甲基对硫磷降解菌
甲基对硫磷降解菌的分离鉴定及水解酶基因克隆表达
甲基化检测原理及步骤 DNA实验技术方法汇总
DNA亚硫酸氢盐修饰和纯化操作步骤修饰设计：使用CpGenome TM kit使胞嘧啶转化为尿嘧啶的步骤如下。中等温度碱性pH下使DNA变性成为单链形式暴露出碱基。试剂一，一种包含亚硫酸氢根的钠盐，可使未甲基化的胞嘧啶磺化和水解脱氨，产生一种尿嘧啶磺酸盐中间产物。然后DNA在另一种盐﹙试剂二﹚存在的条件下与一种微粒载体﹙试剂三﹚结合，并通过重复离心和在70%的乙醇中重悬浮脱盐。向尿嘧啶的转化是通过在90%的乙醇中反复碱性脱磺酸基作用和脱盐完成的。DNA最终在TE缓冲液中通过加热从载体上洗脱下来。 第一步：试剂准备 （1）3 M NaOH原料（用前现配） 把1g干NaOH片剂溶解在8.3mL水中。使用此类腐蚀性碱，注意小心谨慎和实验操作。 （2）20 mM NaOH/90% EtOH（用前现配） 配制1mL该溶液需：900μl 100%的乙醇，93.4μl水，6.6μl 3M的氢氧化钠。 （3）溶解试剂Ⅰ（用前现配） 打开前将试剂瓶加温至室温。对每份待修饰的样本，称取0.227g DNA修饰试剂Ⅰ加入0.571mL水中。充分涡旋振荡混合。使用该试剂时要小心谨慎，因为它对呼吸系统和皮肤有刺激性。用大约20μl 3M NaOH调整pH至5.0，用pH试纸检测pH值。试剂Ⅰ避光保存以免分解。为了最佳效果，试剂应在配置后立即使用。 （4）溶解试剂Ⅱ 打开前将试剂瓶加温至室温。将1μl β-巯基乙醇加入20mL去离子水中。每份待修饰的DNA样本需将750μl该溶液加入到1.35g DNA修饰Ⅱ。充分混合确保完全溶解。过量的试剂可用箔纸包裹的容器、2℃-8℃、避光保存长达6周。 第二步：DNA修饰程序 1、在带有螺旋形瓶盖的1.5-2.0mL的微量离心管中：将7.0μl 3M NaOH加入到含有1.0 μg DNA的100μl水中（10ng/μl），混匀。 注意：如果样本含有的DNA量不到1.0μg，就向样本DNA中加入2 μl DNA修饰试剂Ⅳ并加水至总体积100μl。再加入7.0μl 3M NaOH并混匀。 2、50℃ DNA孵育10分钟（加热块或水浴）
土样中淀粉降解细菌的筛选综述
土样中淀粉降解细菌的筛选（设计性实验） 一、实验目的 1.掌握土壤样品中微生物菌种分离和筛选技术的实验设计方案。 2.掌握富集、平板稀释涂布法、分离筛选产淀粉酶菌株的基本原理。 3.初步掌握从土壤样品中分离筛选产淀粉酶菌株的基本技术。 二、实验原理 在自然条件下，产淀粉酶的细菌和其它各种细菌混杂生活在土壤中，要想分离出来必须建立相应的“筛子”。淀粉酶能使淀粉分解成葡萄糖，而淀粉与碘液发生反应形成蓝色化合物。葡萄糖不与碘液发生反应形成蓝色化合物，结果可使淀粉酶产生菌周围形成透明圈，从而筛选出淀粉酶产生菌。 微生物酶产生菌的筛选具体分为增殖培养、初筛和复筛过程。增殖培养是通过控制培养基的营养成分和/或培养条件使样品中的目的菌得以大量繁殖,而非目的菌的生长受到抑制或繁殖减缓,从而提高样品中目的菌的数量和比例。初筛是对所得的纯种进行检测。由于淀粉酶是胞外酶，在分离培养基中加适量可溶淀粉通过平板透明圈法来检测淀粉酶产生菌。筛选透明圈比值大的菌株接种到培养基中进行培养，再进行复筛。复筛的目的是淘汰底产菌。 三、实验材料 1、培养基：蛋白胨， NaCl，可溶性淀粉，琼脂，蒸馏水。 2、玻璃仪器: 培养皿10副，试管10支，三角瓶 6个，移液管 10支（1mL7支,10mL 3支），100mL量筒2个,玻璃棒，玻璃珠。 3、其它：酒精灯，硅胶塞,包装绳，包装纸,PH试纸，接种环，电子天平，称量纸,高压蒸汽灭菌锅，摇床，角匙，记号笔等。 四、方法与步骤 1、土壤样品: 食品厂、粮食加工厂、饭店等日常接触淀粉较多的肥沃土壤。 2、培养基的制备 (1)液体培养基：称取蛋白胨1.0 g、NaCl 0.5 g、可溶性淀粉0.2 g溶于装有100 mL蒸馏水的三角瓶中，调pH为7.2至7.4，分装为2个三角瓶,50mL/个,包扎，121℃高压蒸汽灭菌20分钟。 (2)固体淀粉培养基：称取蛋白胨1.5g， NaCl 0.75g，可溶性淀粉0.3g ，溶于
除草剂阿特拉津生物降解研究进展_董春香
除草剂阿特拉津生物降解研究进展 董春香 姜桂兰 (吉林大学朝阳校区化学系,长春130026) 摘 要 本文综述了近年来国内外在阿特拉津降解菌及降解途径方面的研究进展,及在微生物产生的阿特拉津降解酶、其操作基因方面的研究现状,并提出了阿特拉津生物降解的研究趋势。 关键词 除草剂 阿特拉津 生物降解 Progress in study of biodegradation of the herbicide atrazine Dong Chunxiang Jiang Guilan (Departm ent of Chemistry,Jilin University,Changchun130026) A bstract The summary of current prog ress in studies on microo rganisms,pathways, sy stem of enzy mes and genetic operatio n of biodeg radation of atrazine at home and abroad is presented.The trend of research in biodegradation of atrazine is put forw ard too. Key words herbicide;atrazine;biodegradation 1 引 言 除草剂阿特拉津(Atrazine)又名莠去津,全称为2-氯-4-乙胺-6-异丙胺-1,3,5-三嗪,是一种广泛使用的除草剂。