秦皮提取物中香豆素类成分含量测定方法研究
秦皮成分提取实验报告
一、实验目的1. 了解秦皮的基本成分及药理作用。
2. 掌握从秦皮中提取香豆素类成分的方法。
3. 学习并掌握提取分离和鉴定香豆素类成分的实验技术。
二、实验原理秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树（Fraxinus rhynchophylla Hance）的干燥枝皮或干皮，具有清热燥湿、清肝明目、止痢等功效。
秦皮中含有丰富的香豆素类成分，如秦皮甲素、秦皮乙素等，具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理作用。
本实验通过提取分离和鉴定，旨在获得秦皮中的香豆素类成分。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：秦皮、乙醇、乙醚、氯仿、正己烷、无水硫酸钠、无水碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾、硅胶、硝酸银、盐酸、硫酸、苯酚、氨水等。
2. 实验仪器：分析天平、旋转蒸发仪、磁力搅拌器、离心机、真空泵、紫外-可见分光光度计、高效液相色谱仪、薄层色谱仪等。
四、实验方法1. 秦皮提取：将秦皮粉碎，用95%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并提取液，减压浓缩至适当浓度，加入适量水，调节pH值至7.0，静置过夜，滤过，滤液用正己烷萃取，合并正己烷层，无水硫酸钠干燥，真空浓缩得浸膏。
2. 香豆素类成分分离：将浸膏用氯仿-甲醇（体积比1:1）溶液溶解，加入适量硅胶，搅拌，静置，过滤，滤饼用氯仿-甲醇（体积比1:1）溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得香豆素类成分。
3. 香豆素类成分鉴定：采用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）进行鉴定。
（1）TLC鉴定：将分离得到的香豆素类成分进行TLC分析，以秦皮甲素、秦皮乙素为对照品，观察斑点颜色和Rf值。
（2）HPLC鉴定：将分离得到的香豆素类成分进行HPLC分析，以秦皮甲素、秦皮乙素为对照品，测定峰面积和保留时间。
五、实验结果1. 秦皮提取：经过3次回流提取，得到秦皮浸膏，浸膏得率为5.0%。
2. 香豆素类成分分离：经过硅胶柱层析，分离得到香豆素类成分，总得率为 2.0%。
3. 香豆素类成分鉴定：TLC分析结果显示，分离得到的香豆素类成分与秦皮甲素、秦皮乙素的斑点颜色和Rf值一致。
秦皮提取物中香豆素类成分含量测定方法研究
秦皮提取物中香豆素类成分含量测定方法研究目的分别建立秦皮提取物总香豆素和4种主要香豆素成分紫外分光光度法（UV）和高效液相色谱法（HPLC）含量测定方法。
方法采用UV，以秦皮甲素为对照品，在334 nm测定秦皮提取物总香豆素的含量；采用HPLC，用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.01%磷酸溶液为流动相梯度洗脱，在334 nm测定秦皮提取物中秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素4种主要香豆素成分的含量。
结果秦皮甲素的质量浓度在 5.76～23.04 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为100.6%（RSD=1.8%）；4种香豆素成分秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素的质量分别在0.055 0～3.850 0 μg（r=0.999 7）、0.053 9～3.773 0 μg（r=0.999 8）、0.060 0～0.660 0 μg（r=0.999 9）、0.056 2～0.618 2 μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好，平均回收率分别为96.97%（RSD=1.26%）、100.80%（RSD=2.22%）、99.04%（RSD=2.47%）、98.77% （RSD=1.94%）。
结论2种含量测定方法简便、准确、可靠，可用于秦皮提取物总香豆素和主要香豆素成分的质量控制。
Abstract：Objective To establish a UV spectrophotometry method and an HPLC method respectively for the determination of the total content of coumarin and contents of four main constituents of coumarin in Fraxini Cortex extract. Methods UV spectrophotometry was used for the determination of the content of total coumarin in Fraxini Cortex extract. The reference substance was Aesculin，and the maximum ultraviolet absorption wavelength was 334 nm. The HPLC method was used to determine the contents of Aesculin，Fraxin，Aesculetin and Fraxetin in Fraxini Cortex extract，using gradient elution with acetonitrile-phosphate solution （0.01%）as mobile phase on Agilent ZORBAX SB-C18 chromatographic column （4.6 mm ×250 mm，5 μm）at room temperature. Results For the UV method，the linear range of the mass concentration of Aesculin was 5.76-23.04 μg/mL （r=0.999 9），and the average recovery was 100.6% （RSD=1.8%）. For the HPLC method，the linear ranges of the mass of Aesculin，Fraxin，Aesculetin and Fraxetin were 0.055 0-3.850 0 μg （r=0.9997），0.053 9-3.773 0 μg （r=0.999 8），0.060 0-0.660 0 μg （r=0.999 9），and 0.056 2-0.618 2 μg （r=0.999 9），respectively，and the average recoveries were 96.97% （RSD=1.26%），100.80% （RSD=2.22%），99.04% （RSD=2.47%），and 98.77% （RSD=1.94%），respectively. Conclusion Both of the two methods are simple，accurate and reliable，and can be used for the quality control of total coumarin and the main constituents of coumarin in Fraxini Cortex extract.Key words：Fraxini Cortex extract；coumarin；UV spectrophotometry；HPLC；content determination秦皮，《神农本草经》将其列为上品。
秦皮香豆素类成分的提制和鉴定
秦皮香豆素类成分的提制和鉴定秦皮，系木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh或宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh的干燥枝皮或干皮。
又名梣皮。
