂； Ｓ ＨＢ Ｔ Ｄ ５ Ｚ台式低速离心 － ⅢＡ 循 环 水 式 多 用 真 空 泵 ： 机： 湖南凯达科学仪器有限公司 ； 龙 口 市 电 炉 制 造 厂； 上海 ２ ０ ２ ０ ０ Ｓ 电热恒 温 干 燥 箱 ： Ｆ Ａ ２ ２ ０ ４ Ｅ 电 子 天 平： － ： 粉碎机 ： 金坛市杰瑞尔电器有限公司 ； 紫外可见分光光度计 ＵＶ 日 本 岛 津； 佑科 ； ３ ６ ０ ０ ＫＱ ２ ５ ０ Ｄ Ｅ 型医用 － － 数控超声波清洗器 ： 昆山市超市仪 器 有 限 公 司 ； 上 海 光 谱 有 限 公 司； Ｓ Ｐ ７ ５ ４ 紫 外 分 光 光 度 计： ＨＨ－ ４数显 － 恒温水浴锅 ： 金坛市杰瑞尔电 器 有 限 公 司 ； 微波炉（ 型 家 用 微 波 炉， 额定微波 Ｇ ａ ｌ ａ ｎ ｚ Ｐ ７ ０ Ｄ ２ ３ Ｎ １ Ｐ ５（ ＷＯ） －Ｇ ， ： 微波输出功率 ７ 广东格兰仕微波炉电器制造有限公司 ． 频率 ２． ４ ５ＧＨ ｚ ０ ０Ｗ） １． ２ 试验方法 （ ） ， 芦丁标准曲线的绘制 ． 称取芦丁标准品 ２ 用３ 得 到质 １ ０ｍ ０％ 的乙醇定容于 １ ０ ０ｍ Ｌ 的容量瓶中 ， ｇ ／ 用紫外可 见 分 光 光 度 计 ＵＶ 量浓度为 ０． ２ｍ ｍ Ｌ 的芦丁标准溶液 ． ３ ６ ０ ０对该芦丁标准品溶液进行波长 － ｇ 扫描 ， 测得最大吸收峰 ． 精确吸取芦丁标准溶 液 ０． 分别 ０ｍ Ｌ， １． ０ｍ Ｌ， ２． ０ｍ Ｌ， ３． ０ｍ Ｌ， ４． ０ｍ Ｌ， ５． ０ｍ Ｌ， ； （ 置于１ 各加入 ５％ Ｎ 摇匀静置 ６ｍ 然后分别加入 １ ０ｍ Ｌ具塞比色管中 ， ａ ＮＯ ３ｍ Ｌ， ｉ ｎ ０％Ａ ｌ ＮＯ ２ 溶液 ０． ３） ３ 溶液 ０． 摇匀静置 ６ｍ 再分别加入质量分数为 ４％ 的 Ｎ 摇匀 ， 最后用 ３ 静 ３ｍ Ｌ， ｉ ｎ； ａ ＯＨ ４ｍ Ｌ， ０％ 乙醇定容 ， 置１ 以试剂空白作参比 ， 依次在最大波长下测定各标准溶液的吸光度 ， 以吸光度为纵坐标Ｙ ， 以芦丁 ２ｍ ｉ ｎ．
Ｖ ｏ ｌ ． ２ ７． Ｎ ｏ ． ４ ， Ｄ ｅ ｃ ． ２ ０ １ ２
超声波提取黄芪中总黄酮工艺研究
李慧静 ， 张庆庆 ＊ ， 陈建翔 ， 金鑫强 ， 赵爱兵
（ ） 安徽工程大学 微生物发酵安徽省工程技术研究中心 ， 安徽 芜湖 ２ ４ １ ０ ０ ０
］ ５］ ６ ８ － ； 酶解法 ［ 等， 已报道的醇提工艺和回流提取黄酮类化合物提取时间长 ， 提取效率低 ［ 新技术提取方法有
超声波提取法 ， 微波辅助萃取法 ， 超临界流体萃取法等 ． 超声波提取具有提取时间短 ， 提出率高 ， 利用率高 ，
９］ 节约能源 ， 避免高温对黄酮类化合物的影响 ［ 等优点 ． 研究黄芪中 黄 酮 类 化 合 物 的 提 取 工 艺 条 件 ， 为黄芪
·１ ４·
安 徽 工 程 大 学 学 报
第２ ７卷
图 ３ 不同时间超声波提取 的影响
图 ４ 不同时间微波提取 的影响
图 ５ 不同时间乙醇提取 的影响