阿特拉津是选择性内吸传导型苗前、苗后除草剂,用于玉米、高粱、甘蔗、果树、林地等,可防除一年生禾本科杂草和阔叶杂草,对某些多年生杂草也有一定的抑制作用[1]。 目前,阿特拉津在世界各国得到了大面积使用。在美国,阿特拉津被列为使用最广泛的除草剂之一。在1980—1990年间,每年喷洒阿特拉津达8000万磅[20]。1986年,瑞典全国施用了120t的阿特拉津[2]。1980年,全球释放到环境中的阿特拉津总计9×104t[2]。阿特拉津虽然是一种低毒除草剂,但在土壤中具有中等持留性,其半存留期长达4—57周[3,4]。由于其广泛使用,该化合物及其降解产物已在地表水[2,5,6]、地下水[7]、雨水[8]、大气[9]中检测出来,其浓度远远超过美国环保局规定的安全浓度[10],造成对环境的污染。 阿特拉津具有一定的生物毒性,达到一定浓度时,能抑制多种藻类的光合作用及生长[11],使鱼体内的Ca2+、Mg2+等无机离子浓度显著下降,导致其重要的生理功能发生紊乱。当浓度达到3μg/L时,可使小鼠的染色体受损,杀死水底节肢动物[12]。通过食物链富集会危害人类健康。20世纪60年代以来,许多国家均致力于寻找高效降解阿特拉津的微生物。到目前为止,已分离出能彻底降解阿特拉津的单菌株[13,14]。阿特拉津生物降解机理的研究也获得了迅速发展。近两年来,国内也开始了阿特拉津生物降解的研究报道[15,16]。 第2卷第3期环境污染治理技术与设备Vol.2,N o.3 2001年6月T echniques and Equipment fo r Environmental Pollution Co ntrol Jun.,2001
甲基化检测方法
甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法） 第一部分基因组DNA的提取。 这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA 应该是完整的。 此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。 使用两者的细节： 1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml； 2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。两者均于-20度保存。验证提取DNA的纯度的方法有二： 1：紫外分光光度计计算OD比值； 2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。 我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。 第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA 如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。 1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul； 2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH； 3：42℃水浴30min； 水浴期间配制： 4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色） 5：3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。 7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。 8：50℃避光水浴16h。 一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以后收，时间上很合适。 这一步细节： 1：基因组DNA的量不需十分精确，宁多勿少，因为在以后纯化回收步骤中会有丢失，且此方法修饰最多可至4ug。 2：所有试剂均须新鲜配制，所以配液的技术要过关，既要快，又要精确。 3：亚硫酸氢钠溶液呈强酸性，一定用碱将PH调制5.0，否则PH不合适会影响后续纯化吸收。
石油降解菌的分离
从环境样品中分离筛选石油 降解菌的方案
引言 随着经济技术的迅速发展，石油日渐成为我过的主要能源，且需求量日益增大。研究表明，石油生产和运输环节会对土壤造成严重污染，且污染面积不断扩大。目前，我国石油行业每年产生的含油污泥多大八十万吨。由于石油的粘度大、粘滞性强，会再短时间内形成小范围的高浓度污染，长期的石油污染还会影响土壤的通透性，减少土壤肥力，阻碍植物生长。同时，石油中所含的多环芳香烃具有“三致”效应，一些挥发组分能引起人体麻醉、窒息和化学性肺炎等疾病。因此，石油污染对土壤生态系统的平衡和人体健康都有很大的危害。 目前，针对石油污染治理的方法主要包括：物理方法、化学方法以及生物修复法，但物理方法修复费用较高，耗材较多：化学方法会使用大量化学淋洗剂，很容易造成二次污染。相较而言，微生物修复技术由于生产费用低、不产生二次污染等特点而被视为一项最具有应用前景的修复技术。而且随着分子生物学的发展，无论是DNA文库的建立，还是多态性分析方法的进步，都为污染物的生物修复提供了全新的技术支持。既然生物修复法有诸多优点，那么就应该充分发挥其特性。本文则是着眼于环境样品，分离筛选其中的石油降解菌，以扩大培养进行更大规模的石油降解。 摘要 在长期被石油污染的土壤中，微生物可逐渐改变自身的代谢条件以适应环境。即以石油烃为碳源进行生长、繁殖，同时将石油烃降解。因此在这种土壤中存在着可降解石油烃的微生物，但石油烃降解菌的筛选、分离是生物法处理石油污染的关键。从这个角度考虑，以长期石油污染的土壤中微生物为菌源，从中筛选、分离出高效的石油烃降解菌。要降解哪里的石油就用哪里的土壤培养石油降解菌。目前，国内对极端条件下石油降解微生物研究较少，尤其是对低温、耐盐的石油降解菌，中国北方的大部分湿地，盐碱程度比较高，成年气温较低。无论是来源于海上还是来源于石油化工的污染都比较严重。本文针对大连开发区因石油泄露而被污染的白石湾，就地选取材料进行石油降解菌的筛选以及分离研究。