尖叶梣分布于黄河、长江流域各省，习称陕西秦皮；大叶梣分布于东北、河北、江西、河南等地；白蜡树分布于南、北各省区，商品药材习称四川秦皮。
有清热燥湿、收涩、明目的功效，用于肠炎、痢疾、白带、慢性气管炎、急性结膜炎，外用治牛皮廯。
一、主要化学成分的结构和物理性质1.七叶树苷（Esculin，又名七叶灵、七叶苷、秦皮甲素）针状体（热水），mp.204-206℃，为倍半水合物。
难溶于冷水，溶于沸水、热乙醇、甲醇、吡啶、乙酸乙酯和醋酸。
2.七叶树内酯（Esculetin，又名七叶苷元、秦皮乙素）3.棱状结晶（冰醋酸），叶状结晶（真空升华得），mp.268-270℃。
溶于稀碱显蓝色荧光，尚溶于热乙醇及冰醋酸，几乎不溶于乙醚和沸水。
3.秦皮苷（Fraxin，又名白蜡树苷、梣皮苷）水合物为黄色针状结晶，无水物为白色粉末，mp.206℃，（165℃软化）微溶于水，易溶于热水及热乙醇，不溶于乙醚。
4.秦皮素（Fraxetin，又名秦皮亭、白蜡树内酯、Fraxetol）片状结晶（乙醇水溶液），mp.227-228℃（230-232℃）。
溶于乙醇，微溶于乙醚及沸水。
二、实验目的1.掌握回流提取秦皮香豆素类成分的方法。
2.学习脂溶性成分和水溶性成分的分离方法。
3.了解香豆素类成分的一般性质和鉴别反应。
4.学习各种实验技能:提取：回流提取分离纯化：萃取鉴识：色谱法、化学法三、实验原理因为七叶苷和七叶内酯均为香豆素类化合物，能在乙醇中溶解，故采用乙醇提取。
再利用七叶苷极性大于七叶内酯极性，用乙酸乙酯分离。
乙醇提出的脂溶性杂质，可用三氯甲烷萃取除去。
2019年执业药师考试中药化学题库：香豆素和木脂素(答案解析)
2019年执业药师考试中药化学题库：香豆素和木脂素（答案解析）一、最佳选择题1、联苯环辛烯型木脂素有很强的紫外吸收，是由于结构中含有A、环辛烯环羟基B、甲氧基C、共轭苯环D、亚甲二氧基E、酚羟基2、能与香豆素类化合物反应显蓝色的是A、Gibb反应B、Emerson反应C、碘化铋钾反应D、异羟肟酸铁反应E、三氯化铁反应3、以下具有挥发性的是A、呋喃香豆素B、吡喃香豆素C、双香豆素D、分子量小的香豆素4、以下具有强烈蓝色荧光的是A、甘草酸B、七叶内酯C、二蒽酮D、麻黄碱E、大黄素5、香豆素类化合物在碱中长时间放置A、不发生变化B、生成顺式邻羟基桂皮酸盐C、生成顺式邻羟基桂皮酸D、生成反式邻羟基桂皮酸盐E、生成反式邻羟基桂皮酸6、有强烈蓝色荧光的香豆素类化合物是A、7-羟基香豆素B、7，8-二羟基香豆素C、7-甲氧基香豆素D、7，8-二甲氧基香豆素E、6，7-二甲氧基香豆素7、属于异香豆素类化合物的是A、茵陈炔内酯B、邪蒿内酯D、香柑内酯E、茴芹内酯8、属于角型香豆素类化合物的是A、七叶苷B、补骨脂内酯C、厚朴酚D、水飞蓟素E、邪蒿内酯9、属于线型香豆素类化合物的是A、伞形花内酯B、茵陈素C、七叶内酯D、白蜡素E、美花椒内酯10、游离的香豆素A、可溶于热的NaOH溶液B、极易溶于冷的石油醚C、在浓碱溶液中长时间加热后用酸酸化可恢复为原来的化合物D、易溶于冷水E、不溶于沸水11、Gibb's或Emerson反应可用于区别香豆素母核上A、游离的酚羟基B、酚羟基的对位有无氢原子C、内酯环是否开裂D、酚羟基的对位有无甲氧基取代E、酚羟基对位的羟基是否成苷12、香豆素类化合物的基本碳架A、C6-C3-C6B、C6-C3C、C6-C2-C5D、C6-C1-C6E、C6-C413、某一香豆素苷酶水解后的苷元可溶于热的氢氧化钠水溶液，是由于结构中含有A、不饱和酮B、酮基C、酚羟基D、苯环E、内酯环14、在《中国药典》2010年版中，前胡中白花前胡甲素的含量测定应用下列哪种方法A、GCB、TLCSC、HPLCD、IRE、UV15、在《中国药典》2010年版中，秦皮的含量测定成分为A、秦皮甲素B、秦皮乙素C、总香豆素D、总多糖E、秦皮甲素和秦皮乙素16、中药五味子中所含的主要木脂素是A、简单木脂素B、单氧环木脂素C、环木脂内酯木脂素D、联苯环辛烯型木脂素E、新木脂素17、中药厚朴中含有的厚朴酚是A、双环氧木脂素类B、联苯环辛烯型木脂素类C、环木脂内酯木脂素类D、新木脂素类E、简单木脂素类18、属于木脂素类化合物的是A、花椒内酯B、邪蒿内酯C、厚朴酚D、欧前胡内酯E、仙鹤草内酯19、主要含有木脂素成分的中药A、五味子B、人参C、薄荷D、柴胡E、三七20、补骨脂内酯的基本结构属于A、异香豆素类B、简单香豆素类C、呋喃香豆素类D、吡喃香豆素类E、其他香豆素类21、含有香豆素成分的中药A、五味子B、厚朴C、补骨脂D、满山红叶22、补骨脂内酯属于哪一类的香豆素A、异香豆素类B、角型吡喃香豆素类C、线型吡喃香豆素类D、角型呋喃香豆素类E、线型呋喃香豆素类23、以下关于香豆素的说法错误的是A、游离的香豆素多数有结晶B、香豆素苷多数无香味C、香豆素中分子量大的有挥发性D、香豆素苷多数无挥发性E、香豆素中分子量小的能升华24、以下属于异香豆素的是A、茵芋苷B、补骨脂内酯C、邪蒿内酯D、仙鹤草内酯E、茴芹内酯25、呋喃香豆素大多显示的荧光颜色为A、蓝色B、淡绿色D、红色E、棕色26、《中国药典》采用高效液相色谱法测定药材中补骨脂素和异补骨脂素的总含量不得少于A、0.70%B、0.60%C、0.65%D、0.50%E、0.80%二、配伍选择题1、A.1745～1715cm-1B.甲氧基C.3600～3200cm-1D.酚羟基E.内酯环结构<1> 、香豆素结构中α-吡喃酮引起的红外吸收峰在A、B、C、D、E、<2> 、多数香豆素在紫外光下显蓝色荧光，是因为有A、B、C、D、E、<3> 、香豆素可发生异羟肟酸铁反应呈红色，是因为有A、B、C、D、E、2、A.δ6.1～6.4B.δ7.3～7.4C.δ6.8～6.9D.δ7.5～8.3E.δ3.9～4.0<1> 、7-羟基香豆素的1H-NMR谱中H-3信号是A、B、C、D、E、<2> 、7-羟基香豆素的1H-NMR谱中H-4信号是A、B、C、D、E、3、A.δ7.60(1H，d，J=9.5Hz)B.δ6.85(1H，brs)C.δ6.26(1H，d，J=9.5Hz)D.δ3.95(3H，s)E.δ6.91(1H，s)<1> 、6-甲氧基-7-羟基香豆素的H-3信号是A、B、C、D、E、<2> 、6-甲氧基-7-羟基香豆素的H-4信号是A、B、C、E、<3> 、6-甲氧基-7-羟基香豆素的甲氧基的质子信号是A、B、C、D、E、4、A.简单香豆素类B.黄酮类C.吡喃香豆素类D.二氢黄酮类E.其他香豆素类<1> 、伞形花内酯是A、B、C、D、E、<2> 、黄檀内酯是A、B、D、E、5、A.简单香豆素B.呋喃香豆素C.新木脂素D.黄酮苷E.简单木脂素<1> 、补骨脂中主要成分的类型是A、B、C、D、E、<2> 、秦皮中主要成分的类型是A、B、C、D、E、<3> 、银杏中主要成分的类型是A、C、D、E、三、多项选择题1、以下属于新木脂素的是A、厚朴酚B、和厚朴酚C、五味子醇D、连翘苷E、五味子素2、以下哪项符合简单香豆素的取代规律A、常见的取代基团有羟基、甲氧基、异戊烯基等B、异戊烯基常连在6、8位C、异戊烯基常连在5、7位D、7位绝大多数都有含氧基团存在E、5、6、8位可有含氧基团存在3、在1H-NMR谱中，香豆素母核环上的质子信号在较低场的有A、C-5B、C-6C、C-7D、C-3E、C-44、香豆素苷类化合物的提取分离可用A、重结晶法B、升华法C、碱溶酸沉法D、系统溶剂法E、色谱法5、含酚羟基的香豆素类化合物具有的性质或反应有A、荧光性质B、异羟肟酸铁反应C、Gibb反应D、Kedde反应E、Emerson反应6、香豆素遇强碱发生开环反应A、因为其结构中有内酯环B、一般开环后生成顺式邻羟基桂皮酸盐，加酸后又环合成原来的内酯C、长时间在碱中放置或用紫外光照射可转变为反式邻羟基桂皮酸盐，加酸后不能再环合D、长时间在碱中放置可转变为反式邻羟基桂皮酸，加酸后还可环合E、7位有甲氧基的香豆素遇碱较难开环7、7，8-二羟基香豆素类化合物可与A、异羟肟酸铁试剂的反应B、Gibbs试剂呈阳性反应C、Emerson试剂呈阳性反应D、碱试液反应，用于薄层检识E、稀盐酸反应8、测定香豆素化合物的1HNMR和13CNMR波谱以及质谱要解决的问题是A、氢质子的个数B、碳原子的个数C、熔点D、质子的偶合形式E、结构特征9、五味子素含有A、联苯结构B、环辛烯结构C、四氢呋喃环结构D、苯代四氢萘结构E、双骈四氢呋喃环结构10、以下关于木质素的说法正确的是A、木脂素多数不挥发B、游离木脂素偏亲脂性，难溶于水C、新木脂素大多为白色结晶D、木脂素大多与糖结合成苷而存在E、木脂素多数为无色或白色结晶答案部分一、最佳选择题1、【正确答案】 C【答案解析】具有共轭双键(如共轭苯环)的化合物，π-π共轭效应生成大π键，大π键各能级间的距离较近电子容易激发，所以吸收峰的波长就增加、且有很强的紫外吸收。