２． ３ 单因素试验结果 ） 按 １． 方法 ， 分别在超声波温度 ２ ３ 中（ １ ０ ℃、 ３ ５℃ 、 ５ ０ ℃、 ６ ５ ℃、 ８ ０ ℃、 ９ ５ ℃ 下对黄 芪 总 黄 酮 进 行 提 （ ） 按 １． 公式计算出总黄酮的提取率 ， 结果见图 ６． 由图 ６ 可知 ， 提取温度在 ２ 黄芪总黄 取， ２ ３ ０℃ ～５ ０℃ 时 ， 酮的提取率并不随温度的上升而提高 ， 但当提取温度升高到 ６ 黄芪总黄酮的提取率达到最高 ， 之后 ５℃ 时 ， 其提取率呈下降趋势 ． 温 度 升 高， 分 子 运 动 加 快， 黄酮类化合物更容易从细胞中游离出 随着温度的上升 ，
安 徽 工 程 大 学 学 报 Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｈ ｕ ｉ Ｐ ｏ ｌ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｃ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｙ
１ ０］ ／ 之间的标准曲线方程 ［ 质量浓度为横坐标 Ｘ，得出吸光度相对于芦丁溶液质量浓度 （ ｍ ｍ Ｌ） ． ｇ
（ ） 黄芪总黄酮提取工艺 ． 取烘干后的黄芪粉 １ｇ→ 加一定量的乙醇提取剂 → 超 声 波 、 微 波、 醇浸提取 ２ ／ ０ｍ Ｌ后３ ０ ０ ０ｒ ｍ ｉ ｎ离心１ ０ｍ ｉ ｎ→ 取 ３ｍ Ｌ 上 清 液 加 ０． ３ｍ Ｌ ５％ Ｎ ａ ＮＯ → 抽滤 → 取样 １ ２→ 摇匀静置
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（ 按 ６ｍ ｉ ｎ→ 加 ０． ３ｍ Ｌ １ ０％ Ａ ｌ ＮＯ ｉ ｎ Ｌ ４％ Ｎ ａ ＯＨ→ 加 ３ ０％ 乙醇定容至 ２ ５ｍ Ｌ． → 加 ４ｍ ３） ３ → 摇匀静置 ６ｍ （ ） 中方法测总黄酮提取率 ． １． ２ １ （ ） 黄芪总黄酮提取率的测定 ． 取黄芪提取液用紫外分光光度计在 ５ 代入标准曲 ３ １ ０ｎ ｍ 处测得吸光度 ， ３ － ／ ， 计算出黄酮提取率 ．黄酮提取率 （ 公式中Ｖ 为定容体积 （ 线 方程及公式 ， ％） Ｃ×Ｖ ×１ ０ ） ｍ， ｍ Ｌ） ｍ ＝（ ） ， ／ 为黄芪粉质量 （ Ｃ 为黄芪提取液质量浓度 （ ｍ ｍ Ｌ）． ｇ ｇ （ ） 黄芪总黄酮提取工艺的优化 ． 通过预实验 ， 确定超声波 、 微波 、 乙醇浸提提取法中最优的提取方法 ， ４ 并在单因素试验的基础上 ， 选取 ４ 因素 ３ 水平设计正交试验 ． １． ３ 单因素实验 （ ） ， 提取温度对黄芪总黄酮提取率的影 响 ． 准 确 称 取 烘 干 后 的 黄 芪 粉 １． 超声波功率为２ 按 １ ０ｇ ２ ５ｗ， （ ／ ） 液料比为 ２ 的比例添加 ６ 分别在不同提取温度下提取 ３ ０ ｍ Ｌ ０％ 的乙醇溶剂 ， ０ｍ ｉ ｎ． ｇ （ ） ， 提取时间对黄芪总黄酮提取率的影响 ． 准确称取烘干后的黄芪粉 １． 