卡拉胶降解菌的筛选
卡拉胶降解菌的筛选 摘要：利用梯度稀释平板涂布的方法将经过富集的卡拉胶降解菌样品在涂布于 平板上，以卡拉胶为唯一碳源，在适宜的环境下培养，得到单个菌落，达到卡 拉胶降解菌的初步筛选的目的。 关键字：卡拉胶降解菌、初筛 前言：卡拉胶(Carrageenan)又名角叉菜胶、鹿角藻胶，是从红藻中提取的一种高分子亲水性多糖。根据其乳糖残基上硫酸酯基团的不同，可分为K一型、c-型、A一型、弘一型等7种最小重复结构单位。A一卡拉胶是一种高硫酸酯化的天然多糖资源，其降解产物A一卡拉胶寡糖的活性研究已得到充分的开展，如抗凝血、抗病毒、抗肿瘤等[1]。国内外的研究者从提取、结构、活性等方面对卡拉胶进 行了研究[2]。而不同的卡拉胶具有不同的凝固性和表面活性，可用于凝固剂黏 合剂、稳定剂、乳化剂、悬浮剂等，广泛用于食品工业。[3] 正文： 一．器材：试管16支，玻璃涂棒一根，1ml移液管3支，酒精灯一个，培养皿24个，试管架，1个锥形瓶，烘箱，高压杀菌锅 二．试剂：K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O,FePO4·4H2O,CaCl2, H2O，NaNO3,NaCl卡拉胶，海水 三．步骤： 1.卡拉胶降解菌的初筛： （1）无机盐母液配制： K2HPO4·3H2O: 2.2g , MgSO4·7H2O: 1.25g ,FePO4·4H2O: 0.025 g , CaCl2: 0.25g 然后溶于水中，共配制250ml; [4] （2）培养基溶液配：NaNO3：0.7g , NaCl：5.25g ，卡拉胶：4.2g ， 溶于海水中，共配制350ml，并添加无机盐母液：35ml[5]
阿特拉津降解菌Pseudomonas sp.ZXY-1的分离鉴定及降解动力学
第５０卷 第２期２０1８年２月 哈 尔 滨 工 业 大 学 学 报ＪＯＵＲNAＬＯＦHAＲＢIN INＳＴIＴＵＴE ＯＦＴEＣHNＯＬＯＧY Vｏl.５０Nｏ.２Ｆｅｂ.２０1８ ＤＯI：1０.11９1８／ｊ.ｉｓｓn.０３６7-６２３4.２０1６1２０８８阿特拉津降解菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．ＺＸＹ－１的 分离鉴定及降解动力学 赵昕悦1，２，马 放1，２，杨基先1，２，王 立1，２ （1.哈尔滨工业大学环境学院，哈尔滨1５００９０；２.城市水资源与水环境国家重点实验室（哈尔滨工业大学），哈尔滨1５００９０）摘 要：为深化微生物修复技术在阿特拉津降解中的应用，从受农药污染的土壤中分离出一株高效阿特拉津降解菌株ＺXY -1.经鉴定（形态特征二生理生化特征二1６ｓｒＲNA 序列分析）ＺXY -1为假单胞菌属（Pｓｅｕｄｏmｏｎａｓ）.研究表明，ＺXY -1在11ｈ内可完全降解初始质量浓度为1００ｍｇ／Ｌ的阿特拉津，降解效率为９.０９ｍｇ／（Ｌ?ｈ）.同时，实验得到ＺXY -1的最适生长条件分别为温度 ３０?二ｐH ８.０二摇床转速1５０ｒ／ｍｉn 二接种量３％.在最适生长条件下，阿特拉津初始质量浓度２０ ８０ｍｇ／Ｌ内，菌株ＺXY -1的降解符合一级动力学方程；在1００ ２５０ｍｇ／Ｌ内，菌株ＺXY -1的降解符合零级动力学方程.随着初始阿特拉津质量浓度的升高，菌株ＺXY -1的生长受到抑制作用，在降解过程中菌株细胞的生长符合Hａlｄａnｅ生长抑制模型，其相关动力学参数为μｍａx ＝０.６９６ｈ-1，Ｋｓ＝９８.５５ｍｇ／Ｌ，Ｋｉ＝14２.６ｍｇ／Ｌ.本研究菌株可为含有阿特拉津工农业废水的生物修复提供可行性选择.关键词：阿特拉津；细菌；分离鉴定；降解特性；动力学 中图分类号：X５９２文献标志码：A 文章编号：０３６7-６２３4（２０1８）０２-００８２-０7Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｎａｔｒａｚｉｎｅ-ｄｅｇｒａｄｉｎｇｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．ＺＸＹ－１）ａｎｄｉｔｓｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｎｄｋｉｎｅｔｉｃｓｔｕｄｉｅｓ ＺHAＯXｉnｙｕｅ1，２，MA Ｆａnｇ1，２，YANＧＪｉxｉａn 1，２，WANＧＬｉ1，２ （1.Ｓｃｈｏｏl ｏｆEnvｉｒｏnｍｅnｔ，Hａｒｂｉn InｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈnｏlｏｇｙ，Hａｒｂｉn 1５００９０，Ｃｈｉnａ；２.ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＵｒｂａn WａｔｅｒＲｅｓｏｕｒｃｅａnｄEnvｉｒｏnｍｅnｔ（Hａｒｂｉn InｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈnｏlｏｇｙ），Hａｒｂｉn 1５００９０，Ｃｈｉnａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：A nｅｗａｔｒａｚｉnｅ-ｄｅｇｒａｄｉnｇｓｔｒａｉn nａｍｅｄＺXY -1ｗａｓｉｓｏlａｔｅｄｉn ｔｈｅｐｒｅｓｅnｔｓｔｕｄｙ.