秦皮中香豆素实验报告心得
秦皮中香豆素实验报告心得简介香豆素是一种常见的天然化合物，广泛存在于植物中。
秦皮，即常见的代表性中药材柴胡的根皮，据研究表明含有香豆素。
本次实验旨在通过提取秦皮中的香豆素，并通过色谱法进行定性分析。
通过本次实验，我对香豆素的提取和分析方法有了更深的了解，也加深了我对实验操作的熟练度。
实验方法本次实验分为两个步骤：提取秦皮中的香豆素和色谱法分析。
首先是提取步骤。
我们先将秦皮样品研磨成粉末，然后用乙醇对其进行提取。
接下来是色谱法分析。
我们将提取得到的香豆素样品进行柱层析分离，然后通过紫外检测器检测样品的吸收峰。
结果与讨论通过本次实验，我们成功提取到了秦皮中的香豆素，并通过色谱法进行了定性分析。
在柱层析过程中，我们观察到了香豆素在柱层析时的吸收峰，并根据峰的位置和形状判断了我们提取到的物质的香豆素。
实验结果显示，秦皮中香豆素的含量相对较低，这可能是因为我们选择的样品中含量较少或者提取过程中存在一定的损失。
此外，我们也发现，在柱层析分析中，香豆素的吸收峰在特定波长下有良好的分离度，这为定性分析提供了可靠的依据。
通过本次实验，我深刻认识到了提取和分析过程中的一些关键因素对实验结果的影响。
例如，在提取过程中，选择合适的溶剂和提取时间对提取效果有重要作用。
在色谱法分析中，选择合适的柱和检测器以及优化流动相的组成可以有效提高分离和检测效果。
实验心得本次实验让我更加了解了香豆素的提取和分析方法。
通过亲身操作，我对实验过程中的注意事项和操作技巧有了更深入的了解。
我发现实验中的每一个步骤都至关重要，任何一个环节出现差错都会导致实验结果的不准确。
同时，通过本次实验，我也学到了很多技术操作上的细节。
例如，在制备工作液的过程中，要准确称量试剂和加溶剂时要注意量筒的容量线和滴定管的放置角度；在柱层析分析过程中，要注意样品的进样量和流动相的流速等。
这些小细节对于实验结果的准确性和重复性起着重要的作用。
此外，本次实验也锻炼了我的团队合作和沟通能力。
香豆素的药理和毒理作用的研究
09级18班4组黄意来200940874香豆素类化合物药理和毒理作用的研究进展摘要：香豆素类化合物是自然界重要的一类天然有机化合物，存在于不同种属的植物中，具有广泛的用途。
实验研究发现香豆素具有抗HIV、抗肿瘤、抗氧化、抗炎等多种药理活性，在临床上广泛用于抗凝血和淋巴管性水肿的治疗。
近年来的研究发现，香豆素类化合物在啮齿类动物中存在着明显的毒性作用，且具有种属和位点特异性，这与其代谢途径和CYP2A6酶的多态性有关。
另外，毒性作用还与给药剂量和给药途径密切相关，口服和高剂量给药更容易产生毒性反应。
该文综述了近年来有关香豆素及其衍生物在药理和毒理方面的研究进展，以期为香豆素类化合物的研发和临床应用提供帮助。
关键词：香豆素；香豆素类化合物；药理活性；遗传毒性；肝脏毒性香豆素类化合物是广泛存在于自然界的一类芳香族化合物，分布于许多植物和香料中，包括芸香科、伞形科、菊科、豆科、瑞香科、茄科等高等植物，在动物及微生物代谢产物中也有存在，是一种重要的香味增强剂，广泛应用于香水、化妆品、去污剂等行业中。
根据环上取代基及其位置的不同，香豆素可分为简单香豆素、呋喃香豆素、吡喃香豆素和其他香豆素等。
研究表明，香豆素类化合物具有多种生物学活性如：抗艾滋病、抗癌、对心血管系统的影响、抗炎、抗凝血等，同时在高剂量应用时也存在一些毒性反应，具有种属和位点特异性，如遗传毒性，肝脏毒性等。
由于香豆素类化合物具有分子量小，合成简单，生物利用度高，药理作用广泛，毒性小等特点，近年来已经成为许多药物研发工作的研究重点。
为了进一步研究开发新的香豆素类化合物并指导其在临床上的应用，本文将对此类化合物的药理及毒理作用进行综述。
1 药理作用天然和合成的香豆素类化合物具有多种生物活性，其作为抗凝剂和抗血栓药已被人们所够抑制脂质过氧化，清除自由基，松弛血管，调节心血管功了解。
一些衍生物被报道具有光敏化，抗HIV，降脂、抗炎、抗肿瘤和抗氧化的作用，能能。
秦皮质量控制方法研究
秦皮质量控制方法研究秦皮是木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance.、白蜡树Fraxinus Chinensis Roxb.、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh.和宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮，为临床常用中药。
《中国药典》记载其具有清热燥湿、收涩、明目的功能，用于治疗多种炎症、细菌性痢疾等疾病。
简单香豆素是秦皮中的一类主要活性成分，具有抗癌、抗炎、抗病毒等作用。
目前秦皮质量控制仅限于少数几种成分的含量测定，且对于其4种品种的区分及混淆品的鉴别多限于理化鉴定，难以对其进行全面质量控制。
本研究即采用液质联用技术（HPLC-MS/MS），对秦皮化学成分进行了定性鉴别和定量测定，并建立了其指纹图谱分析方法，为更科学有效控制秦皮质量提供参考。
第一部分液质联用技术联合响应曲面法优化提取条件同时定量秦皮及其混淆品中11种化学成分目的：采用响应曲面法（RSM）优化提取条件，建立HPLC-MS/MS方法同时测定秦皮中11种化学成分（秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷、莨菪亭、异莨菪亭、橄榄苦苷、毛柳苷、丁香苷、6-羟基-7,8-二甲氧基香豆素、8-羟基-6,7-二甲氧基香豆素），用于秦皮及其混淆品的质量控制。
方法：以样品量、甲醇浓度、提取时间3个因素为自变量，秦皮中11种化学成分的含量为因变量，采用BB设计（Box-Behnken design,BBD）设计3因素3水平共17个试验点的响应曲面分析实验，进行多元线性回归和二项式拟合，Derringer’s满意度函数综合11组实验数据，优化萃取提取条件，并进行预测分析。
采用多反应监测（MRM）正、负离子切换模式进行HPLC-MS/MS定量分析，将同一个分析周期分为3段，分别采用负-正-负离子切换模式检测，11种化学成分在16min内即可被HPLC-MS/MS全部检测。
中药中香豆素类化合物的提取分离技术
二
三
香豆素
定 义 命 名
香豆素最早由豆 科植物香豆中提 取获得，并且具 有芳香气味，故 而命名为香豆素。 是具有苯骈α-吡喃 酮母核的一类天然 化合物的总称，在 结构上可以看成是 顺邻羟基桂皮酸失 水而成的内酯。
分布与活性
广泛分布于高等植 物中，特别在被子 植物如伞形科、芸 香科、豆科等科中 多见。在某些真菌 中也发现有香豆素 成分的存在。 香豆素有多方面的 生理活性，祖师麻 中分离的瑞香素有 抗炎和止痛作用； 蛇床子中分离出的 蛇床子素能治疗脚 癣、湿疹等病。
柱色谱分 离中多采用硅 胶吸附剂，慎 用氧化铝，否 则会使香豆素 结构发生变化。 此外还可用葡 聚糖凝胶色谱 进行分离。
任务一 秦皮中香豆素类化学成分的提取分离技术
一 二 三 四 五
学习目标 秦皮中香豆素类化学成分的提取分离技术
必备知识
相关知识链接及拓展 课堂互动 目标测试
六
一 学习目标
1
掌握秦皮中香豆素 类化学成分的提取 分离原理及操作技 术。
掌握中药中香豆素 类化学成分的提取 分离原理及操作技 术。
学习目标
知识要求
能力要求
教学内容
学习 提示
香豆素类化学成分的结构、性 质及提取分离知识
任务一
秦皮中香豆素类化合物的提取 分离技术
实训
秦皮中香豆素类成分的的提取 分离及鉴定
学习提示
一
香豆素的结构与特点 香豆素的理化性质及检识 香豆素类化学成分的提取分离
水物熔点205℃。微溶于冷水，易溶于热乙醇及热水。
H3CO HO OR O O
秦皮素 R=H
秦皮苷 R=glu
（三）秦皮中香豆素类成分的提取分离
根据秦皮中七叶苷和七叶内酯均 溶于热乙醇的性质，用乙醇为溶 剂进行回流提取。
HPLC法同时测定秦皮中四种成分含量的研究
HPLC法同时测定秦皮中四种成分含量的研究李晓尧;张丹;汤丽芝;史亚军;王昌利【摘要】目的：建立同时测定秦皮中秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷的HPLC法，为秦皮的质量评价提供定量方法基础。
方法：色谱柱：Betasil‐C18（250mm ×4．6mm ，5μm ，LOT ：13697），流动相：乙腈‐0．1％磷酸水溶液（13∶87），检测波长：334nm ，柱温：30℃，流速：1ml／min。