恒定超声波功率为２ ２ ０ｇ ２ ５ｗ， （ ／ ） 按液料比为 ２ 的比例添加 ６ 在提取 温 度 为 ６ 分别在不同提取时间 ０ ｍ Ｌ ０％ 的乙醇溶剂 ， ５ ℃ 的 条 件 下， ｇ 下进行试验 ． （ ） ， 不同乙醇体积分数对黄芪总黄酮提取率的影响 ． 准确称取烘干后的黄芪粉 １． 恒定超声波功率 ３ ０ｇ ／ ） 为２ 在提取温度为 ６ 按液料比为 ２ 的 比例 添 加不 同 体 积分 数 的乙 醇 溶 剂， 分 ２ ５ｗ， ５℃ 的条件下 ， ０（ ｍ Ｌ ｇ 别提取 ３ ０ｍ ｉ ｎ． （ ） ， 料液比对黄芪总黄酮提取率的影响 ． 准 确 称 取 烘 干 后 的 黄 芪 粉 １． 恒定超声波功率为２ ４ ０ｇ ２ ５ｗ， 按不同液料比添加 ６ 在提取温度为 ６ 提取时间 ３ ０％ 的乙醇溶剂 ， ５℃ ， ０ｍ ｉ ｎ 条件下进行试验 ． （ ） 正交试验设计 ． 以提取温度 、 提取时间 、 乙醇体积分数 、 料液比 为 影 响 因 素 ， 总 黄 酮 提 取 率 为 指 标， ５ ４ 设计 Ｌ 正交试验 ． 正交因素水平表见表 １． ３） ９（
收稿日期 ： ２ ０ １ ２ ０ ９ ２ ６ － － ， 作者简介 ： 李慧静 （ 女， 河南新乡人 ， 硕士研究生 ． １ ９ ８ ７ －） ） ， ， ， 通讯作者 ： 张庆庆 （ 女 安徽怀宁人 教授 ， 硕导 ． １ ９ ５ ４ －
第４期
李慧静 ， 等： 超声波提取黄芪中总黄酮工艺研究
表 １ 因素水平表 水平 １ ２ ３ 因素 Ａ 提取温度／℃ ６ ０ ６ ５ ７ ０ Ｂ 乙醇体积分数／％ ５ ５ ６ ０ ６ ５ ·ｍ Ｃ 料液比 （ Ｌ－１ ） ｇ １∶１ ５ １∶２ ０ １∶２ ５ Ｄ 提取时间／ ｍ ｉ ｎ ２ ０ ３ ０ ４ ０
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图 １ 芦丁最大吸收波长
图 ２ 芦丁标准曲线
２． ２ 超声波和微波提取对黄芪总黄酮提取率的影响 （ ） 按照 １． 中黄芪总黄酮的提取 方 法 ， 设定 不同 的提 取 时间， 对 比 超 声 波、 微 波、 乙醇浸提取法对黄 ２ ２ 芪总黄酮提取效果的影响 ． 采用料液比为 １∶２ 在超声波功率 ２ 提取温度 ６ ０， ６ ０％ 乙醇溶液 ， ２ ５ｗ， ０℃ 的超 ， ， ， 声波中提取 １ ５ｍ ｉ ｎ ２ ０ｍ ｉ ｎ， ２ ５ｍ ｉ ｎ， ３ ０ｍ ｉ ｎ ３ ５ｍ ｉ ｎ和功率为２ ５ ０ｗ 的 微 波 炉 中 提 取 ０． ５ｍ ｉ ｎ， １． ０ｍ ｉ ｎ ， ， ， ， ， ， 及在 ７ 试验重复 １． ５ｍ ｉ ｎ ２． ０ｍ ｉ ｎ ２． ５ｍ ｉ ｎ， ５℃ 恒温水浴回流提取 １ ５ｍ ｉ ｎ ２ ０ｍ ｉ ｎ ２ ５ｍ ｉ ｎ ３ ０ｍ ｉ ｎ ３ ５ｍ ｉ ｎ， （ ） 对所得结果按 １． 公式计算出取平均值 ， 见图 ３、 图 ４、 图 ５． ３次， ２ ３ 由图 ３、 图 ４ 和图 ５ 可知 ， 超声波提取黄芪总黄酮比微波和醇提取法的效果好 ． 另外微波提取功率 过 高会出现爆沸 ， 且破坏黄酮类化合物的结构 ， 使总黄酮的提取率下降 ． 所以综 合 考 虑 选 取 超 声 波 提 取 法 作 为黄芪总黄酮的最佳提取工艺 ．