ＺXY -1ｗａｓｉｄｅnｔｉｆｉｅｄａｓPｓｅｕｄｏmｏｎａｓｂａｓｅｄｏn ｔｈｅｐｈｙｓｉｏ-ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａl ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａnｄ1６ｓｒＲNA ｇｅnｅｓｅｑｕｅnｃｅａnａlｙｓｉｓ.Ｔｈｅnｅｗlｙｉｓｏlａｔｅｄｓｔｒａｉn ｈａｄａｓｔｒｏnｇａｂｉlｉｔｙｔｏｂｉｏｄｅｇｒａｄｅａｔｒａｚｉnｅｏｆ1００ｍｇ／Ｌｃｏｍｐlｅｔｅlｙｗｉｔｈｉn 11ｈ，ｗｉｔｈａｄｅｇｒａｄｉnｇｒａｔｅｕｐｔｏ９.０９ｍｇ／（Ｌ四ｈ）.Ｔｈｅｏｐｔｉｍａl ｃｏnｄｉｔｉｏnｓｆｏｒａｔｒａｚｉnｅｄｅｇｒａｄａｔｉｏn ｗｅｒｅｃａｐｔｕｒｅｄ：ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ３０?，ｐH ８.０，vｅlｏｃｉｔｙｏｆｓｈａkｅｒ1５０ｒ／ｍｉn ａnｄｉnｏｃｕlｕｍｓ３％.Aｔｒａｚｉnｅｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏn，ｕnｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏnｄｉｔｉｏnｓ，ｆｉｔｔｅｄｔｈｅｆｉｒｓｔ-ｏｒｄｅｒkｉnｅｔｉｃｅｑｕａｔｉｏn ｗｈｅn ｔｈｅｉnｉｔｉａl ａｔｒａｚｉnｅｃｏnｃｅnｔｒａｔｉｏn ｒａnｇｅｄｆｒｏｍ２０ｍｇ／Ｌｔｏ８０ｍｇ／Ｌ，ａnｄｔｈｅｚｅｒｏ-ｏｒｄｅｒkｉnｅｔｉｃｅｑｕａｔｉｏn ｗｈｅn ｔｈｅｉnｉｔｉａl ａｔｒａｚｉnｅｃｏnｃｅnｔｒａｔｉｏn ｒａnｇｅｄｆｒｏｍ1００ｍｇ／Ｌｔｏ２５０ｍｇ／Ｌ.Ｔｈｅkｉnｅｔｉｃａnａlｙｓｉｓｉnｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｒａｉn ＺXY -1ｃｅll ｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｅｃｔlｙｓｕｉｔｅｄHａlｄａnｅｍｏｄｅl ｗｉｔｈμｍａx ，ＫｓａnｄＫｉｏｆ０.６９６ｈ-1，９８.５５ａnｄ14２.６ｍｇ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉvｅlｙ.Ｏvｅｒａll，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏvｉｄｅｄａn ｅｆｆｉｃｉｅnｔｂａｃｔｅｒｉｕｍａnｄａｐｐｒｏａｃｈｔｈａｔｍｉｇｈｔｓｅｒvｅａｓａvｉａｂlｅｂｉｏｒｅｍｅｄｉａｔｉｏn ｓｏlｕｔｉｏn ｔｏｔｒｅａｔｔｈｅａｔｒａｚｉnｅｗａｓｔｅｗａｔｅｒ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｔｒａｚｉnｅ；ｂａｃｔｅｒｉｕｍ；ｉｓｏlａｔｉｏn ａnｄｉｄｅnｔｉｆｉｃａｔｉｏn；ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏn ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ；kｉnｅｔｉｃ 收稿日期：２０1６-1２-２０ 基金项目：国家重点研发计划（２０1６YＦＣ０4０11０５）； 水体污染控制与治理科技重大专项（２０1２ＺX０7２０1００３） 作者简介：赵昕悦（1９９０ ），女，博士研究生； 马 放（1９６３ ），男，教授，博士生导师； 杨基先（1９６4 ），男，教授，博士生导师 通信作者：杨基先，ｙａnｇxｊ＠ｈｉｔ.ｅｄｕ.ｃn；王 立，ｗlｉ＠ｈｉｔ.ｅｄｕ.ｃn 中国作为农业大国，农药的施用量逐年增加.近年来，因不合理使用及其难生化降解特性，农药常伴 随着地表径流二干沉降和湿沉降等途径进入地表水 和地下水，造成严重污染.阿特拉津（２-氯-4-乙胺 基-６-异丙胺基-1，３，５-三嗪）是一种人工合成的化学除草剂，广泛应用于世界范围内，并严重危害自然界动植物的安全［1-4］.在污水处理领域，如何高效降解阿特拉津是当前的热点问题.微生物修复技术因其成本低二不产生二次污染等特点已成为降解阿特拉津的重要技术之一.自２０世纪８０年代以来，至 少存在1９个属的微生物被证明具有降解阿特拉津 的能力，包括节杆菌属二红球菌属二不动杆菌属二假单胞菌属二根瘤菌属二诺卡氏菌属等［５-９］.然而，截至目前，能够高效降解阿特拉津的菌种资源非常有限.例如，PｏｏｊａＢｈａｒｄｗａｊａ等［1０］分离出的假单孢菌属EＧＤ-AＫN５能够将阿特拉津完全降解为二氧化碳，但其降解速率较低，难以进一步推广至实际应用.因万方数据
除草剂阿特拉津_Atrazine_的环境行为综述