结果：秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮素、秦皮苷分别在0．3090～3．0900μg、0．1275～1．2750μg、0．0276～0．2760μg、0．0540～0．5400μg （ r＝0．999）呈线性关系。
结论：本法简单、快速，重现性好，准确度高，色谱峰分离度好。
%Objective:To establish a simultaneous determinationaesculin ,aesculetin ,fraxin ,fraxetin of HPLC method ,provide a quantitative method for quality evaluation of fraxini cortex .Methods:Chromatographic column :Beta‐sil‐C18 (250 mm × 4 .6 mm ,5μm ,the LOT :13697) ,mobile phase:acetonitrile‐0 .1% phosphoric acid aqueous solu‐tion(13∶87) ,detection wavelength:334 nm ,column temperature:30℃ ,the flow rate:1ml/min .Results:Aesculin , aesculetin ,fraxin ,fraxetin in0 .3090~3 .0900μg ,0 .1275~1 .2750μg ,0 .0276~0 .2760μg ,0 .0540~0 .540 0μg (r=0 . 999) have a good linear relationship .Conclusion:This method is simple ,rapid ,good reproducibility ,high accuracy , good chromatographic peak separation .【期刊名称】《陕西中医》【年(卷),期】2016(037)009【总页数】3页(P1238-1240)【关键词】色谱法,高压液相;秦皮【作者】李晓尧;张丹;汤丽芝;史亚军;王昌利【作者单位】陕西中医药大学药学院咸阳712046;陕西中医药大学药学院咸阳712046;陕西中医药大学药学院咸阳712046;陕西中医药大学药学院咸阳712046;陕西中医药大学药学院咸阳712046【正文语种】中文【中图分类】R681.5Objective:To establish a simultaneous determination aesculin , aesculetin, fraxin, fraxetin of HPLC method, provide a quantitative method for quality evaluation of fraxini cortex . Methods: Chromatographic column: Betasil - C18 (250 mm×4.6 mm, 5μm，the LOT: 13697), mobile phase: acetonitrile - 0.1% phosphoric acid aqueous solution (13∶87) , detection wavelength: 334 nm, column temperature:30℃, the flow rate: 1ml/min. Results: Aesculin, aesculetin , fraxin , fraxetin in 0.3090～3.0900μg, 0.1275～1.2750μg, 0.0276～0.2760μg, 0.0540～0.5400μg (r=0.999) have a good linear relationship. Conclusion: This method is simple, rapid, good reproducibility, high accuracy, good chromatographic peak separation.秦皮来源为木犀科植物苦枥白蜡树、白蜡树、尖叶白蜡树或宿柱白蜡树的干燥枝皮或干皮。
中药中香豆素类化学成分的提取分离技术
亲水性较强 亲水性强
两相溶剂萃取法
1、原理 ：利用混合物中各种成分在两相互不相溶的溶
剂中分配系数的差异而达到分离的目的。
1）分配系数（K值）与萃取次数的关系
K=C u/C l K值与萃取次数成反比， K值越大，
萃取次数越少，反之越多 各种成分在两相当中溶质的浓度相差越大，即分 配系数K差异越大，则分离效果就越好。
可获得顺邻羟桂皮酸的衍生物，而不再闭环成内酯。
（四）荧光性
香豆素母体本身即无取代的香豆素并无荧光。羟 基香豆素类化合物在紫外光下大多显蓝色或蓝绿色荧 光，在碱液中更加显著，尤其是C7羟基香豆素，甚至
在日光下也可辨认。若在C8或C6再引入羟基，则荧光
减弱。引入甲氧基后荧光也将减弱，颜色转变为紫色。
三、检识方法
植物成分结构类型 亲脂性强 亲脂性较强 适于提取溶剂 叶绿素、脂肪油、挥发油 石油醚 游离生物碱、苷元、甾类、 乙醚、氯仿 萜类、某些有机酸
中偏小 某些苷类 (如强心苷等)
中等 极性 中 等 某些苷类 (如黄酮苷类)
氯仿-乙醚 (2:1)
乙酸乙酯
某些苷类 (如蒽醌苷、皂 中偏大 正丁醇 苷等)
极性大的苷、糖类、氨基 丙酮、乙醇、甲 酸等 醇 蛋白质、粘液汁、糖类、 氨基酸、无机盐、苷类 水
异香豆素可认为是邻羧基苯乙烯醇的内酯， 香豆素的异构体。
（五）其它香豆素类
α-吡喃环上有取代基的 香豆素类。C3、C4上常有苯 基、羟基、异戊烯基等取代。 C3苯代香豆素生源同黄酮。
三、生理活性
1.毒性：肝毒性 。必要结构：呋喃环上的双键和不饱和内酯环。
2. 抗菌作用：秦皮中的七叶内酯和七叶内酯苷具抑制痢疾杆菌的
二、理化性质
（一）性状
HPLC法测定秦皮中香豆素类成分的含量_刘丽梅
津ODS柱进行分析,原儿茶酸的保留时间基本一致,样品分离情况良好。
2.7 样品的测定:按2.4项制备供试品溶液,分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10L L,注入液相色谱仪,用峰面积按外标法计算,几批市场上购得的五味子药材中原儿茶酸的含量结果见表2。
表1 五味子中原儿茶酸含量测定结果Table1 Protocatechuic acid in S.chinensis产地原儿茶酸/(mg・g-1)RSD/% 辽 宁-10.2210.7 辽 宁-20.2380.5 河 北0.0990.8 吉 林0.130 3.6 0208010.204 1.3 0110010.398 1.7 0211010.303 1.0 韩 国0.2760.23 讨论3.1 分别采用甲醇-水-酸、乙腈-水-酸的流动相系统进行分析,发现乙腈-水-酸系统的分离效果较甲醇-水-酸好。
在流动相中加入醋酸铵可使原儿茶酸保留时间缩短,并改善原儿茶酸和相邻组分的分离。
用二级管阵列检测器检测,发现原儿茶酸在224、258、295nm处均有最大吸收,其中258nm处吸收最强,故选择258nm为检测波长。
3.2 提取溶剂的选择:曾采用乙醇-水、水系统进行提取,发现水煎法比较费时费力,且和最终采用的乙醇-水超声提取的测定结果相比,结果偏低,故未采用水煎法。
分别用10%、30%、50%乙醇作为提取溶剂,结果以50%乙醇为溶剂的测定结果最高,且10%、30%乙醇的提取物有大量的絮状物。
故采用50%乙醇作为提取溶剂加入1%冰醋酸可以提高提取率。
3.3 提取条件的优化:对放置时间和超声提取时间等条件进行了优化,结果表明,放置1h和放置3h 测定结果无明显差别,故选择放置1h。
放置1h后分别超声20、30m in后测定,结果基本一致,可以认为超声20min已提取完全。
3.4 测定结果表明,从市场上购买及雅安三九药业有限公司提供的8个五味子样品中均含有原儿茶酸,原儿茶酸的质量分数在0.1～0.4mg/g。
秦皮总香豆素不同提取工艺对比研究
秦皮总香豆素不同提取工艺对比研究目的考察不同提取工艺对秦皮总香豆素提取率及主要香豆素活性成分含量的影响，以确定其适宜的提取工艺。
方法采用正交设计法，以综合指标秦皮总香豆素提取率为考察指标，分别以水和醇作为溶剂，对秦皮提取工艺进行优选。
结果秦皮水提取最佳工艺：秦皮饮片加9倍量水，煎煮3次，每次煎煮1.5 h。