摘要 ： 研究比较了超声波法 、 微波法 、 乙醇提取法等工艺 提 取 黄 芪 总 黄 酮 的 效 果 ， 得出超声波法提取黄芪总黄 以提取温度 、 提取时间 、 料液比 、 乙醇体积 分 数 为 考 察 因 素 ， 黄芪总黄酮提取率为考察指标， 采 酮的工艺最佳 ． 用正交试验法优化黄芪总黄酮提取工艺 ． 结果 表 明 ， 最 佳 工 艺 条 件 为： 超声波提取温度为６ 提取时间３ ５℃、 ０ 、 （ ／ 、 料液比为 １∶１ 乙醇体积分数为 ６ 总黄酮的提取率为 ０． 是微波提取法的 １． 乙 ５ ｍ Ｌ） ５％ ， ４ １ ８％ ， ３ １倍， ｍ ｉ ｎ ｇ 醇提取的 １． ６ ９倍． 关 键 词： 黄芪 ； 总黄酮 ； 正交试验 ； 超声波提取 中图分类号 ： Ｔ Ｓ ２ ０ １ 文献标识码 ： Ａ
２ 结果与分析
２． １ 芦丁标准曲线的确定 （ ） ） 芦丁最大吸收波长的确定 ． 取芦丁标准品溶液 １ｍ 按 １． 所述试验方法处理 ， 利用紫 外可 １ Ｌ， ２ 中（ １ 见分光光度计在 ４ ０ ０～７ ０ ０ｎ ｍ 处进行波长扫描 ， 测得最大吸收峰在 ５ 结果见图 １． １ ０ｎ ｍ 处， （ ） 芦丁标准曲线测定 ． 按 １． 所述方 ２ ２中（ １） 法测定芦丁 的 标 准 曲 线 ， 其 标 准 曲 线 方 程 为： Ｙ 相关系数 Ｒ ＝０． 测 ０ ４ ２ ｘ－０． ０ ３ ９ ７， ９ ９ ９ １． ＝ ０． 定结果见图 ２．
黄芪为豆科多年生草本植物 ， 味甘 、 性温 ， 可以作为滋补药 ． 黄芪中主要含有黄芪皂苷类 、 多糖类 、 黄酮
］ １ ４ － 类等物质 ． 其中黄芪黄酮具有调节免疫 、 抗心肌 、 抗 氧 化、 抗 突 变、 清 除 自 由 基 等 多 种 药 理 作 用［ 黄酮类 ．
化合物是植物中分布较广且重要的多酚类天然产物 ， 其提取是天然产物领域研究的热点之一 ． 传统的提取方法有热水提取法 ， 碱性水 、 碱性稀醇浸提法 ， 有机 溶 剂 热 回 流 及 冷 浸 提 取 法 ， 超 过 滤 法，
的开发利用提供参考 ．
１ 材料与方法
１． １ 材料与仪器 黄芪芜湖市购 ， 为甘肃黄芪 ； 芦丁标准品购于中国医药有限公司 ； 无水乙醇 、 硝酸铝 、 亚硝酸钠 、 氢氧化 钠、 碳酸钠 均为分析纯 ． 郑 州 市 上 街 华 科 仪 器 厂； Ｓ ＨＢ Ｔ Ｄ ５ Ｚ台式低速离心 － ⅢＡ 循 环 水 式 多 用 真 空 泵 ： 机： 湖南凯达科学仪器有限公司 ； 龙 口 市 电 炉 制 造 厂； 上海 ２ ０ ２ ０ ０ Ｓ 电热恒 温 干 燥 箱 ： Ｆ Ａ ２ ２ ０ ４ Ｅ 电 子 天 平： － ： 粉碎机 ： 金坛市杰瑞尔电器有限公司 ； 紫外可见分光光度计 ＵＶ 日 本 岛 津； 佑科 ； ３ ６ ０ ０ ＫＱ ２ ５ ０ Ｄ Ｅ 型医用 － － 数控超声波清洗器 ： 昆山市超市仪 器 有 限 公 司 ； 上 海 光 谱 有 限 公 司； Ｓ Ｐ ７ ５ ４ 紫 外 分 光 光 度 计： ＨＨ－ ４数显 － 恒温水浴锅 ： 金坛市杰瑞尔电 器 有 限 公 司 ； 微波炉（ 型 家 用 微 波 炉， 额定微波 Ｇ ａ ｌ ａ ｎ ｚ Ｐ ７ ０ Ｄ ２ ３ Ｎ １ Ｐ ５（ ＷＯ） －Ｇ ， ： 微波输出功率 ７ 广东格兰仕微波炉电器制造有限公司 ． 