第5卷第2期1997年4月 环境科学进展 ADV ANCES IN ENVIRONM ENTAL SCIENCE V o l.5,No.2 Apr.,1997除草剂阿特拉津(Atrazine)的环境行为综述 弓爱君 叶常明 (中国科学院生态环境研究中心,北京 100085) 摘要 阿特拉津(2-氯-4-乙胺基-6-异丙氨基-1,3,5,-三氮苯)是目前应用广泛的化学除草剂之 一。在世界许多国家和地区的地表水和地下水中已检出了阿特拉津的残留物。阿特拉津对人 类的威胁究竟有多大,已成为目前研究的热点。本文从阿特拉津的检测方法、动力学性质、生 化性质及风险评估四个方面进行了综述,并提出了自己的观点。 关键词:除草剂 阿特拉津 综述 一、引 言 阿特拉津,又名莠去津,分子式:C8H14ClN5,分子量215.69,结构式: 阿特拉津为无色晶体,熔点173～175℃,蒸汽压40.00 Pa(20℃),溶解度33ppm。阿特拉津是选择性内吸传导型苗前、苗后除草剂,适用于玉米、高粱、果园和林地等,可防除一年生禾本科杂草和阔叶杂草,对某些多年生杂草也有一定的抑制作用[1]。 本世纪中叶,为了提高单位面积上的粮食产量,各种农药相继被开发出来。粮食生产率得以大幅度提高。特别是除草剂的使用,极大地减轻了劳动强度,直接或间接地提高了农业的生产水平。 但是,很快就发现许多农药稳定性强、残留期长并且难于降解。通过食物链的传递会对人体健康带来影响。因此,很多农药已被逐渐淘汰。例如:日本于1971年开始全面地禁止和使用DDT、六六六、对硫磷及2,4-D。在欧美各国也已禁止使用或者规定了严格的使用规程[2]。 一些污染性强的农药被淘汰,同时一些低毒、高效、性能优良的农药不断被开发出来。阿特拉津是在1952年由Geigy化学公司开发的一种除草剂,1958年申请瑞士专利,1959
DNA甲基化检测技术全攻略
DNA甲基化检测技术全攻略 近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术，少说也有十几种。大致可以分为两类：特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析，后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面大家介绍一些常用的方法。 特异位点的甲基化检测 甲基化特异性PCR(MS-PCR) 这种方法经济实用，无需特殊仪器，因此是目前应用最为广泛的方法。在亚硫酸氢盐处理后，即可开展MS-PCR。在传统的MSP方法中，通常设计两对引物，一对MSP引物扩增经亚硫酸氢盐处理后的DNA模板，而另一对扩增未甲基化片段。若第一对引物能扩增出片段，则说明该检测位点存在甲基化，若第二对引物能扩增出片段，则说明该检测位点不存在甲基化。 这种方法灵敏度高，可用于石蜡包埋样本，且不受内切酶的限制。不过也存在一定的缺陷，你要预先知道待测片段的DNA序列，并设计出好的引物，这至关重要。另外，若存在亚硫酸氢盐处理不完全的情况，那可能导致假阳性。 亚硫酸氢盐处理+测序 这种方法一度被认为是DNA甲基化分析的金标准。它的过程如下：经过亚硫酸氢盐处理后，用PCR扩增目的片段，并对PCR产物进行测序，将序列与未经处理的序列进行比较，判断CpG位点是否发生甲基化。这种方法可靠，且精确度高，能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态，但需要大量的克隆测序，过程较为繁琐、昂贵。 联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA) DNA样本经亚硫酸氢盐处理后，利用PCR扩增。扩增产物纯化后用限制性内切酶(BstUI)消化。若其识别序列中的C发生完全甲基化(5mCG5mCG)，则PCR扩增后保留为CGCG，BstU I能够识别并进行切割;若待测序列中，C未发生甲基化，则PCR后转变为TGTG，BstUI识别位点丢失，不能进行切割。这样酶切产物再经电泳分离、探针杂交、扫描定量后即可得出原样本中甲基化的比例。 这种方法相对简单，可快速定量几个已知CpG位点的甲基化，且需要的样本量少。然而，它只能获得特殊酶切位点的甲基化情况，因此检测阴性不能排除样品DNA中存在甲基化的可能。 荧光定量法(Methylight) 此种方法利用TaqMan? 探针和PCR引物来区分甲基化和未甲基化的DNA。首先用亚硫酸氢盐处理DNA片段，并设计一个能与待测位点互补的探针，随后开展实时定量PCR。这种方法最大的优势在于其高通量和高敏感性，且无需在PCR后电泳、杂交等操作，减少了污染和操作误差。 Qiagen就提供了多种预制的MethyLight分析。EpiTect MethyLight PCR Kit包括了两条甲基化敏感的TaqMan探针和2条甲基化不敏感的PCR引物。随着目标序列甲基化状态的不同，只有FAM标记的亚硫酸氢盐转化的甲基化DNA特异的TaqMan探针，或只有VIC
实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定课件.doc
实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定 一、实验目的 1、掌握微生物分离纯化的基本操作； 2、掌握用选择性培养基从环境中分离苯酚降解菌的原理和方法； 3、掌握微生物对酚降解能力的测定方法； 4、掌握4-氨基安替比林法测定苯酚含量的方法。 二、实验原理 在工业废水的生物处理中，对污染成分单一的有毒废水，可以选育特定的高效菌株进行处理。这些高效菌株以有机污染物作为其生长所需的能源、碳源或氮源，从而使有机污染物得以降解，具有处理效率高、耐受毒性强等优点。 苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。本实验通过筛选苯酚降 解菌来处理含酚废水，将苯酚降解为为二氧化碳和水，消除对环境的污染。 + COOHCH2CH2COOH CH3COOH C O2+H2O 从环境中采样后，在以苯酚为唯一碳源的培养基中，经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定，可筛选出高效酚降解菌。 三、实验器材与试剂 1、样品 实验土样采自校园污水处理厂。 2、器材 恒温培养箱、恒温摇床、分光光度计、比色皿、试管、250mL三角瓶、100mL 容量瓶、培养皿、涂布玻棒、量筒、天平、灭菌锅、酒精灯、接种环、棉花、棉 线、牛皮纸、pH 试纸。 3、试剂 葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、苯酚、四硼酸钠（Na2B4O7）、4-氨基安替比林、过硫酸铵（（NH4）2S2O8）、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、琼脂。