水提取秦皮出膏率为28.87%，总香豆素含量为19.26%、提取率为5.56%，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素总含量为13.47%。
秦皮醇提取最佳工艺：秦皮饮片用8倍量75%乙醇回流2次，每次2 h。
醇提取秦皮出膏率为30.47%，总香豆素含量为21.72%、提取率为6.62%，秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素总含量为15.29%。
2种工艺对比，醇提取比水提取出膏率提高了5.54%，总香豆素含量提高了12.77%、提取率提高了19.06%，4种香豆素成分总含量提高了13.51%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
结论醇提取工艺各考察指标均优于水提取工艺，故应采用75%乙醇提取秦皮总香豆素，且工艺稳定。
Abstract：Objective To study the effects of different extraction processes on extraction rate of cortex fraxini total coumarin and active constitute percentage of major coumarin；To establish a proper extraction process. Methods Orthogonal design method was applied to set comprehensive index cortex fraxini total coumarin extraction rate as inspecting index. Water and alcohol were used as solvent respectively to optimize the extraction process of cortex fraxini. Results Optimal water extraction process：cortex fraxini decoction pieces mixed with nine times of water，decocted for three times，90 mins each time. The pasty fluid generating rate of cortex fraxini was 28.87%，total coumarin percentage was 19.26%，extraction rate was 5.56%，total percentage of Aesculin，Aesculetin，Fraxin，Fraxetin was 13.47%，when water was used as solvent. Optimal alcohol extraction process：cortex fraxini decoction pieces mixed with eight times of 75% ethyl alcohol，refluxed twice，two hours each time. The pasty fluid generating rate of cortex fraxini was 30.47%，total coumarin percentage was 21.72%，extraction rate was 6.62%，total percentage of Aesculin，Aesculetin，Fraxin，Fraxetin was 15.29%，when alcohol was used as solvent. It was found that using alcohol as solvent had a 5.54% higher pasty fluid generating rate，a 12.77% higher total coumarion percentage，a 19.06% higher total coumarin extraction rate，and a 13.51% higher percentage of total four coumarin constitutes than using water，with statistical significance. Conclusion Extraction process by using alcohol as solvent is better than using water. So the optimal and stable extraction process of cortex fraxini total coumarin is using 75% alcohol as solvent.Key words：cortex fraxini；extraction process；total coumarin；extraction rate秦皮产于我国东北、华北、华中、华西等地区[1-3]，有野生和栽培品种，资源相对充足，对于秦皮总香豆素的活性研究不断有新的发现，秦皮的开发利用大有潜力。
不同基原秦皮、香豆素单体抗菌作用对比研究
不同基原秦皮、香豆素单体抗菌作用对比研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：刘丽梅,王瑞海,陈琳,杨庆,翁小刚,孙建辉【摘要】目的研究4种基原秦皮提取物、5种香豆素单体、5种单体混合物、苦枥白蜡树树皮已知香豆素指纹区样品、未知成分指纹区样品的体外抑菌作用。
方法采用体外抑菌试验微量定量检测方法,测定最小抑菌浓度及最低杀菌浓度。
结果4种基原秦皮苦枥白腊树、尖叶白腊树、白腊树、宿柱白腊树树皮均有明显抑菌、杀菌作用,抑菌强度依次为：宿柱白腊树＞苦枥白腊树＞尖叶白腊树＞白腊树。
5种香豆素单体秦皮素、秦皮乙素对9种细菌均有明显抑菌、杀菌作用,秦皮甲素、秦皮苷对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌有一定抑菌、杀菌作用,抑菌作用依次为：秦皮素＞秦皮乙素＞秦皮甲素＞秦皮苷＞6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素。
苦枥白腊树树皮提取物对所试9种细菌均有明显抑菌作用；单体混合物、已知香豆素指纹区样品对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、卡他菌有明显抑菌作用；未知成分指纹区样品对金黄色葡萄球菌有明显抑菌作用,对表皮葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌也有一定抑菌作用。
结论秦皮抑菌强弱与已知香豆素成分含量高低基本一致。
秦皮中苷元的抑菌作用优于苷,5种香豆素类单体中秦皮素、秦皮乙素抑菌作用最强。
【关键词】秦皮；香豆素；抑菌作用Abstract：Objective To study bacteriostasis in vitro of 4 kinds of origins ash bark extract, 5 kinds of coumarin monomer, 5 kinds of monomer mixture, known coumarin fingerprint region sample and unknown component fingerprint region of Fraxinus rhynchophylla Hance. Methods Bacteriostasis experiment in vitro and microamount and quantitative detection methods were adopted to measure minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). Result Four kinds of origins ash bark including Fraxinus rhynchophylla Hance, Fraxinus chinensis Roxb. var. acuminata Lingelsh., Fraxinus chinensis, Fraxinus stylosa Lingelsh. had obvious