鸡场抗体水平检测与解读分析

鸡场抗体检测与解读
抗体检测周报
PVM动保中心--出栏肉鸡抗体检测周报 公司 序号 客户 日龄 项目 MAX MIX 1 陈久长 41ds GMT CV% MAX 天津 2 李家来 42ds MIX GMT CV% MAX 3 刘广利 43ds MIX GMT CV% (第47周 11月16日--11月22日)
稀释 倍数
2×
4×
8×
16×
32×
64×
128×
256×
512×
1024×
2048×
血清 对照
结果
—
—
＋
＋＋
＋＋ ＋
＋＋ ＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
—
(1)一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。 (2)鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下， 须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。 (3)鸡群的HI抗体水平（血凝抑制滴度）是以抽检样品的HI抗体效价(log2)的几何平均值表 示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(log2)为8的有3份样品，为7的有5份样品， 为6的有2份样品，它们的平均值为：（ 8×3＋7×5＋6×2）/（3＋5＋2）＝7.1;平均水平 在4(10g2)以上，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太 大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百 分比决定免疫与否。 (4)大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1％一0.5％，小型鸡群，抽样率应 有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0％。 (5)鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示 鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。 （6）若有10%以上的鸡群出现11 (log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒 感染。若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(log2)的鸡群保护率为50%左右；在 4(log2)以上保护率达90-100%；在4(log2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为 43%。
50
50
50
50
50
结果
＋＋
＋
－
－
－
－
4
血凝试验（HA）结果判定
++++
+++
++
+
-
结果判定标准： 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。上表看出， 该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝 单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。 根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准 抗原，以备凝血抑制试验使用。
1、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水； 2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul； 3、第1－12孔内加入4个单位血凝抗原50ul（第12孔为病毒对照）； 4、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul； 5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 6、结果判定
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒 对照
2× 生理 盐水 血清 4单位抗原 红细胞
4×
8×
16×
32×
64×
128×
256×
512×
1024×
2048×
50
50 50 50 －
50
50 50 50 －
50
50 50 50 ＋
50
50 50 50 ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋
病 毒 颗 粒
红细胞
血凝效价测定步骤
1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2. 在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
50
50 50 50 ＋＋ ＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
弃50 50 50 －
结果
7
血凝抑制试验（HI）结果判定
结果判定标准同血凝试验（HA）。 将反应板倾斜成45度角，沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉 淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀 薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。能将4单位病毒物质凝集 红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价， 用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。如上例，该血清的红细胞凝 集抑制效价为1：4或HI效价为2(10g2)。
164
1070.5 53 1657 233 512.1 69
1432
1851.2 22 5698 1404 3131.6 37
237
1152.4 52 2746 72 532.0 101
血凝（HA）和血凝(HI)抑制试验-以新城疫为例
血凝试验（HA），目的：滴定病毒的血凝效价；原理：某些病毒或病毒的血凝素能选 择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直 接血凝反应。
免疫计划 1日龄 公司首免 9日龄 新支妥 瑞普 点眼
1日 公司首免 7日龄 新支妥 瑞普 点眼 21日龄 新威灵 梅里 亚 饮水 1日龄 公司首免 9日龄 新支妥 瑞普 点眼
0
1.4 100 3 1 1.3 58
0
1.0 0 0 0 1.0 0
0
1.0 173 6 1 1.7 91
4
5.9 27 7 2 3.6 42
HI
-4 3 1 1.8 27 2 -5 0 0 1.0 0 0 H9 1 0 1.0 212 1 ND 10 2 4.3 45 9 IBV 4699 388 1579.176 7 71.41654 5 2291 IBD 4553 1168 2296.2 41 2567
ELISA
REO 4556 878 1919.2557 51.549656 2822
2×
4×
8×
16×
32×
64×
128×
256×
512×
1024×
2048×
红细胞对照
生理 盐水
抗原
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
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50
50
50
50
弃50
红细胞
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋
50
血凝抑制试验（HI），目的，确定抗体水平；原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体 ，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒 颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI） 反应，也称血凝抑m late！
血凝抑制试验步骤