苯酚标准溶液：称取分析纯苯酚 1.0g，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL，摇 匀。此溶液溶度为1000mg/L。测定标准曲线时将苯酚浓度稀释至100mg/L。 Na2B4O7 饱和溶液：称取N a2B4O7 40g，溶于1L 蒸馏水中，冷却后使用，此 溶液的pH值为10.1。 3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g，溶于蒸馏水中， 并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。 2% （NH4）2S2O8 溶液：称取分析出（NH4）2S2O8 2g，溶于蒸馏水中，并稀 释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。 4、培养基 富集培养基：蛋白胨0.5g，K2HPO4 0.1g，MgSO4 0.05g，水1000mL，调节pH 7.2-7.4，高压蒸汽灭菌，冷却后视需要添加适量的苯酚。 基础培养基：K2HPO4 0.6g，KH2PO4 0.4g，NH4NO3 0.5g，MgSO4 0.2g，CaC2l 0.025g，水1000mL，调节pH 7.0-7.5，高压蒸汽灭菌，冷却后视需要添加适量的苯酚。 四、实验步骤 （一）富集培养和驯化 采集活性污泥或土样，接种于装有100mL 富集培养基和玻璃珠并加有适量 苯酚（50mg/L）的三角瓶中，30℃振荡培养。待菌生长后，用无菌移液管吸取 1mL 转至另一个装有100mL 富集培养基和玻璃珠并加有适量苯酚的三角瓶中， 如此连续转接2-3 次，每次所加的苯酚量适当增加，最后可得酚降解菌占绝对优 势的混合培养物。 （二）平板分离和纯化 1、用无菌移液管吸取经富集培养的混合液10mL，注入90mL无菌水中，充 分混匀，并继续稀释到适当浓度。 2、取适当浓度的稀释菌液，加一滴于固体平板（由富集培养基加入2%的琼 脂组成，倒平板时添加适量的苯酚，浓度达到200 mg/L。）中央，用无菌玻璃涂 棒把滴加在平板上的菌液涂平，盖好皿盖，每个稀释度做2-3 个重复。 3、室温放置一段时间，待接种菌液被培养基吸收后，倒置于30℃恒温箱中 培养2-3d。 4、挑选不同菌落形态，在含适量苯酚的固体平板上划线纯化。平板倒置于
农药常见的各种使用方法简介
农药常见的16种使用方法 根据目前农药加工不同的剂型种类，施药方法也不尽相同，现常用的方法有以下16种。 （1）喷粉法。喷粉是利用机械所产生的风力将低浓度或用于细土稀释好的农药粉剂吹送到作物和防治对象表面上，它是农药使用中比较简单的方法。但要求喷撒均匀、周到，使农作物和病虫草的体表上覆盖一层极薄的粉药。用手指轻摸叶片能看到有点药粉沾在手指上为宜。喷粉法的优点：①操作方便，工具比较简单；②工作效率高；③不需用水，可不受水源的限制，就可做到及时防治；④对作物一般不易产生药害。但也有一定的缺点：①药粉易被风吹失和易被雨水冲刷，因此，药粉附着在作物表体的量减少，缩短药剂的残效期，降低了防治效果。②单位耗药量要多些，在经济上不如喷雾来得节省。③污染环境和施药人员的本身。（2）喷雾法。将乳油、乳粉、胶悬剂、可溶性粉剂、水剂和可湿性粉剂等农药制剂，对入一定量的水混和调制后，即能成均匀的乳状液、溶液和悬浮液等，利用喷雾器使药液形成微小的雾滴。其雾滴的大小，随喷雾水压的高低、喷头孔径的大小和形状、涡流室大小而定。通常水压愈大、喷头孔径愈小、涡流室愈小，则雾化出来的雾满直径愈小。雾滴覆盖密度愈大且由于乳油、乳粉、胶悬剂和可湿性剂等的展着性、粘着性比粉剂好，不易被雨水淋失，残效期长，与病虫接触的药量的机会增多其防效也会愈好。50年代前，主要采用大容量喷雾每亩每次 喷药液量大于50升，但近10多年来喷雾技术有了很大的发展，主要是超低容量喷雾技术在农业生产上得到推广应用后，喷药液量便向低容量趋势发展，每亩每次喷施药液量只有0.1~2升。目前国外工业比较发达的国家，多采用小客量喷雾方法，因其有许多优点：①用药液量少；②用工少；③机械动力消耗少；④工效高；⑤防治效果高；③经济效益高。 （3）毒饵法。毒饵主要是用于防治为害农作物的幼苗并在地面活动的地下害虫。如小地老虎以及家鼠、家蝇等卫生害虫。它是利用害虫、鼠类喜食的饵料和农药拌合而成，诱其取食，以达到毒杀目的。例如，每亩可用90％晶体敌百虫1两，溶于少量水中，拌入切碎的鲜草40干克，在傍晚成堆撒在棉苗或玉米苗根附近，其防效很显著。作毒饵的饵料，麦麸、米糠、玉米屑、豆饼、木屑、青草和树叶等都可以，不管用哪一种作饵料，都要磨细切碎，最好把这些饵料炒至能发出焦香昧，然后再拌和农药制成毒饵（鼠类和家蝇的饵料中最好还要加些香油或糖等），这样可以更好地诱杀害虫和鼠类、家蝇等。此外毒谷主要也是用来防治蝼蛄、金
蒙脱石介导的阿特拉津催化降解机理研究