bacteriostasis and bactericidal action, bacteriostasis intensity order was Fraxinus stylosa Lingelsh. ＞Fraxinus rhynchophylla Hance＞Fraxinus chinensis Roxb. var. acuminata Lingelsh. ＞Fraxinus chinensis. Five kinds of coumarin monomer：fraxetin, aesculetin had obvious bacteriostasis and bactericidal action, aesculin and fraxin had certain bacteriostasis and bactericidal action to Staphylococcus aureus, Staphylococcusepidermidis. Bacteriostasis and bactericidal action order was fraxetin＞aesculetin＞aesculin＞fraxin＞6,7-dicho- methoxyl-8-Hydroxycoumarin. Fraxinus rhynchophylla Hance extract had obvious bacteriostasis to 9 kinds of bacterium；monomer mixture and coumarin fingerprint region sample had obvious bacteriostasis to Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, beta streptococcus, aeruginosus Bacillus, Bacillus coli, Klebsiella pneumoniae, catarrh. Unknown component fingerprint region sample had obvious bacteriostasis to Staphylococcus aureus and certain bacteriostasis to Staphylococcus epidermidis, alpha streptococcus, beta streptococcus, Bacillus coli, salmonella. Conclusion The changes of ash bark bacteriostasis were basically identical with known coumarin component content. Aglycone bacteriostasis of ash bark was superior to glycoside, fraxetin and aesculetin bacteriostasis were most powerful in 5 kinds of coumarin monomer.Key words：ash bark；coumarin monomer；bacteriostasis秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树Fraxinus chinensis Roxb.、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh.、宿柱白蜡树Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮,具有清热燥湿、收涩、明目的功能,用于热痢、泄泻、赤白带下、目赤肿痛、目生翳膜等。
香豆素信息
秦皮为常用中药,《神农本草经》列为上品。
药典(2005年版)规定秦皮为木犀科植物苦水曲柳Fraxinus mandschurica Ｒupr．是一种落叶乔木，是我国东北特有的白蜡属树种之一，为优质木材，水曲柳皮只在民间作为抗风湿的偏方使用记载可做秦皮代用品（枥白蜡树Fraxinus rhynchophyllaHance.、白蜡树F.chinensisRoxb.、尖叶白蜡树F.szaboanaLingelsh.、宿柱白蜡树F.stylosaLingelsh.的干燥枝皮或干皮。
），却没有被充分开发利用。
目前水曲柳野生资源已经枯竭，被列为国家二级保护的渐危种。
白蜡属的其他几个树种具有与其互补的一些优点。
本研究拟通过当地水曲柳与绒毛白蜡、小叶白蜡和美国白蜡的不同种源和不同无性系之间的杂交，整合白蜡属的基因资源，使几个树种的优良性状相互补充，利用杂种优势筛选出优良的杂种F1基因型，获得品质更优良，耐盐碱性更强和适应范围更广的杂交F1新品种。
通过杂交取得杂交种子，是杂交育种的开始，而不是结束。
杂种经过培育、鉴定和选择，最后选育出优良杂交品种，才能实现杂交育种的目的。
白蜡属种间杂交汇集亲本的许多优良性状，前期工作已经证明杂交种在抗旱、耐盐及生长性状均显示出明显的杂种优势，但尚未对种子性状进行研究。
本研究旨在通过对杂交种的种子性状（千粒重、翅长、翅宽及萌发率等方面）变化进行分析，这对于揭示杂交种在发芽、生长等方面的优势，具有一定的理论和实践意义。
香豆素，又称双呋喃环和氧杂萘邻酮，英文名称为coumarin，是白蜡属树种中重要的次生代谢产物。
实验研究发现香豆素类化合物的共同结构是4-羟基香豆素，多为无色结晶，味苦，具特异香气，不仅是重要的香料，而且具有抗HIV、抗癌、降压、抗心律失常、抗骨质疏松、镇痛、平喘、及抗菌等多种生物学活性，具有潜在的药用价值，其中抗肿瘤作用是一大研究热点。
水曲柳树皮中含有很多种次生代谢产物（香豆素是其中一种），可以用作中药秦皮的替代物。
秦皮实验
秦皮中香豆素类成分的提取与分离秦皮为木樨科苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla、白蜡树Fraxinus chinensis、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana、宿柱白蜡树Fraxinus stylosa的干燥枝皮或干皮。
功能清热燥湿善治湿热泄泻及痢疾对湿热痹症亦有清湿热、宣痹止痛之效。
现代研究证明秦皮具有抗炎镇痛和降低血尿酸的作用，用于治疗痛风疗效甚佳，其有效成分为秦皮甲素（Esculin）、秦皮乙素（Esculetin）等香豆素类成分。
一、已知成分物理性质1.秦皮甲素（Esculin，又名七叶苷）：白色针状结晶，熔点:204℃-206℃,溶于甲醇，乙醇和乙酸，可溶于沸水。
也易溶于稀碱液，并显蓝色荧光。
2.秦皮乙素（Esculetin，又名七叶内酯）：淡黄色针状晶体(稀醇)或黄色叶状结晶(真空升华)，熔点：271-273°C，易溶于甲醇,乙醇和冰醋酸，可溶于丙酮，不溶于乙醚和水。
也易溶于稀碱液，并显蓝色荧光。
二、实验目的1、掌握香豆素与木质素的结构特点与理化性质。
2、掌握蒸馏法、萃取法和结晶法的操作方法及注意事项。
3、熟悉荧光实验与异羟肟酸铁实验鉴别七叶苷与七叶内酯的原理。
4、熟悉薄层色谱的操作流程。
三、实验原理七叶苷、七叶内酯均能溶于沸乙醇，可用沸乙醇将二者提取出来，用氯仿洗涤去除脂溶性杂质，再利用二者在乙酸乙酯中的溶解性不同而分离之。
四、实验流程五、实验方法1.乙醇总提取物的制备方法一：取秦皮粗粉150g，用95%乙醇回流提取三次（500ml回流1h ,200ml回流两次，每次1h）。
合并乙醇液，抽滤，减压回收乙醇至浸膏状（乙醇回收至无醇味）。
方法二：取秦皮粗粉150g于索氏提取器中，加400ml乙醇回流10-12小时，得乙醇提取液，减压回收溶剂至浸膏状，即得总提取物。
2、香豆素成分的分离（一）七叶内酯的分离与纯化在上述浸膏中加40ml水加热溶之。
移于分液漏斗中，以等体积氯仿萃取二次，将氯仿萃取过的水层蒸去残留氯仿后加等积乙酸乙酯萃取二次，合并乙酸乙酯液，以无水硫酸钠脱水，减压回收溶剂至干。
秦皮中香豆素的提取分离与鉴定实验报告
秦皮中香豆素的提取分离与鉴定实验报告实验目的：1.了解秦皮中香豆素的化学性质；2.学习提取分离秦皮中香豆素的方法；3.通过对香豆素的鉴定，验证提取分离的成果。
实验原理：香豆素（Cumarin）是一种有香气的天然有机化合物，具有抗菌、抗炎、抗肿瘤和抗氧化等多种生物活性。
秦皮是一种药用植物，据报道其根部中含有香豆素。