频率 ２． ４ ５ＧＨ ｚ ０ ０Ｗ） １． ２ 试验方法 （ ） ， 芦丁标准曲线的绘制 ． 称取芦丁标准品 ２ 用３ 得 到质 １ ０ｍ ０％ 的乙醇定容于 １ ０ ０ｍ Ｌ 的容量瓶中 ， ｇ ／ 用紫外可 见 分 光 光 度 计 ＵＶ 量浓度为 ０． ２ｍ ｍ Ｌ 的芦丁标准溶液 ． ３ ６ ０ ０对该芦丁标准品溶液进行波长 － ｇ 扫描 ， 测得最大吸收峰 ． 精确吸取芦丁标准溶 液 ０． 分别 ０ｍ Ｌ， １． ０ｍ Ｌ， ２． ０ｍ Ｌ， ３． ０ｍ Ｌ， ４． ０ｍ Ｌ， ５． ０ｍ Ｌ， ； （ 置于１ 各加入 ５％ Ｎ 摇匀静置 ６ｍ 然后分别加入 １ ０ｍ Ｌ具塞比色管中 ， ａ ＮＯ ３ｍ Ｌ， ｉ ｎ ０％Ａ ｌ ＮＯ ２ 溶液 ０． ３） ３ 溶液 ０． 摇匀静置 ６ｍ 再分别加入质量分数为 ４％ 的 Ｎ 摇匀 ， 最后用 ３ 静 ３ｍ Ｌ， ｉ ｎ； ａ ＯＨ ４ｍ Ｌ， ０％ 乙醇定容 ， 置１ 以试剂空白作参比 ， 依次在最大波长下测定各标准溶液的吸光度 ， 以吸光度为纵坐标Ｙ ， 以芦丁 ２ｍ ｉ ｎ．
Ｖ ｏ ｌ ． ２ ７． Ｎ ｏ ． ４ ， Ｄ ｅ ｃ ． ２ ０ １ ２
超声波提取黄芪中总黄酮工艺研究
李慧静 ， 张庆庆 ＊ ， 陈建翔 ， 金鑫强 ， 赵爱兵
（ ） 安徽工程大学 微生物发酵安徽省工程技术研究中心 ， 安徽 芜湖 ２ ４ １ ０ ０ ０
］ ５］ ６ ８ － ； 酶解法 ［ 等， 已报道的醇提工艺和回流提取黄酮类化合物提取时间长 ， 提取效率低 ［ 新技术提取方法有
超声波提取法 ， 微波辅助萃取法 ， 超临界流体萃取法等 ． 超声波提取具有提取时间短 ， 提出率高 ， 利用率高 ，
９］ 节约能源 ， 避免高温对黄酮类化合物的影响 ［ 等优点 ． 研究黄芪中 黄 酮 类 化 合 物 的 提 取 工 艺 条 件 ， 为黄芪
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安 徽 工 程 大 学 学 报
第２ ７卷
图 ３ 不同时间超声波提取 的影响
图 ４ 不同时间微波提取 的影响
图 ５ 不同时间乙醇提取 的影响
２． ３ 单因素试验结果 ） 按 １． 方法 ， 分别在超声波温度 ２ ３ 中（ １ ０ ℃、 ３ ５℃ 、 ５ ０ ℃、 ６ ５ ℃、 ８ ０ ℃、 ９ ５ ℃ 下对黄 芪 总 黄 酮 进 行 提 （ ） 按 １． 公式计算出总黄酮的提取率 ， 结果见图 ６． 由图 ６ 可知 ， 提取温度在 ２ 黄芪总黄 取， ２ ３ ０℃ ～５ ０℃ 时 ， 酮的提取率并不随温度的上升而提高 ， 但当提取温度升高到 ６ 黄芪总黄酮的提取率达到最高 ， 之后 ５℃ 时 ， 其提取率呈下降趋势 ． 温 度 升 高， 分 子 运 动 加 快， 黄酮类化合物更容易从细胞中游离出 随着温度的上升 ，