蒙脱石介导的阿特拉津催化降解机理研究 本研究以阿特拉津(Atrazine,ATRA)和蒙脱石为主要研究对象,研究了蒙脱石对ATRA光降解的影响,以此为基础,开发出能够快速降解ATRA的“环境功能材料”,结合量子化学手段对ATRA分子“光降解”和“功能材料催化降解”过程中的降解特性进行了研究,为环境中ATRA及类似有机污染物污染治理和控制提供 科学方法和理论依据。论文首先研究了自然光照条件下,铁蒙脱石 (Fe3+-montmorillonite)产生的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)降解阿特拉津的过程,起主要作用的ROS是羟基自由基(·OH),因为淬灭实验表明甲醇(Methanol)能够强烈抑制反应,且苯甲酸(Benzoic acid,BA)在系统内的反应产物为对羟基苯甲酸(para-hydroxyl benzoic acid,pHBA),是BA与·OH反应的特征产物。 ·OH的产生受pH控制,钠离子(Na+)的加入会提升光催化效率,是因为离子交换作用所致。阴离子对反应的影响由种类和浓度控制,若为惰性的高氯酸根(ClO4-),则没有影响;若配位阴离子为氯离子(Cl-),则表现出“低促高抑”的特性。 综合考虑阴阳离子的影响,可知在低浓度的NaCl条件下,离子交换占主导,表现为促进反应,而在较高浓度的NaCl条件下,Cl-与·OH反应形成Cl·自由基,该自由基不能降解阿特拉津,从而降低了光反应效率,此时Cl-的抑制作用强于Na+的促进作用。自然光照下,富里酸(Suwannee River fulvic acid,SRFA)系统中的主要ROS是单线态氧(1O2),因为甲醇未抑制反应,而叠氮化钠则强烈抑制反应。 1O2的产生不受pH影响,不同pH条件下,ATRA降解速率没有显著差异。将
高效石油降解菌的筛选
海洋中高效石油降解菌的筛选 楼浩 04016158
摘要 本研究利用原油为唯一碳源，采用富集培养分离的方法从象山港的表层海水和底泥混合物中筛选到两株石油降解菌株F3和F4。通过检测，两种菌株在油浓度为2000mg·L-1、温度为28℃的条件下培养七天后，降解率分别达到了48.1%和51.3%，与目前已筛选出的海洋石油降解菌相比较，F3、F4均属于降解率较高的菌株。本研究还对营养盐、原油浓度等影响F3、F4菌株生长和降解率的相关因素进行了初步探讨。结果表明：①氮、磷营养盐在较大程度上限制了F3、F4菌株对原油的降解率，是主要的限制因子。在氮磷浓度≥1.0m g·L-1时，F3菌株才能达到最大的降解效率48.1%，在氮磷浓度≥1.5m g·L-1时，F4菌株才能达到最大的降解效率57.3%。②F4菌株的降解率随原油浓度的降低而增加。在原油浓度为400mg·L-1时，F3、F4菌株的降解率分别达到57.6%和61.5%，而在油浓度为4000 mg·L-1时，F3、F4菌株的降解率仅为27.5%、11.2%，相比之下F3菌株对原油浓度的耐受能力更强。 关键词：石油降解菌；筛选；原油降解率；氮磷营养盐；原油浓度
ABSTRACT The use of oil as the sole carbon source, using enrichment culture method from the surface water and sediment which in the Xiangshan Port isolated two strains of oil degradation, Named as F3 and F4. To detect these two strains in the oil concentration was 2000mg/L, the temperature is 28℃ training seven days ,The degradation rate respectively reached 48.1% and 51.3%, compared with that which has been selected marine oil degrading bacteria, F3, F4 belong to the higher efficiency degradation of crude oil strain. The issue also conducted a preliminary test about nutrients, oil concentration and so on which Impact F3, F4 strain growth and the degradation efficiency. The results showed that: ①nitrogen and phosphorus nutrient limitation to a greater extent on the F3, F4 strains degradation efficiency , is the main limiting factor. In the concentration of nitrogen and phosphorus ≥ 1.0mg/L, F3 strain to achieve normal degradation efficiency 48.1%, the concentr ation of nitrogen and phosphorus in ≥ 1.5 mg/L, F4 strains to reach the degradation efficiency is 57.3%. ② the degradation of the F4 strain increasing when the concentration of oil reduced. in the concentration of 400 mg/L, The degradation rate of F3, F4 strains respectively reached 57.6% and 61.5%, the concentration of oil in the 4000mg/L, The degradation rate F3, F4 strains of was only 27.5%, 11.2%, but compared with F4, F3 strains better adapted to the higher concentration of oil. Key Words: Petroleum Degrading strains; Screening;Degradation of oil;nutrients of nitrogen and phosphorus; Oil concentration