本实验通过常规的提取分离方法将秦皮中的香豆素提取出来，并通过紫外光谱鉴定提取物中的香豆素。
实验步骤：1.称取一定质量的秦皮样品，研磨成细末，并过筛备用；2.取一定量的秦皮粉末，用乙醇浸泡，反复搅拌，使其充分浸润，并在温暖的环境中静置一段时间；3.将浸泡过的秦皮浸液过滤，过滤液收集备用；4.将收集到的过滤液转移到蒸馏仪中，将乙醇蒸馏掉，得到香豆素提取物；5.将提取物溶于适量的乙醇，得到稀溶液；6.取适量的稀溶液用紫外-可见光谱仪进行测试，测定其紫外吸收曲线，并与标准品对比分析。
实验结果：1.经提取分离后，得到了秦皮中香豆素的提取物；2.通过紫外-可见光谱仪测定，提取物在250 nm处显示出明显的吸收峰。
实验讨论：1.秦皮中的香豆素成功被提取出来，并通过紫外光谱鉴定实验证明；2.该提取方法的效果相对较好，但提取率还有待进一步提高；3.通过进一步对提取物进行其他分析方法的鉴定，可以对提取物中的香豆素进行更准确的定量和鉴定。
实验结论：本实验成功地提取分离了秦皮中香豆素的提取物，并通过紫外光谱鉴定验证了提取物的成分。
香豆素作为一种天然的有机化合物，在多个领域具有广泛的应用前景。
本实验为后续对香豆素的进一步研究提供了基础和参考。
单元设计-秦皮中香豆素的提取与分离-20190517
（2）加入40ml氯仿，进行萃取，去除树 题，指导。
脂等脂溶性杂质。
提问萃取注
意事项。
注意事项
萃剂原液互不溶，质 溶程度不相同。充分 振荡再静置，下放上 倒切分明。
14
重结晶
学生
（1）将挥去氯仿的水层加入乙酸 乙酯进行萃取。 （2）乙酸乙酯萃取液蒸干，加入 甲醇重结晶，得黄色针状晶体七叶 内酯。 （3）水液加入甲醇重结晶，得微 黄色针晶七叶苷。
秦皮粗粉
12
滤过-浓缩
学生
（1）将滤纸叠成4折后，置于漏斗 中，滤纸边缘应低于漏斗边缘 （2）将圆底烧瓶中溶液倾倒入漏 斗中，进行过滤至小锥形瓶中 （3）减压蒸馏，浓缩
教师
学生易犯错误
观察发 过滤时做不到三 现问题， 低；使用减压蒸 指导。 馏装置时水泵与
加热的顺序颠倒
13
氯仿萃取
学生
教师
（1）将浓缩物加入40ml蒸馏水，并加热。 观察发现问
95%EtOH200ml,回流1小时，药渣再重复两次
乙醇提取液
减压蒸馏浓缩至无醇味
浓缩物
加蒸馏水40ml,加热溶解，滤过
水溶液
加等体积CHCl3萃取
CHCl3
水层
（树脂等脂溶性杂质） 挥去CHCl3，用等体积EtOAc萃取三次
EtOAc萃取液
加适量无水硫酸钠
残留物
温热甲醇，浓缩至适 量，放置析晶，滤过
知识支撑
香豆素类与异羟 肟酸铁的反应原 理
17
薄层色谱
学生
教师
（1）将样品与对照品分别用毛细 血管吸取适量点于硅胶GF254板的适 当位置，将板置于色谱缸中。 （2）准确量取三氯甲烷-甲醇-甲酸 （6:1:0.5)并置于干燥洁净的具塞量 筒中混合后，加入色谱缸中进行展 开。 （3）展开结束时，取出色谱板， 标记溶剂前沿，挥干溶剂后，置于 紫外灯下观察，记录荧光斑点，得 出结论。
香豆素类化合物的研究进展
香豆素类化合物的研究进展（天然药物化学课程论文）2015年1月10日香豆素类化合物的药理及毒理作用摘要：香豆素类化合物广泛分布于植物界中，存在于芸香科、伞形科、菊科、豆科、瑞香科、茄科等高等植物中，在动物及微生物代谢产物中也有存在。
香豆素的生理活性多种多样，具有镇痛抗炎、抗艾滋病、抗肿瘤、抗氧化、降压、抗心律失常等多种药理作用。
香豆素类化合物分子量较小，合成相对简单，生物利用度高，近年来的研究发现，香豆素类化合物在啮齿类动物中存在着明显的毒性作用，且具有种属和位点特异性，这与其代谢途径和CYP2A6 酶的多态性有关。
另外，毒性作用还与给药剂量和给药途径密切相关，口服和高剂量给药更容易产生毒性反应。
由于香豆素及其衍生物结构的特殊性，其药理及毒理作用成为国内外持续研究的热点。
关键词：香豆素，药理，毒理，进展1 药理作用1．1抗肿瘤作用杨秀伟等应用人鼻咽癌细胞株 KB 和人白血病细胞株 HL－60筛选40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。
结果显示马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有一定程度的抑制作用，且呈浓度效应关系;伞形花内酯和牛防风素对人白血病细胞株 HL－60细胞的生长有一定程度的抑制作用。
周则卫等用蛇床子素给小鼠灌胃后观察抑瘤率和胸腺、脾指数及肝重量变化。
结果表明蛇床子素体外和体内对实验肿瘤均有明显的抗肿瘤活性，而且在给药剂量下实验动物未出现任何毒性反应。
蛇床子素对3种瘤谱均有明显的抑瘤效果并且对小鼠的肝、脾指数和胸腺指数几乎无影响;而阳性对照药顺铂组对小鼠的肝、脾指数、胸腺指数有着明显的损伤。
结果显示蛇床子素有可能研制成为一种低毒、高效的抗肿瘤新药。
1． 2 抗氧化作用天然和合成的一些香豆素类化合物具有良好的抗氧化和清除自由基的功能。
文献报道，一些香豆素类化合物能够影响ROS的形成和清除，从而影响自由基介导的氧化损伤。
许多研究表明这种天然的抗氧化剂具有多种药理作用，如神经保护、抗肿瘤、抗诱变和抗炎作用，这些作用均与其抗氧化活性有关。
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秦皮提取物中香豆素类成分含量测定方法研究叶迎;柏冬;包强;王瑞海;刘丽梅【摘要】目的分别建立秦皮提取物总香豆素和4种主要香豆素成分紫外分光光度法(UV)和高效液相色谱法(HPLC)含量测定方法.方法采用UV,以秦皮甲素为对照品,在334 nm测定秦皮提取物总香豆素的含量;采用HPLC,用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.01%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,在334 nm测定秦皮提取物中秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素4种主要香豆素成分的含量.结果秦皮甲素的质量浓度在5.76~23.04μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.6%(RSD=1.8%);4种香豆素成分秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素的质量分别在0.055 0~3.850 0μg(r=0.999 7)、0.053 9~3.773 0μg(r=0.999 8)、0.060 0~0.660 0μg(r=0.999 9)、0.0562~0.618 2μg(r=0.999 9)范围内线性关系良好,平均回收率分别为96.97%(RSD=1.26%)、100.80%(RSD=2.22%)、99.04%(RSD=2.47%)、98.77% (RSD=1.94%).结论 2种含量测定方法简便、准确、可靠,可用于秦皮提取物总香豆素和主要香豆素成分的质量控制.%Objective To establish a UV spectrophotometry method and an HPLC method respectively for the determination of the total content of coumarin and contents of four main constituents of coumarin in Fraxini Cortex extract.Methods UV spectrophotometry was used for the determination of the content of total coumarin in Fraxini Cortex extract. The reference substance was Aesculin, and the maximum ultraviolet absorption wavelength was 334 nm. The HPLC method was used to determine the contents of Aesculin, Fraxin, Aesculetin and Fraxetin in Fraxini Cortex extract, using gradient elutionwith acetonitrile-phosphate solution (0.01%) as mobile phase on Agilent