【2019年整理】农业部公告禁止使用农药品种应用清单
农业部公告禁止使用农药品种清单 为从源头上解决农产品的农药残留超标问题，农业部第199号公告规定，要加强甲胺磷等5种高毒有机磷农药登记管理，停止受理一批高毒、剧毒农药的登记申请，撤消一批高毒农药在一些作物上的登记，并公布国家明令禁止使用的农药品种清单如下： 一、国家明令禁止使用的农药：六六六、滴滴涕、毒杀芬、二溴氯丙烷、杀虫脒、二溴乙烷、除草醚、艾氏剂、狄氏剂、汞制剂、砷铅类、敌枯双、氟乙酰胺、甘氟、毒鼠强、氟乙酸钠、毒鼠硅。 二、在蔬菜、果树、茶叶、中草药材上不得使用和限制使用的农药甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺、甲拌磷、基异柳磷、特丁硫磷、甲基硫环磷、治螟磷、内吸磷、克百威、涕灭威、灭线磷、硫环磷、蝇毒磷、地虫硫磷、氯唑磷、苯线磷19种高毒农药不得用于蔬菜、果树、茶叶、中草药材上。三氯杀螨醇、氰戊菊酯不得用于茶树上。任何农药产品都不得超出农药登记批准的使用范围使用。 三、根据《农药管理条例》，严格按照《农药合理使用准则》的要求，在蔬菜生产过程中，科学合理使用农药。 （一）、禁止使用农药1、有机氯类：六六六、DDT、二溴氯丙烷、三氯杀螨醇、毒杀芬、赛丹等。2、有机磷类：甲基对硫磷（甲基1605）（含复配剂）、对硫磷（1605）（含复配剂）、甲胺磷（含复配剂）、久效磷（含复配剂）、磷胺（含复配剂）、氧化乐果、甲基异柳磷、高渗氧化乐果、增效甲胺磷、水胺硫磷、甲拌磷、克线丹、灭线磷、硫环磷、蝇毒磷、地虫硫磷、特丁硫磷、甲基硫环磷、治螟磷、内吸磷、氯唑磷、苯线磷等。3、氨基甲酸酯类：克百威、涕灭威等。4、其他农药：杀虫脒、除草醚、二溴乙烷、敌?克颗粒剂
等。 （二）、不提倡使用农药乙酰甲胺磷（含复配剂）、乐果 （三）、推荐使用农药及产品天然之宝、百草一号、灭虫灵、苏阿维、安打、美满、米满、农地乐、除尽、奥绿一号、菜喜、卡死克、抑太保、功夫、敌百虫、兴棉宝、赛波凯、一遍净、***乐、高效灭百可、辛硫磷、BT、海正三令、潜克、密达、护地净、菜园等。 四、无公害农产品禁用农药 1、六六六、滴滴涕 DDT 、毒杀芬、二溴氯丙烷、杀虫脒、二溴乙烷、除草醚、艾氏剂、狄氏剂、汞砷铅制剂、敌枯双、氟乙酰胺、甘氟、毒鼠强、氟乙酸钠、毒鼠硅等农药。 2、、限制使用农药种类根据作物种类不同，安全程度要求不同，对某些农药的使用范围进行进一步的限制，如溴氰菊酯、三氯杀螨醇禁止在茶叶使用，无公害农产品不得使用和限制使用的农药，甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷禁用作物蔬菜、果树、茶叶、中草药蔬菜。在粮食作物、经济作物生产中不使用国家禁止施用的农药，是保证无公害农产品的首要措施。国家禁止使用的农药名单如下：敌枯双、滴滴涕、二溴氯丙烷、二溴乙烷、杀虫脒、除草醚、氟乙酰胺、氟乙酸钠、毒鼠强（没鼠命）、甘氟、普特丹、培福朗、菊脂类农药。本省生产无公害稻米、蔬菜等农产品的实际需要出发，又在国家规定禁用农药名单中增加了一些禁用农药名单。禁用农药是：砷酸钙、砷酸铅、甲基胂酸锌（稻脚青）、甲基胂酸铵（田安）、福美甲胂、福美胂、三苯基醋酸锡、三苯基氯化锡、毒菌锡、氯化锡、氯化乙基汞（西力生）、酯酸苯汞、敌枯双、氟化钙、氟化钠、林丹、艾氏剂、狄氏剂、五氯酚钠、氯丹、甲拌磷、乙拌磷、甲胺磷、久效磷、甲基对硫磷、乙基对硫磷、乐果、治螟磷、蝇毒磷、水胺硫磷、磷胺、
多环芳烃高效降解菌的筛选.
多环芳烃高效降解菌的筛选 2011-01-18 摘要：以多环芳烃芘和苯并(a)芘为供试物,对多株土著菌和引进菌同时进行筛选试验.结果表明,引进菌经过驯化后对芘和苯并(a)芘都具有一定的降解能力,降解率在30%～80%,通过SPSS数理统计分析软件对数据进行处理后得出,引进细菌B61、B67、M-B和引进真菌Y219、Y220、M-Y作为固定化包埋的`菌种;土著菌对芘和苯并(a)芘的降解率可达40%～95%,经过筛选后确定,土著细菌B02、B07、B09和土著真菌F02、F05、F06作为固定化包埋的菌种.通过试验对上述各菌进行了生长曲线的测定,细菌和酵母菌的对数生长期是5～20 h,真菌的对数生长期是10～55 h,这为固定化微生物提供了一定的前提条件.作者：王 新李培军巩宗强张辉 V.A.Ver khozina WANG Xin LI Pei-jun GONG Zong-qiang ZHANG Hui V.A.Ver khozina 作者单位：王新,WANG Xin(中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁,沈阳,110016;沈阳工业大学理学院,辽宁,沈阳,110023) 李培军,巩宗强,张辉,LI Pei-jun,GONG Zong-qiang,ZHANG Hui(中国科学院沈阳应用生态研究所,辽宁,沈阳,110016) V.A.Ver khozina,V.A.Ver khozina(俄罗斯科学院西伯利亚分院闽诺格拉多夫地质研究所,伊尔库茨克,664033) 期刊：农业环境科学学报 ISTICPKU Journal：JOURNAL OF AGRO-ENVIRONMENT SCIENCE 年，卷(期)：2007, 26(z1) 分类号：X172 关键词：土著菌引进菌筛选对数生长期