ZORBAX SB-C18 chromatographic column (4.6 mm × 250 mm, 5μm) at room temperature.Results For the UV method, the linear range of the mass concentration of Aesculin was 5.76-23.04μg/mL (r=0.999 9), and the average recovery was 100.6% (RSD=1.8%). For the HPLC method, the linear ranges of the mass of Aesculin, Fraxin, Aesculetin and Fraxetin were 0.055 0-3.850 0μg (r=0.9997), 0.053 9-3.773 0μg (r=0.999 8), 0.060 0-0.660 0μg (r=0.999 9), and 0.056 2-0.618 2μg (r=0.999 9), respectively, and the average recoveries were 96.97% (RSD=1.26%), 100.80% (RSD=2.22%), 99.04% (RSD=2.47%), and 98.77% (RSD=1.94%), respectively.Conclusion Both of the two methods are simple, accurate and reliable, and can be used for the quality control of total coumarin and the main constituents of coumarin in Fraxini Cortex extract.【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2015(022)008【总页数】5页(P83-87)【关键词】秦皮提取物;香豆素;紫外分光光度法;高效液相色谱法;含量测定【作者】叶迎;柏冬;包强;王瑞海;刘丽梅【作者单位】中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;甘肃省中医院,甘肃兰州 730050;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京100700【正文语种】中文【中图分类】R284.1秦皮,《神农本草经》将其列为上品。
2010年版《中华人民共和国药典》规定秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树Fraxiinus rhynchhophylla Haance、白蜡树hinensisRoxb.、尖叶白蜡树F.szaboaana Linngelsh.或宿柱白蜡树FF.stylosa LLingelsh.的干燥枝皮或干皮。
研究表明,,秦皮的主要有效成分为香豆素类化合物[[1]。
药理研究发现,秦皮提取物能够保护小鼠急性肝损伤[2],对辐射所致脂质过氧化反应有明显的抑制作用[3],对大鼠实验性脂肪肝有一定治疗作用[4]。
目前对于秦皮药材中香豆素类成分的含量测定方法已有报道[[5-6],而秦皮提取物中总香豆素和主要香豆素成分含量测定方法未见报道。
本实验室从秦皮药材中提取分离出6种香豆素类成分[7--9],其中秦皮甲素、秦皮苷、秦皮乙素、秦皮素含量较高[10]。
为此,本研究分别采用紫外分光光度法(UV)和高效液相色谱法(HPLC),以秦皮总香豆素和4种主要香豆素成分为质量控制指标,建立秦皮提取物含量测定方法,为秦皮的深入研究开发奠定基础。
Agilent 11100高效液相色谱仪((美国安捷伦), Agilent ZORBAAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 µm,美国安捷伦),88453紫外-可见分光光度计(美国安捷伦)),CX-250超声波清洗机(天海双龙医疗设备有限公司)),CP2202S电子天平(瑞士梅特勒-托利多)。
秦皮提取物为中国中医科学院中医基础理论研究所中药分析实验室自制,分别为苦枥白蜡树枝皮采用75%乙醇提取的醇提取物,以及水煎煮提取的水提取物。
秦皮甲素、秦皮乙素对照品购自中国食品药品检定研究院,批号分别为110741-2000506、110740-2000104；秦皮苷(HPLC纯度＞98%)、秦皮素(HPLC纯度＞98%)为中国中医科学院中医基础理论研究所中药分析实验室自制。
乙腈为色谱纯(Fisher公司),其他试剂为分析纯,水为纯净水。
2.1 总香豆素含量测定2.1.1 对照品溶液的制备精密称取秦皮甲素对照品1.44 mg,置于5 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为288μg/mL的对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备取秦皮醇提取物10 mmg,精密称定,置锥形瓶中,精密加甲醇10mL,密塞,称定质量,超声处理(功率250W,频率200Hz)30 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,过滤,精密量取续滤液1.0 mL,置于10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2.1.3 测定波长的选择取秦皮甲素对照品溶液和“2.1.2”项下供试品溶液,以甲醇为空白,按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)分光光度法,在200～500 nm 进行扫描,光谱图见图1。
由图可见,对照品溶液和供试品溶液在334 nm处均有最大吸收,故选择334 nm作为测定波长。
2.1.44 标准曲线的制备精密量取“2.11.1”项下秦皮甲素对照品溶液0.20、0.35、0.50、0.665、0.80 mL,分别置于10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,以甲醇为空白,按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)分光光度法,在3344 nm波长处测定吸光度,结果分别为0.211、0.365、00.531、0.686、0.857。
以吸光度为纵坐标,秦皮甲素浓度(μg/mL)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程AA＝0.037 3C－0.007 7, r＝00.999 9(n＝5),表明秦皮甲素在5.76～23.04 μg/mLL范围内线性关系良好。
2.1.55 精密度考察精密量取“2.1.4”项下对照品溶液((14.40 μg/mLL),以甲醇为空白,按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)分光光度法,在334 nm波长处测定吸光度,连续测定6次,结果分别为0.548、0.5355、0.522、0..535、0.5399、0.532。
对照品溶液在334 nnm处吸光度平均值为0.535,RSD＝1.6%(n＝6),说明仪器精密度良好。
2.1.66 稳定性考察精密称定秦皮醇提物10.01 mg,按“22.1.2”项下方法制备供试品溶液。
以甲醇为空白,按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)分光光度法,分别于0、2、44、6、8 h在334 nm波长处测定吸收度,结果分别为00.398、0.405、0.392、00.394、0.406。
供试品溶液在334 nm处吸光度平均值为00.399, RSD＝1.6%,说明供试品溶液8 h内稳定性良好。
2.1.7 重复性考察取同一批次的秦皮醇提取物样品约10 mg,,共6份,精密称定,按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,以甲醇为空白,按2010年版《中华人民共和国药典》(一部)分光光度法,在334 nm波长下测定吸光度,结果分别为0.421、0.409、0.412、0.394、0.399、0.413,RRSD＝1.5%(nn＝6),说明本方法重复性良好。